一种酶标板及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种酶标板及其制备方法和应用。所述酶标板包括固相载体和修饰于所述固相载体表面的功能层，所述功能层包括接枝共聚物，所述接枝共聚物的功能单体包括N

【技术实现步骤摘要】
一种酶标板及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生命科学
，涉及一种酶标板及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]酶联免疫吸附(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯(PS)等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。ELISA方法是免疫研究的重要组成部分，该方法可分为三类：夹心法、间接法和竞争法，所述三类方法均须进行包被操作，即将抗原或抗体包被于固相载体表面。
[0003]增强抗原或抗体等蛋白质生物分子与酶标板固相载体的结合力能够有效提高ELISA测试的灵敏度和稳定性。因此，近年来酶标板固相载体的选择和对固相载体进行表面改性成为该领域研究人员的关注热点。酶标板固相载体表面改性的常用方法包括涂覆功能层、化学修饰、紫外线照射或伽玛射线照射等。
[0004]CN103275272A公开了一种96孔酶标板AOZ分子印迹聚合膜的制备方法，使用模板分子AOZ、功能单体2
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乙烯吡啶和交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯在96孔酶标板表面形成大小、形状及功能基团与模板分子匹配的“记忆空穴”，所述“记忆空穴”可以与混合物中待分离的模板分子发生特异性的亲和作用，但该方法仅提高了特异性，并未提高酶标板对蛋白质分子的吸附作用，且仅能针对一种特定的目标物质，适用范围小。
[0005]CN105418955A公开了一种聚氯乙烯表面改性方法，所述方法使用含有自由基引发剂与聚氯乙烯表面修饰分子的聚氯乙烯表面改性剂对聚氯乙烯进行表面改性，能够增强聚氯乙烯表面亲水性能，但并未增强对蛋白质的吸附作用。
[0006]综上所述，现有的改性方法获得的改性材料仍存在功能层强度低、稳定性差和功能单一以及加工过程的可控性和一致性不足等问题，这将可能影响ELISA测试的准确性、灵敏度和稳定性，阻碍ELISA在不同领域的应用和发展。因此，针对提高固相载体功能层的强度、稳定性以及对蛋白质的吸附作用等的表面改性方法亟待研究开发。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种酶标板及其制备方法和应用，所述酶标板包括固相载体和修饰于所述固相载体表面的功能层，所述功能层能与抗原或抗体等蛋白质生物分子产生较强的吸附作用，能够提升酶联免疫吸附测定过程中酶标板的包被效果。
[0008]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供一种酶标板，所述酶标板包括固相载体和修饰于所述固相载体表面的功能层，所述功能层包括接枝共聚物，所述接枝共聚物的功能单体包括N
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十八烷基丙烯酰胺和/或N
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(3
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二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺。
[0010]本专利技术的酶标板中，所述功能层含有疏水基团或携带电荷，疏水基团可以与蛋白质分子的疏水区产生结构相似相容的吸附作用，所携带的电荷能与携带电荷的蛋白质分子
产生静电吸附作用，因此，所述功能层能与抗原或抗体等蛋白质分子产生较强吸附作用，提升了所述酶标板包被抗原或抗体等蛋白质分子的效果。
[0011]优选地，所述固相载体包括聚苯乙烯。
[0012]优选地，所述接枝共聚物为N
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十八烷基丙烯酰胺和N
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(3
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二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺经接枝共聚形成的聚合物。
[0013]本专利技术中，N
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十八烷基丙烯酰胺的疏水基团可与蛋白质生物分子的疏水区产生较强的吸附作用，而N
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(3
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二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺的氨基基团在水溶液中可与蛋白质生物分子产生较强的静电吸附作用，二者相互配合，进一步增强酶标板对蛋白质的吸附作用。
[0014]优选地，所述N
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十八烷基丙烯酰胺和N
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(3
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二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺的质量比为(0.5～1):1，包括但不限于0.6:1、0.65:1、0.7:1、0.8:1、0.9:1或0.95:1。
[0015]本专利技术中，通过控制N
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十八烷基丙烯酰胺和N
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(3
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二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺的质量比为(0.5～1):1，能够更进一步增强酶标板对蛋白质的吸附作用。
[0016]第二方面，本专利技术提供一种第一方面所述的酶标板的制备方法，所述制备方法包括：
[0017]将固相载体进行清洗处理和干燥处理，放入真空等离子体处理设备中，抽真空，向反应室通入工艺气体并加入功能单体，进行真空等离子体处理，得到所述酶标板。
[0018]优选地，所述清洗处理包括依次使用无水乙醇和蒸馏水进行清洗。
[0019]优选地，所述清洗处理在超声清洗机中进行。
[0020]优选地，所述无水乙醇的清洗时间为8～12min，包括但不限于9min、10min或11min。
[0021]优选地，所述蒸馏水的清洗时间为8～12min，包括但不限于9min、10min或11min。
[0022]优选地，所述抽真空至10～17Pa，包括但不限于11Pa、12Pa、13Pa、15Pa或16Pa。
[0023]优选地，所述工艺气体包括氩气。
[0024]优选地，所述真空等离子体处理的功率为60～80W，包括但不限于62W、65W、68W、70W、72W、75W或78W。
[0025]优选地，所述真空等离子体处理的时间为5～8min，包括但不限于6min、6.5min、7min或7.5min。
[0026]作为优选的技术方案，所述酶标板的制备方法包括以下步骤：
[0027](1)将固相载体依次用无水乙醇和蒸馏水在超声波清洗机中分别清洗8～12min，于40～45℃干燥备用；
[0028](2)将已清洗的固相载体放入真空等离子体处理设备中，启动真空泵抽真空至10～17Pa，向反应室通入氩气并加入功能单体，开启真空等离子体处理设备，设置功率为60～80W，反应5～8min，得到所述酶标板。
[0029]第三方面，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包括第一方面所述的酶标板。
[0030]优选地，所述试剂盒中还包括样本稀释液、洗涤液、底物显色液和终止反应液。
[0031]第四方面，本专利技术提供第一方面所述的酶标板和/或第三方面所述的试剂盒在酶联免疫吸附测试中的应用。
[0032]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0033](1)本专利技术中，通过在酶标板的固相载体上修饰功能层，使得酶标板表面能与抗原
或抗体等蛋白质分子产生较强吸附作用，提高了所述酶标板包被抗原或抗体等蛋白质分子的效果，提升了ELISA测试的灵敏度；
[0034](2)本专利技术的酶标板的蛋白质饱和吸附值均大于342ng/cm2，批内CV均小于14.5％，此外，通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酶标板，其特征在于，所述酶标板包括固相载体和修饰于所述固相载体表面的功能层；所述功能层包括接枝共聚物；所述接枝共聚物的功能单体包括N
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十八烷基丙烯酰胺和/或N
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(3
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二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺。2.根据权利要求1所述的酶标板，其特征在于，所述固相载体包括聚苯乙烯。3.根据权利要求1或2所述的酶标板，其特征在于，所述接枝共聚物为N
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十八烷基丙烯酰胺和N
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(3
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二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺经接枝共聚形成的聚合物；优选地，所述N
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十八烷基丙烯酰胺和N
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(3
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二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺的质量比为(0.5～1.0):1。4.一种权利要求1
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3任一项所述的酶标板的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将固相载体进行清洗处理和干燥处理，放入真空等离子体处理设备中，抽真空，向反应室通入工艺气体并加入功能单体，进行真空等离子体处理，得到所述酶标板。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述清洗处理包括依次使用无水乙醇和蒸馏水进行清洗；优选地，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨永光，罗红波，
申请(专利权)人：深圳市柏明胜医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：