一种CHO细胞无血清无蛋白培养基及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种CHO细胞无血清无蛋白培养基及其用途。CHO细胞无血清无蛋白培养基由氨基酸、维生素、微量元素、无机盐、碳水化合物、脂肪酸及其他功能性化合物组成。本发明专利技术的新型无血清无蛋白培养基通用性强，能同时支持CHO

【技术实现步骤摘要】
一种CHO细胞无血清无蛋白培养基及其用途


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，具体为一种CHO细胞无血清无蛋白培养基及其用途。

技术介绍

[0002]目前，哺乳动物细胞的大规模培养与表达已成为生物药生产特别是抗体药生产的基石技术。与酵母等其它真核细胞系相比，哺乳动物细胞表达外源蛋白的优势在于可表达含有复杂二硫键或翻译后修饰的靶蛋白，且蛋白可分泌到培养液中，其产物蛋白的糖基化程度高且均一，有效提高药效，同时减少药物副作用。中国仓鼠卵巢细胞（CHO）是目前重组蛋白生产领域最具代表性的工程细胞，其具有高效扩增和表达的特点，在流加培养中单抗产量最高可超过10g/L。据统计，使用CHO细胞系作为表达载体开发的抗体药物超过60%，使用CHO细胞生产的药物已获批上市29种。与此同时，针对CHO细胞培养的无血清开发平台在经历了含血清提取物的无血清培养基、无蛋白培养基、无动物源成分培养基，以及目前主流的化学成分限定培养基等几个阶段后产业化发展已初具规模。
[0003]化学成分限定培养基无血清，无蛋白，无动物源成分带来的病毒等安全风险，且培养基各组分种类和浓度明确，能保证最终成品良好的稳定性和一致性，批间差异小，易于规模化生产和放大，同时有利于下游分离和纯化。
[0004]Murakami等人以DF12为基础培养基，通过添加5mg/L胰岛素、2
‑
35mg/L转铁蛋白、20μmol/L乙醇胺和1nmol/L亚硒酸钠等组分，开发出经典的DF12
‑
ITES配方。
[0005]中国专利CN 201310106385.5公开了一种支持CHO高密度悬浮培养的无血清无蛋白培养基，其中含有类固醇激素，而不含有转铁蛋白和胰岛素。
[0006]中国专利CN 201410513086.8公开了一种适于动物细胞表达产品大规模生产的化学成分明确培养基，其成分至少包括14种氨基酸、8种维生素、10种无机盐、2种核酸类化合物、1种激素及生长因子、2种抗氧化剂、1种螯合剂和2种其他营养物。
[0007]中国专利CN 201911347064 .8公开了一种CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基及其用途，其化学成分明确，成本低廉，能支持CHO细胞更好的生长和更短的细胞倍增时间，但同时其配方中也含有很多功能并不明确的微量元素，如、硝酸银、氯化钴、醋酸钡、硫酸铬、氟化钠等。
[0008]美国专利US 8198084B2公开了一种适用于哺乳动物细胞，尤其是上皮细胞和成纤维细胞体外悬浮培养的无血清无蛋白化学成分限定培养基配方，其中含铁螯合剂、锌离子和硫酸葡聚糖等组分。
[0009]美国专利US10138467B2公开了一种可显著提高哺乳动物细胞流加培养性能的无血清无蛋白培养基及其配方设计开发方法。
[0010]鉴于无血清无蛋白化学成分限定培养基快速发展与壮大，国内早期以培养基DF12或IMDM为骨架基础，通过添加各种营养物质、生长因子、细胞因子、蛋白水解物等来开发无血清培养基配方的策略已远远无法满足现代生物制品产业对于安全、质量和规模化的需
mg/L、氯化钙60
‑
200 mg/L、氯化钾300
‑
800 mg/L、碳酸氢钠1200
‑
4000 mg/L、氯化钠1000
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6000 mg/L、磷酸二氢钠50
‑
200 mg/L，磷酸氢二钠50
‑
250 mg/L；进一步的，所述脂肪酸各组分终浓度分别为：亚油酸0.02
‑
2 mg/L、亚麻酸0.02
‑
1 mg/L、β
‑
甘油磷酸酯0.02
‑
2 mg/L；进一步的，所述功能性化合物各组分终浓度分别为：葡萄糖4000
‑
9000mg/L、还原型谷胱甘肽0.5
‑
5mg/L、丙酮酸钠50
‑
400 mg/L、腐胺0.08
‑
1 mg/L、乙醇胺2
‑
20 mg/L、Kolliphor P 188 500
‑
2000 mg/L、硫酸葡聚糖20
‑
100 mg/L、盐酸甜菜碱1000
‑
4000 mg/L、氢化可的松0.02
‑
0.4 mg/L；进一步的，所述氨基酸各组分终浓度分别为：甘氨酸15
‑
150 mg/L、丙氨酸5
‑
30 mg/L、精氨酸盐酸盐200
‑
800 mg/L、天冬酰胺150
‑
1000 mg/L、天冬氨酸100
‑
800 mg/L、L
‑
半胱氨酸S
‑
硫酸钠钠倍半水合物20
‑
300 mg/L、谷氨酸10
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75 mg/L、组氨酸盐酸盐300
‑
1500 mg/L、异亮氨酸100
‑
600 mg/L、亮氨酸100
‑
500 mg/L、赖氨酸盐酸盐100
‑
1000 mg/L、甲硫氨酸50
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150 mg/L、苯丙氨酸30
‑
250 mg/L、脯氨酸50
‑
400 mg/L、丝氨酸100
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550 mg/L、苏氨酸100
‑
300 mg/L、色氨酸20
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200 mg/L、磷酸
‑
L
‑
酪氨酸二钠盐100
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400 mg/L、缬氨酸50
‑
450 mg/L；进一步的，所述维生素各组分终浓度分别为：生物素0.0035
‑
0.35mg/L、氯化胆碱8
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99 mg/L、泛酸钙2
‑
10mg/L、叶酸2
‑
10 mg/L、烟酰胺2
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10 mg/L、吡哆醇2
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10 mg/L、核黄素0.2
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2.5 mg/L、盐酸硫胺素2
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10 mg/L、维生素B12 0.5
‑
5mg/L、肌醇10
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80 mg/L、硫辛酸0.1
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2.5 mg/L。
[0014]进一步的，所述微量元素各组分终浓度分别为：七水硫酸锌0.5
‑
3mg/L、五水硫酸铜0.013
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0.13 mg/L、柠檬酸铁铵10
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50 mg/L、亚硒酸钠0.01
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0.04 mg/L、硫酸镍0.0005
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0.005 mg/L、偏硅酸钠0.01
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0.5 mg/L、六水氯化铝0.0005
‑
0.005 mg/L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，其特征在于；所述培养基由氨基酸、维生素、微量元素、无机盐、脂肪酸、功能性化合物组成；所述氨基酸为L
‑
氨基酸，各组分具体如下：甘氨酸、丙氨酸、精氨酸盐酸盐、天冬酰胺、天冬氨酸、L
‑
半胱氨酸S
‑
硫酸钠钠倍半水合物、谷氨酸、组氨酸盐酸盐、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸盐酸盐、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、磷酸
‑
L
‑
酪氨酸二钠盐、缬氨酸。2.根据权利要求1所述一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，其特征在于；所述功能性化合物组分具体如下：葡萄糖、还原型谷胱甘肽、丙酮酸钠、腐胺、乙醇胺、Kolliphor P 188、硫酸葡聚糖、盐酸甜菜碱、氢化可的松。3.根据权利要求2所述一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，其特征在于；所述维生素各组分具体如下：生物素、氯化胆碱、泛酸钙、叶酸、烟酰胺、吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素、维生素B12、肌醇、硫辛酸；所述微量元素各组分具体如下：七水硫酸锌、五水硫酸铜、柠檬酸铁铵、亚硒酸钠、硫酸镍、偏硅酸钠、六水氯化铝；所述无机盐各组分具体如下：氯化镁、硫酸镁、氯化钙、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸二氢钠，磷酸氢二钠；所述脂肪酸各组分具体如下：亚油酸、亚麻酸、胆固醇、β
‑
甘油磷酸酯。4.根据权利要求3所述一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，其特征在于；所述氨基酸各组分终浓度如下：甘氨酸15
‑
150 mg/L、丙氨酸5
‑
100 mg/L、精氨酸盐酸盐100
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1000 mg/L、天冬酰胺50
‑
1000 mg/L、天冬氨酸50
‑
800 mg/L、L
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半胱氨酸S
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硫酸钠钠倍半水合物20
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500 mg/L、谷氨酸10
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150 mg/L、组氨酸盐酸盐100
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1500 mg/L、异亮氨酸100
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800 mg/L、亮氨酸100
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800 mg/L、赖氨酸盐酸盐100
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1000 mg/L、甲硫氨酸20
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200 mg/L、苯丙氨酸30
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300 mg/L、脯氨酸25
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500 mg/L、丝氨酸75
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750 mg/L、苏氨酸50
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500 mg/L、色氨酸20
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300 mg/L、磷酸
‑
L
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酪氨酸二钠盐60
‑
600 mg/L、缬氨酸30
‑
500 mg/L；功能性化合物各组分终浓度分别为：葡萄糖4000
‑
9000mg/L、还原型谷胱甘肽0.5
‑
5mg/L、丙酮酸钠50
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400 mg/L、腐胺0.08
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1 mg/L、乙醇胺2
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20 mg/L、Kolliphor P 188 500
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2000 mg/L、硫酸葡聚糖20
‑
100 mg/L、...

【专利技术属性】
技术研发人员：俞锦锋，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：依科赛生物科技太仓有限公司，
类型：发明
国别省市：