一种捻转血矛线虫Hc-H11-2重组蛋白的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种捻转血矛线虫Hc

【技术实现步骤摘要】
一种捻转血矛线虫Hc
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H11
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2重组蛋白的构建方法及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及捻转血矛线虫Hc
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H11
‑
2重组蛋白的构建方法，本专利技术还涉及一种捻转血矛线虫重组亚单位疫苗。

技术介绍

[0002]捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是寄生于绵羊、山羊、牛和其他反刍动物皱胃的一种吸血性寄生线虫，呈全球性分布，可导致动物贫血和体重下降，严重时导致死亡
[1]。该寄生虫在世界范围内感染了数亿家畜，每年造成的死亡和生产损失估计为33亿美元
[2]。目前对捻转血矛线虫病的防控仍是以药物(阿苯达唑、左旋咪唑、伊维菌素等)防控为主，然而长期过度使用抗蠕虫药已经导致虫体产生抗药性及动物产品安全性和环境药物残留等诸多问题
[3]，在这种情况下高效抗捻转血矛线虫疫苗的研发变得至关重要
[4]。
[0003]2014年，针对捻转血矛线虫的一种由天然蛋白组成的疫苗(http://barberva本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种捻转血矛线虫Hc
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H11
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2重组蛋白的构建方法，其特征在于包括以下步骤：(1)提取捻转血矛线虫RNA，反转录成cDNA；(2)设计引物Hc
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H11
‑2‑
F和Hc
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H11
‑2‑
R，以cDNA为模板，PCR扩增Hc
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H11
‑
2基因；(3)对PCR产物纯化回收，将回收得到的DNA片段与pTOPO
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Blunt Simple载体进行连接转化，阳性克隆扩大培养，质粒回收；(4)设计引物Hc
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H11
‑2‑
IgK
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arm
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F和Hc
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H11
‑2‑
His
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arm
‑
R，以步骤(3)的质粒为模板，扩增出含有IgK信号肽及His标签的DNA片段，与pcDNA3.1(+)载体同源重组，菌液PCR鉴定正确后去内毒素大提质粒，获得pcDNA3.1(+)
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Hc
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H11
‑2‑
IgK质粒；(5)将pcDNA3.1(+)
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Hc
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H11
‑2‑
IgK质粒转染CHO细胞，收集细胞培养液进行His
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tag重组蛋白亲和纯化，透析浓缩后得到目的蛋白。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述Hc
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H11
‑2‑
F和Hc
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H11
‑2‑
R的引物序列为：Hc
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H11
‑2‑
F：AT...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡敏，李婷婷，叶莉莎，王春群，张挺，周彩显，瓦热斯，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：