一种百合远缘杂交亲和性鉴定的方法技术

本发明专利技术公开一种百合远缘杂交亲和性鉴定的方法，属于远缘杂交亲和性鉴定技术领域，植物雌雄配子受精及杂交胚的发育会刺激子房膨大。本发明专利技术所述方法将百合进行远缘杂交，通过比较不同发育时间的子房膨大率及假膨大率鉴定百合远缘杂交亲和性，子房膨大率越高且假膨大率低、败育时间越晚的，杂交双亲的亲和性越高。本发明专利技术联合使用子房膨大率和假膨大率方法鉴定百合远缘杂交亲和性，弥补了单纯使用子房膨大率只考虑子房膨大而不顾胚实际萌发情况的缺点，避免了因花粉刺激引起子房组织假膨大对实际杂交亲和性判断的干扰。对实际杂交亲和性判断的干扰。对实际杂交亲和性判断的干扰。

【技术实现步骤摘要】
一种百合远缘杂交亲和性鉴定的方法


[0001]本专利技术涉及一种百合远缘杂交亲和性鉴定的方法，属于远缘杂交亲和性鉴定


技术介绍

[0002]百合是集观赏、药用、食用于一体的重要花卉，为世界四大切花之一。百合资源种类丰富，具有一百多个原种，这些原种被分为7个组，每个组的百合都具有各自独特的优点，如卷瓣组的亚洲百合具有病毒抗性，具叶柄组的东方百合具有芳香、花大色艳的优点，喇叭组的百合具有生长快、休眠要求低的特性等。通过组间杂交可以获得聚合有不同百合优点的新品种。植物学中将种及种以上的物种间的杂交定义为远缘杂交，百合不同组间远缘杂交存在显著的杂交障碍，位于不同组的百合种间不能自然杂交，需要采取切割花柱、胚拯救等技术措施克服杂交障碍。通过胚拯救等技术措施获得远缘杂交后代往往需要耗费大量的人力、物力和时间，百合不同种间远缘杂交亲和性的鉴定，可以为通过远缘杂交培育百合新品种时亲本选配、杂交群体数等杂交计划制定提供有力的支持。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种百合远缘杂交亲和性鉴定的方法，具体方案为：将百合进行远缘杂交，通过比较相同发育时间的子房膨大率/假膨大率鉴定百合远缘杂交亲和性，子房膨大率越高且假膨大率低、败育时间越晚，杂交双亲的亲和性越高。
[0004]优选的，本专利技术所述远缘杂交的具体杂交过程为：
[0005](1)在母本柱头分泌粘液适宜授粉的时候，于距离母本子房0.4～0.6cm的位置，将母本花柱切除后，选取溢出并携带有粘液的母本柱头，沾取父本花粉涂于母本花柱切口上，完成授粉；及时用(直径约1cm)锡箔纸筒套住切口以防止其它百合的花粉落到切口上。
[0006](2)3～5d后揭去锡箔纸套筒，观察子房膨大情况，根据子房是否膨大及膨大时间计算不同时间的子房膨大率。
[0007](3)对授粉后发育膨大的子房，分别于授粉后20d、30d、40d、50d、60d切取子房进行胚拯救。
[0008](4)接种后5个月内观察胚萌发情况，统计胚萌发率和子房假膨大率，结合子房膨大率和胚萌发率，统计子房假膨大率。
[0009](5)根据子房膨大率/假膨大率及子房败育时间，判断杂交亲本的亲和率；子房膨大率越高且假膨大率低、败育时间越晚，杂交双亲的亲和性越高。
[0010]进一步的，本专利技术步骤(2)和(4)中所述子房膨大率＝膨大子房数/授粉子房数
×
100％。
[0011]进一步的，本专利技术所述胚拯救的方法根据发育时间的不同而不同，人工培养基配方为：1/2MS+0.01～0.1mg/L的NAA，具体过程如下：
[0012]对发育20d的子房，采用子房切片培养法，即将完整子房切成0.2～0.4cm厚的切片
后接种于人工培养基上进行离体培养。
[0013]对发育30d的子房，采用胚囊培养法，即将胚囊及胚囊包裹的胚乳和胚完整取出后接种于人工培养基上进行离体培养。
[0014]对发育40d的子房，采用胚乳培养法，即剥去胚乳外层的胚囊，将含有胚的胚乳取出后接种于人工培养基上进行离体培养。
[0015]对发育50d和60d的子房，采用胚培养法，即切开胚乳，取出完整的胚接种于人工培养基上进行离体培养。
[0016]进一步的，本专利技术步骤(4)中胚萌发率＝萌发数/接种数
×
100％。
[0017]进一步的，步骤(4)中子房假膨大率＝子房膨大率/胚萌发率
×
100％。
[0018]本专利技术的有益效果：
[0019]本专利技术通过比较不同发育时间的子房膨大率/假膨大率鉴定百合远缘杂交亲和性，子房膨大率越高且假膨大越低、败育时间越晚，杂交双亲的亲和性越高。假膨大率弥补了单纯使用膨大率只考虑子房膨大而不顾胚萌发情况)或萌发率只考虑接种胚萌发率而不顾膨大子房数多少的缺点，避免了因花粉刺激引起子房组织假膨大对实际杂交亲和性判断的干扰。
附图说明
[0020]图1西伯利亚(Siberia)x紫斑白合(Lilium nepalense)切割花柱授粉40d的果荚假膨大情况；
[0021]图2函数(东方百合栽培种)х兰州百合(亚洲百合传统栽培种)切割花柱授粉50d的果荚假膨大情况；
[0022]图3紫蒂(东方百合栽培种)х紫红花滇百合(亚洲百合野生种)杂交组合切割花柱授粉40d的果荚发育情况。
具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例本专利技术作进一步的详细说明，但本专利技术的保护范围并不限于所述内容。
[0024]本专利技术实施例中所述仪器设备包括：超净工作台、温室、塑料大棚、组织培养室、超净工作台等。
[0025]本实施例所述百合远缘杂交亲和性鉴定的方法，具体包括以下步骤：
[0026](1)在母本柱头分泌粘液适宜授粉的时候，于距离母本子房0.5cm的位置，用锋利的刀片将母本花柱切除后，选取溢出并携带有大量粘液的母本柱头，沾取新鲜且有活力的父本花粉涂于母本花柱切口上，完成授粉。
[0027](2)及时用直径约为子房直径1.5倍的筒状锡箔纸套住切口以防止其它百合的花粉落到切口上。
[0028](3)3～5d后揭去锡箔纸套袋，观察子房膨大情况，根据子房是否膨大及膨大时间计算不同时间的膨大率，子房膨大率＝膨大子房数/授粉子房数
×
100％。
[0029](4)对授粉后发育膨大的子房，分别于授粉后20d、30d、40d、50d、60d切取子房进行胚拯救。
[0030](5)胚拯救的方法根据发育时间的不同而不同，具体如下：
[0031]对发育20d的子房，采用子房切片培养法，即将完整子房切成0.2～0.4cm厚的切片后接种于人工培养基上进行离体培养，培养基配方为：1/2MS+NAA0.01～0.1mg/L，下同。
[0032]对发育30d的子房，采用胚囊培养法，即将胚囊及胚囊包裹的胚乳和胚完整取出后接种于人工培养基上进行离体培养。
[0033]对发育40d的子房，采用胚乳培养法，即剥去胚乳外层的胚囊，将含有胚的胚乳取出后接种于人工培养基上进行离体培养。
[0034]对发育50d和60d的子房，采用胚培养法，即切开胚乳，取出完整的胚接种于人工培养基上进行离体培养。
[0035](6)接种后5个月内观察胚萌发情况，统计胚萌发的子房数及胚萌发率，胚萌发率＝胚萌发的子房数/膨大子房数。
[0036](7)统计子房假膨大率，根据胚萌发率统计子房假膨大率，子房假膨大率＝(1
‑
胚萌发率)
×
100％。
[0037](8)根据子房膨大率/假膨大率及子房败育时间，判断杂交亲本的亲和性；子房膨大率越高且假膨大率低、败育时间越晚，杂交双亲的亲和性越高。
[0038]实施例1
[0039]西伯利亚(东方百合栽培种)х紫斑白合(亚洲百合野生种)杂交组合，2014年利用切割花柱法，1000个授粉花朵20d、30本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种百合远缘杂交亲和性鉴定的方法，其特征在于：将百合进行远缘杂交，通过比较不同发育时间的子房膨大率/假膨大率鉴定百合远缘杂交亲和性，子房膨大率越高且假膨大率低、败育时间越晚，杂交双亲的亲和性越高。2.根据权利要求1所述百合远缘杂交亲和性鉴定的方法，其特征在于：具体杂交过程为：(1)在母本柱头分泌粘液适宜授粉的时候，于距离母本子房0.4～0.6cm的位置，将母本花柱切除后，选取溢出并携带有粘液的母本柱头，沾取父本花粉涂于母本花柱切口上，完成授粉；及时用锡箔纸筒套住切口以防止其它百合的花粉落到切口上；(2)3～5d后揭去锡箔纸套筒，观察子房膨大情况，根据子房是否膨大及膨大时间计算不同时间的子房膨大率；(3)对授粉后发育膨大的子房，分别于授粉后20d、30d、40d、50d、60d切取子房进行胚拯救；(4)接种后5个月内观察胚萌发情况，统计子房膨大率和胚萌发率，根据胚萌发率统计子房假膨大率；(5)根据子房膨大率/假膨大率及子房败育时间，判断杂交亲本的亲和性；子房膨大率越高且假膨大率低、败育时间越晚，杂交双亲的亲和性越高。3.根据权利要求2所述百合远缘杂交亲和性鉴定的方法，其特征在于：步骤(2)和(4)中所述子房膨大率＝膨大子...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴红芝，吴景芝，郭彦兵，贺水莲，金寿林，周雯，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：