一种血液本周氏蛋白的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种血液本周氏蛋白检测的样本处理方法，包括以下步骤：(1)采集静脉血样本，分离得到血清；(2)向血清中加入处理液，得到待检测样品；所述处理液包含生理盐水和以下浓度的组分：麦芽糖0.5

【技术实现步骤摘要】
一种血液本周氏蛋白的检测方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种血液本周氏蛋白的检测方法。

技术介绍

[0002]本周氏蛋白(Bence
‑
Jones protein,BJP)是一种免疫球蛋白的游离轻链(free light chain，FLC)，能自由通过肾小球滤过膜，当浓度增高超过近曲小管重吸收的极限时，可自尿中排出，即本周蛋白尿。酸性尿加热至40～60℃时发生凝固，90～100℃时可再溶解，当温度降低至56℃左右，又可重新凝固，故又称凝溶蛋白。所有的单克隆B淋巴细胞增殖病变均可能与本周氏蛋白的出现有关，但检出率往往取决于分析技术的敏感性和是否运用预先浓缩的尿液进行检测。
[0003]热沉淀法、甲苯磺酸法定性检测尿液本周氏蛋白的阳性率均较低，免疫散射比浊法可提高检测的灵敏度，尿免疫固定电泳法展现的结果非常直观，可与免疫法检测互补，临床应用普遍，通常可在分析前将尿样浓缩200倍左右，以避免浓度低于检测限所致的假阴性。尿免疫固定电泳技术是检测本
‑
周蛋白常用的检测手段。
[0004]FLC的平均分子量大约为25000，由210
‑
220个氨基酸组成，分为两大类，即κ型、λ型。游离轻链可以以二聚体的形式出现，分子量大约为50000。循环中及尿中游离轻链并不是来源于血清中完整的单克隆免疫球蛋白的降解，而是由于淋巴细胞克隆过度产生的游离轻链。轻链的单体、二聚体经肾小球滤过，在近曲小管内通过胞饮作用而被重吸收，经溶酶体酶水解后氨基酸进入血液循环。人体中产生的κ链大约是λ链的2倍，且κ型FLC常为单体，而λ型FLC易形成二聚体，与二聚体λ链FLC分子相比，单体κ型FLC分子更易从肾小球滤过。因此，κ型FLC增多的患者尿检多出现阳性。尿中出现FLC的主要原因通常是超负荷蛋白尿，即过量小分子蛋白的滤过，触发胞饮机制的饱和：由于原发性肾小管缺陷或继发于免疫球蛋白FLC毒性所致的蛋白尿，后者在临床上更常见。FLC是肾脏损害的直接原因，FLC的肾毒性可引起：
①
近端小管上皮细胞中炎症介质的激活；
②
近端小管坏死；
③
FLC晶体沉积导致范可尼综合征(肾小管性酸中毒)；
④
肾病管型；
⑤
原发性系统性淀粉样变性；
⑥
轻链沉积性疾病。多数情况下，尿液中FLC检出常与血清中伴有FLC有关，后者伴随相关的肾小球肾害。极少数情况下，尿液中检出FLC但不伴有血清单克隆免疫球蛋白异常，仍需考虑轻链型骨髓瘤或非分泌型骨髓瘤。检测尿中FLC具有极其重要的诊断意义及预后价值，根据Durie Salmon的分类方法，可以借此来评价骨髓瘤的肿瘤负荷。FLC阳性的患者往往预后较差，约40％FLC阳性的患者最终发展成肾衰。
[0005]尿免疫固定电泳技术是检测本周氏蛋白常用的检测手段，但是游离轻链结构易形成二聚体及多聚体，分布浓度从1
‑
100000mg/L不等，容易出现抗原过量的情况，从而造成漏检。由于血液中的本周氏蛋白半衰期较短，不容易捕捉，因此其检测存在一定的难度，目前还未有关于检测血液样本中本周氏蛋白方法的报道。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术提供一种血液本周氏蛋白检测的样本处理方法，所述方法处理后获得的样品进行免疫固定电泳检测可快速准确地检测出血液样本中是否存在本周氏蛋白，且通过直接图谱可以更直观地观察检测结果。
[0007]具体技术方案为：
[0008]一种血液本周氏蛋白检测的样本处理方法，包括以下步骤：
[0009](1)采集静脉血样本，分离得到血清；
[0010](2)向血清中加入处理液，得到待检测样品；所述处理液包含生理盐水和以下浓度的组分：麦芽糖0.5
‑
5w/v％；海藻糖0.1
‑
3.5w/v％；氯化钾0.05
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0.15g/L。
[0011]在其中一些实施例中，所述处理液包含生理盐水和以下浓度的组分：麦芽糖0.7
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3w/v％；海藻糖0.5
‑
2.5w/v％；氯化钾0.8
‑
0.12g/L。
[0012]在其中一些实施例中，优选所述处理液包含生理盐水和以下浓度的组分：麦芽糖1.5w/v％；海藻糖1w/v％；氯化钾0.1g/L。专利技术人经过研究发现，利用上述配方的处理液处理血清样本，可以使条带更加清晰，取得更好的检测效果。
[0013]在其中一些实施例中，所述血清与处理液的体积比为1：(0.5
‑
3)。
[0014]在其中一些实施例中，所述血清与处理液的体积比为1：(0.5
‑
2)。
[0015]在其中一些实施例中，优选所述血清与处理液的体积比为1：1。
[0016]在其中一些实施例中，所述血液本周氏蛋白检测的样本处理方法还包括以下步骤：将所述步骤(2)中获得的待检测样品加入琼脂糖胶片中，点样次数为1次。目前利用尿液样本检测本周氏蛋白时，点样次数一般需要达到13次才能实现检测，使得整个检测过程耗时长。而本专利技术利用血液样本进行检测，血液样本经过本专利技术处理液处理后，只需要点样1次即可实现检测，缩短了检测时间。
[0017]在其中一些实施例中，所述血液本周氏蛋白检测的样本处理方法还包括以下步骤：待点样的琼脂糖胶片完成电泳和本周氏蛋白抗血清孵育后，对琼脂糖胶片进行染色。
[0018]在其中一些实施例中，所述染色为使用氨基黑10B染色液进行染色。
[0019]在其中一些实施例中，所述氨基黑10B染色液的浓度为5～6.5w/v％。
[0020]在其中一些实施例中，优选所述氨基黑10B染色液的浓度为5.5～6w/v％。
[0021]本专利技术还提供了一种血液本周氏蛋白的检测方法。
[0022]具体技术方案为：
[0023]一种血液本周氏蛋白的检测方法，包括以下步骤：
[0024](1)采集静脉血样本，分离得到血清；
[0025](2)向血清中加入处理液，得到待检测样品；所述处理液包含生理盐水和以下浓度的组分：麦芽糖0.5
‑
5w/v％；海藻糖0.1
‑
3.5w/v％；氯化钾0.05
‑
0.15g/L；
[0026](3)利用免疫固定电泳法对步骤(2)获得的待检测样品进行检测。
[0027]在其中一些实施例中，步骤(3)进行免疫固定电泳检测时本周氏抗血清的孵育温度为18
‑
25℃，时间为10
‑
15min。
[0028]在其中一些实施例中，优选所述本周氏抗血清的孵育温度为20℃，时间为10min。
[0029]上述样本处理方法仅用于批量化的样本前处理步骤，不涉及具体的疾病诊断。
[0030]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血液本周氏蛋白检测的样本处理方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集静脉血样本，分离得到血清；(2)向血清中加入处理液，得到待检测样品；所述处理液包含生理盐水和以下浓度的组分：麦芽糖0.5
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5w/v％；海藻糖0.1
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3.5w/v％；氯化钾0.05
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0.15g/L。2.根据权利要求1所述的血液本周氏蛋白检测的样本处理方法，其特征在于，所述处理液包含生理盐水和以下浓度的组分：麦芽糖0.7
‑
3w/v％；海藻糖0.5
‑
2.5w/v％；氯化钾0.8
‑
0.12g/L。3.根据权利要求2所述的血液本周氏蛋白检测的样本处理方法，其特征在于，所述处理液包含生理盐水和以下浓度的组分：麦芽糖1.5w/v％；海藻糖1w/v％；氯化钾0.1g/L。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的血液本周氏蛋白检测的样本处理方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玲，潘建华，文媚，周钰娇，
申请(专利权)人：广州金域医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：