一种多肽、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物医学领域，特别涉及一种多肽、制备方法及应用。该多肽为SjDX5

【技术实现步骤摘要】
一种多肽、制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，特别涉及一种多肽、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]“卫生假说”认为，在低收入的热带国家蠕虫感染率高，而在发达国家随着经济卫生条件的逐步改善，寄生虫感染率明显下降，相应地过敏和自身免疫性疾病的发生与日俱增(Okada et al.,2010)。寄生虫感染宿主后，可通过多种机制逃避宿主免疫系统攻击，在宿主体内长期存活。这种持续慢性感染状态与Tregs诱导的抑制性免疫应答密切相关。Tregs是形成外周免疫耐受的关键，具有免疫抑制和免疫无能两大特征。在自身免疫性疾病、肿瘤免疫、移植耐受及感染性疾病的免疫致病机制中均发挥关键的调控作用，具有潜在的治疗应用前景。
[0003]Tregs是一类具有负调控功能的相对独立的T细胞亚群。Treg细胞表达转录因子Foxp3，对自身抗原有很高亲和力，可以通过分泌抑制性细胞因子IL-10、TGF-β等抑制其他T细胞增殖和活化，也可以通过细胞接触依赖的方式抑制B细胞、NK细胞、T细胞以及DC的增殖、分化发挥抑制功能。天然Tregs占全部CD4+细胞的5-10％，在外周血不到2％。因此，如何获得足够数量的有功能的Tregs成为其临床应用的瓶颈。目前尝试诱导或扩大Tregs的调节功能主要有两种途径：分离患者的Tregs在体外扩增后回输，或利用生物制剂在体内增强Tregs功能。
[0004]目前，Tregs在移植物抗宿主(GVHD)、实体器官移植、1型糖尿病、系统性红斑狼疮(SLE)、炎症性肠病和多发性硬化的各种临床前模型中都显示出治疗潜力。因此，寻求能在体内活化Tregs并增强其抑制功能的无毒副作用的生物制剂成为当下研究的热点。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在提供一种能够诱导Tregs的多肽，该多肽可以有效诱导免疫抑制，应用于治疗移植物抗宿主(GVHD)、实体器官移植、1型糖尿病、系统性红斑狼疮(SLE)、炎症性肠病、过敏性气道炎症等。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术具体采用如下技术方案：
[0007]一种多肽，所述多肽为SjDX5-53或SjDX5-271，所述SjDX5-53的氨基酸序列为Seq IDNO.1；所述SjDX5-271的氨基酸序列为Seq IDNO.3。
[0008]优选的，编码所述多肽SjDX5-53的核苷酸序列为Seq IDNO.2，编码所述多肽SjDX5-271的核苷酸序列为Seq IDNO.4。
[0009]优选的，所述多肽SjDX5-53或SjDX5-271来源于日本血吸虫卵。
[0010]前述所述的多肽的制备方法，所述多肽SjDX5-53或SjDX5-271通过基因工程方法人工合成，或日本血吸虫卵通过细胞破碎分离纯化方法直接获得，或通过化学合成制备。
[0011]优选的，所述多肽SjDX5-53或SjDX5-271的具体制备方法包括如下步骤：
[0012](1)获得虫卵蛋白：将日本血吸虫虫卵研磨，采用PBS溶液溶解研磨后的虫卵得虫
卵蛋白；
[0013](2)凝胶过滤层析：以磷酸盐缓冲液作为洗脱液进行初步分离纯化，收集能诱导Treg细胞的组分；
[0014](3)反向高效液相层析：以乙腈和含1
‰
三氟乙酸的水构成的洗脱体系进行梯度洗脱，收集能诱导Treg细胞的组分；
[0015](4)质谱检测：质谱测序法检测步骤(3)所得的能诱导Treg细胞的组分，最终得到多肽SjDX5-53的氨基酸序列：Seq IDNO.1或多肽SjDX5-271的氨基酸序列：Seq IDNO.3。
[0016]优选的，所述步骤(2)中磷酸盐缓冲液的浓度选自0.08mol/L～0.13mol/L；步骤(3)中反向高效液相层析所用的反相高效液相色谱柱选自C4柱。
[0017]优选的，所述的步骤(3)中梯度洗脱包括：
[0018][0019][0020]前述所述的多肽的应用，所述的多肽SjDX5-53或SjDX5-271在制备免疫抑制药物中的应用。
[0021]优选的，所述的多肽SjDX5-53或SjDX5-271在制备治疗移植物抗宿主、实体器官移植、1型糖尿病、系统性红斑狼疮、炎症性肠病、过敏性气道炎症用药物中的应用。
[0022]有益效果：
[0023]本专利技术所述的多肽具有增强CD4
+
及CD25
+
调节性T细胞抑制效应；
[0024]本专利技术所述的多肽刺激人PBMC后，显著增加了CD4+CD25+CD127lowT细胞的数量，显著增强了Tregs的抑制功能。该多肽体外处理小鼠脾单个核细胞后，显著增加了CD4+CD25+Foxp3+T细胞的数量，增加了IL-10的水平。
附图说明
[0025]图1凝胶过滤层析分离日本血吸虫虫卵蛋白；
[0026]图2凝胶过滤层析分离的日本血吸虫虫卵蛋白增加人PBMC中CD4
+
CD25
+
CD127
low
Tregs；
[0027]图3反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离凝胶过滤层析得到的日本血吸虫虫卵蛋白；
[0028]图4反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离的日本血吸虫虫卵蛋白增加人PBMC中CD4
+
CD25
+
CD127
low
Tregs；
[0029]图5SjDX5-53和SjDX5-271增加了人PBMC中CD4
+
CD25
+
CD127
low
Tregs；
[0030]图6SjDX5-53和SjDX5-271增加了人PBMC中IL-10的分泌；
[0031]图7不同浓度SjDX5-53和SjDX5-271体外处理小鼠脾单个核细胞后，显著增加了CD4
+
CD25
+
Foxp3
+
T细胞的数量；
[0032]图8SjDX5-53增加了小鼠脾单个核细胞中IL-10的分泌。
具体实施方式
[0033]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本专利技术及其应用或使用的任何限制。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0034]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0035]下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽为SjDX5-53或SjDX5-271，所述SjDX5-53的氨基酸序列为Seq IDNO.1；所述SjDX5-271的氨基酸序列为Seq IDNO.3。2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，编码所述多肽SjDX5-53的核苷酸序列为Seq IDNO.2，编码所述多肽SjDX5-271的核苷酸序列为Seq IDNO.4。3.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽SjDX5-53或SjDX5-271来源于日本血吸虫卵。4.权利要求1所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述多肽SjDX5-53或SjDX5-271通过基因工程方法人工合成，或日本血吸虫卵通过细胞破碎分离纯化方法直接获得，或通过化学合成制备。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述多肽SjDX5-53或SjDX5-271的具体制备方法包括如下步骤：(1)获得虫卵蛋白：将日本血吸虫虫卵研磨，采用PBS溶液溶解研磨后的虫卵得虫卵蛋白；(2)凝胶过滤层析：以磷酸盐缓冲液作为洗脱液进行初步分离纯化，收集能诱导Treg细胞的组分；(3)反向高效液相层析：以乙腈和含1
‰
...

【专利技术属性】
技术研发人员：季旻珺，赖仞，倪杨玥，徐志鹏，栾宁，
申请(专利权)人：中国科学院昆明动物研究所，
类型：发明
国别省市：