免疫原性组合物制造技术

本发明专利技术涉及包含艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile，C. difficile)多肽和不含铝的佐剂的免疫原性组合物。和不含铝的佐剂的免疫原性组合物。和不含铝的佐剂的免疫原性组合物。

【技术实现步骤摘要】
免疫原性组合物
[0001]本申请是申请日为2013年12月03日的中国专利申请CN201380063596.3
ꢀ“
免疫原性组合物”的分案申请。


[0002]本专利技术涉及包含艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile，C. difficile)多肽和不含铝的佐剂的免疫原性组合物。本专利技术还涉及疫苗组合物，以及本专利技术的疫苗和免疫原性组合物在预防或治疗或制备药物中的用途。

技术介绍

[0003]艰难梭状芽孢杆菌是医院肠道感染的最重要原因并且是人中假膜性结肠炎的主要原因(Bartlett等人Am. J. Clin. Nutr. 11 suppl: 2521
‑
6 (1980))。感染艰难梭状芽孢杆菌的个体的总体相关死亡率在诊断的3个月内计算为5.99%，并且更高的死亡率与高龄相关，在超过80岁的患者中为13.5% (Karas等人 Journal of Infection 561:1
‑
9 (2010))。目前对艰难梭状芽孢杆菌感染的治疗是施用抗生素 (甲硝唑和万古霉素) ，然而，已经存在对这些抗生素具有抗性的菌株的证据(Shah等人., Expert Rev. Anti Infect. Ther. 8(5), 555
–
564 (2010))。因此，存在对能够诱发针对艰难梭状芽孢杆菌的抗体和/或保护性免疫应答的免疫原性组合物的需求。
[0004]艰难梭状芽孢杆菌的肠毒性主要由于毒素A(“ToxA”)和毒素B(“ToxB”)两种毒素的作用。毒素A和毒素B的C端结构域包含重复单位，例如毒素A的C端结构域由连续的重复单位构成(Dove等人Infect. Immun. 58:480
‑
499 (1990))。由于这一原因，C端结构域也可以称为“重复结构域”。如Ho等人 (PNAS 102:18373
‑
18378 (2005))中描述，这些重复部分可以进一步分为短重复(SRs)和长重复(LRs)。
[0005]已经描述了包含来自艰难梭状芽孢杆菌的抗原的免疫原性组合物。WO96/12802和WO00/61762和Lyerly等人 (Current Microbiology 21:29
‑
32 (1990))涉及毒素A的片段，特别是C端结构域的片段，其用于诱导仓鼠中的保护性免疫应答。WO9920304涉及通过在甲醛中孵育灭活的共同纯化的毒素A和毒素B的混合物。WO00/61762涉及包含艰难梭状芽孢杆菌的毒素A和毒素B的全长C端结构域或C端结构域的片段的免疫原性组合物。类似地，WO2012/163817、WO2012/163811和WO2012/163810提供毒素A和毒素B的可能的片段以及其融合蛋白的公开内容。
[0006]需要具有改进的免疫原性的新组合物或疫苗。作为一种策略，已经用佐剂尝试和改进针对任何给定抗原产生的免疫应答。例如，WO2009035707描述了包含艰难梭状芽孢杆菌毒素A和B的类毒素以及佐剂诸如氢氧化铝化合物的组合物。
[0007]以前已经公开了含有脂多糖和皂树(Quillaja)皂苷的组合的佐剂，例如，在EP0671948中。水包油乳剂自身在本领域众所周知，已表明可用作佐剂组合物(EP 399843; WO 95/17210)。
[0008]仍然需要提供针对艰难梭状芽孢杆菌的合适的免疫应答的疫苗和免疫原性组合
物。

技术实现思路

[0009]在一个方面，本专利技术涉及包含多肽和佐剂的免疫原性组合物，所述多肽包含艰难梭状芽孢杆菌(C. difficile)毒素A片段和/或艰难梭状芽孢杆菌毒素B片段，且所述佐剂包含以脂质体的形式呈现的免疫活性皂苷级分。免疫学活性皂苷级分可以是QS21，且脂多糖可以是3D
‑
MPL。合适地，免疫原性组合物可以包含约50
ꢀµ
g 3D
‑
MPL和约50
ꢀµ
g QS21。
[0010]在一个方面，本专利技术涉及包含多肽和佐剂的免疫原性组合物，所述多肽包含艰难梭状芽孢杆菌毒素A片段和/或艰难梭状芽孢杆菌毒素B片段，且所述佐剂包含水包油乳剂，其中所述水包油乳剂包含可代谢油、母育酚和乳化剂。可代谢油可以以约5.35 mg的量存在。母育酚可以以约5.94 mg的量存在。合适地，乳化剂可以以约2.425 mg的量存在。合适地，可代谢油是角鲨烯，母育酚是α
‑
生育酚，且乳化剂是聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。
[0011]合适地，根据本专利技术的任何方面的免疫原性组合物包含艰难梭状芽孢杆菌毒素A重复结构域片段和艰难梭状芽孢杆菌毒素B重复结构域片段，且引发中和毒素A和毒素B的抗体。在本专利技术的进一步实施方案中，免疫原性组合物包含艰难梭状芽孢杆菌毒素A片段和艰难梭状芽孢杆菌毒素B片段，其中所述片段中的一种是N端片段，而另一种是重复结构域片段。
[0012]合适地，根据本专利技术的任何方面的免疫原性组合物包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7 SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27的多肽变体。
[0013]合适地，根据本专利技术的任何方面的免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:35的多肽或任何这些序列的变体或片段。
[0014]根据本专利技术的免疫原性组合物可以包含额外抗原，诸如衍生自细菌的抗原，所述细菌选自肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae, S. pneumoniae)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae, H.influenzae)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis, N.meningitidis)、大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis, M.cattarhalis)、破伤风梭状芽孢杆菌(Clostridium tetani, C. tetani)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diptherieriae, C. diptherieriae)、百日咳博代氏杆菌(Bordetella pertussis, B. pertussis)、表皮葡萄球菌(Staphyloco本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.免疫原性组合物，其包含：a) 包含分离的艰难梭状芽孢杆菌毒素A片段和分离的艰难梭状芽孢杆菌毒素B片段的多肽，其中所述多肽包含第一片段和第二片段，其中(i) 所述第一片段是毒素A重复结构域片段；(ii) 所述第二片段是毒素B重复结构域片段；(iii) 所述第一片段具有第一近端；(iv) 所述第二片段具有第二近端；并且其中所述第一片段和所述第二片段彼此邻近；和b) 包含水包油乳剂的佐剂，其中所述水包油乳剂包含可代谢油、母育酚和乳化剂。2.如权利要求1中要求保护的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物不是与佐剂组合的3μg或10
ꢀµ
g的包含SEQ ID No.1至7中任一种的多肽，所述佐剂包含0.125 mL SB62乳剂(总体积)、5.35 mg角鲨烯、5.94 mg DL
‑
α
‑
生育酚和2.425 mg聚山梨醇酯80/0.5ml剂量，或由0.125 mL SB62乳剂(总体积)、5.35 mg角鲨烯、5.94 mg DL
‑
α
‑
生育酚和2.425 mg聚山梨醇酯80/0.5ml剂量组成。3.根据权利要求1或权利要求2的免疫原性组合物，其中所述水包油乳剂包含1
‑
10、2
‑
10、3
‑
9、4
‑
8、5
‑
7或5
‑
6 mg可代谢油/剂量。4.根据权利要求1
‑
3中任一项的免疫原性组合物，其中所述水包油乳剂包含0.5
‑
11、1
‑
11、2
‑
10、3
‑
9、4
‑
8、5
‑
7、5
‑
6 mg母育酚/剂量。5.根据权利要求1
‑
4中任一项的免疫原性组合物，其中所述水包油乳剂包含0.1
‑
5、0.2
‑
5、0.3
‑
4、0.4
‑
3或2
‑
3 mg乳化剂/剂量。6.根据权利要求1
‑
5中任一项的免疫原性组合物，其中组合物包含约5.35 mg/剂量的量的可代谢油。7.根据权利要求1
‑
6中任一项的免疫原性组合物，其中可代谢油的量为约2.14 mg/剂量。8.根据权利要求1
‑
7中任一项的免疫原性组合物，其中母育酚的量为约5.94 mg/剂量。9.根据权利要求1
‑
8中任一项的免疫原性组合物，其中母育酚的量为约2.38 mg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：D布特里奥，SMJV格迈因，H瓦莱马克，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：