一种基因工程重组表达多肽的系统纯化方法技术方案

本发明专利技术公开了一种基因工程重组表达多肽的系统纯化方法，该纯化方法包括以下步骤：重组表达菌体的裂解、镍离子柱纯化方法、重组表达菌体的裂解的自裂解过程、疏水层析纯化步骤、反相色谱纯化步骤和切向流超滤浓缩。通过该基因工程重组表达多肽的系统纯化方法，可获得重组多肽的纯度高达97％以上。获得重组多肽的纯度高，非常适合工业化规模的量产。非常适合工业化规模的量产。非常适合工业化规模的量产。

【技术实现步骤摘要】
一种基因工程重组表达多肽的系统纯化方法


[0001]本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种基因工程重组表达多肽的系统纯化方法。

技术介绍

[0002]生物制药是利用生物活体来生产药物的方法。随着生物技术的发展，人工制备的生物原料成为当前生物制药原料的主要来源。生物制药技术作为战略性新兴产业技术，发展迅猛，在制药工艺中广泛应用。现代生物制药特点是以基因工程为主导，包括细胞工程、发酵工程、酶工程和组织工程等技术的应用。多肽药物是指通过化学合成、基因重组或动植物中提取的具有特定治疗作用的多肽。多肽药物是国内外新药研发的重要方向。融合蛋白是指通过基因重组技术，将两种或多种蛋白质(或其结构域)的编码区连接起来，进行表达产生的一种新蛋白质。
[0003]随着生物制药的发展，基因工程重组蛋白的分离纯化技术显得尤为重要，快速特异地将目标蛋白从复杂的宿主菌中分离纯化出来，要求选择合适的蛋白纯化技术与方法。因为若要研究蛋白质的性质和功能，必须获得纯度较高的蛋白质，如果重组蛋白作为药物使用则需极高的蛋白质纯度，融合标签技术是20世纪末兴起的一种基于报告本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因工程重组表达多肽的系统纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：S110：重组表达菌体的裂解：先用菌体裂解缓冲液A将湿重的菌体进行重悬，以叶片式搅拌器搅拌均匀，实验在冰浴中操作，然后使用均质机，将搅拌均匀的菌体重悬液进行高压均质，完成高压均质后，将菌体裂解液离心，收集上清，最后用深层滤膜过滤；S120：镍离子柱纯化步骤：采用镍离子纯化胶体填充层析柱，以五倍于柱体积平衡缓冲液B平衡柱子，菌体裂解液上样量为八倍于柱体积，然后以七倍于柱体积平衡缓冲液B洗涤，最后用八倍于柱体积洗脱缓冲液C洗脱柱进行目的产物的收集；S130：重组表达菌体的裂解的自裂解过程：将镍离子柱洗脱下来的样本称重定量，然后用蠕动泵缓慢泵入缓冲液D中，进行稀释并调节pH至10.0，放置于25℃恒温箱中自裂解反应，然后离心收集上清，最后用滤膜过滤；S140：疏水层析纯化步骤：采用疏水层析胶体填充层析柱，以五倍于柱体积的平衡缓冲液E平衡柱子，裂解过滤液上样体积十倍于柱体积，然后以五倍于柱体积平衡缓冲液E洗涤纯化柱，最后以四倍于柱体积的纯化水洗脱收集目的产物，并加入浓度20mM的碳酸氢铵，调节pH至9.0；S150：反相色谱纯化步骤：采用反相色谱介质填充层析柱，以二倍于柱体积的平衡缓冲液平衡柱子，向疏水层析纯化步骤收集的洗脱液中加入终浓度为10％的乙醇，并上样体积1300mL，然后以二倍于柱体积的平衡缓冲液洗涤柱子，最后以缓冲液F与缓冲液G拉线性梯度洗脱；S160：切向流超滤浓缩：将反相色谱纯化收集到的样本进行切向流系统超滤，以一进一出的方式，使用相当于渗过流率的流速加入缓冲液H进行连续式稀释，共置换十倍的反相色谱纯化步骤所洗脱的体积。2.根据权利要求1所述的一种基因工程重组表达多肽的系统纯化方法，其特征在于：所述重组表达菌体裂解所采用的菌体裂解缓冲液A为2mM乙二胺四乙酸、25mM咪唑、5...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐展平，田竣元，何印波，黄娟，吴玉水，
申请(专利权)人：福建基诺厚普生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：