维罗毒素的检测方法技术

本发明专利技术为维罗毒素的检测方法。使用质谱分析来更准确地进行维罗毒素的检测。维罗毒素的检测方法具备：准备试样和与维罗毒素结合的分子；进行利用上述分子与维罗毒素的结合来纯化试样中的维罗毒素的操作；以及，将通过上述操作而得到的试样供于第1质谱分析。作而得到的试样供于第1质谱分析。作而得到的试样供于第1质谱分析。

【技术实现步骤摘要】
维罗毒素的检测方法


[0001]本专利技术涉及维罗毒素(verotoxin)的检测方法。

技术介绍

[0002]由肠出血性大肠埃希氏菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli：EHEC)引起的食物中毒的原因在于由EHEC所产生的维罗毒素。维罗毒素存在1型和2型，二者通过血清学方式来区分，1型和2型各自存在多种亚型。维罗毒素的检测对于成为食物中毒原因的食品的鉴定、诊断或症状的预测等是重要的。
[0003]非专利文献1中，通过聚合酶链反应(PCR：Polymerase Chain Reaction)扩增并检测了维罗毒素的基因。该方法中，能够判定在试样中包含的细菌中是否存在维罗毒素的基因，但并不能区分在该细菌中是否表达了维罗毒素。非专利文献2中，利用免疫色谱法检测了维罗毒素的1型和2型，但无法区分亚型。非专利文献3中，通过在质谱分析中在对应于维罗毒素的m/z附近是否存在峰来判定在试样中是否包含维罗毒素。然而，若对应于杂质的峰存在于对应于维罗毒素的m/z附近则呈假阳性。
[0004]现有技术文献
[0005]非专利文献
[0006]非专利文献1：势户等其他2人＂腸管出血性大腸菌(EHEC)検査
·
診断
マニュアル
(肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)检测/诊断手册)＂、(日本)、国立感染症研究所、2019年9月25日
[0007]非专利文献2：NH Foods Ltd.、＂NH
イムノクロマト
VT 1/2＜＜取扱説明書＞＞第1版(NH免疫色谱法VT 1/2<<使用说明书>>第1版)＂、(日本)、NH Foods Ltd.、2009年12月
[0008]非专利文献3：Fagerquist CK,Zaragoza WJ,Sultan O,Woo N,Quinones B,Cooley MB,Mandrell RE."Top-down proteomic identification of Shiga toxin 2 subtypes from Shiga toxin-producing Escherichia coli by matrix-assisted laser desorption ionization-tandem time of flight mass spectrometry"Applied and environmental microbiology,(美国),American Society for Microbiology,2014年5月，Volume 80,Issue 9,pp.2928-2940

技术实现思路

[0009]专利技术要解决的问题
[0010]优选使用质谱分析来更准确地进行维罗毒素的检测。
[0011]用于解决问题的方案
[0012]本专利技术的第1方式涉及一种维罗毒素的检测方法，其具备：准备试样和与维罗毒素结合的分子；进行利用前述分子与维罗毒素的结合来纯化前述试样中的维罗毒素的操作；以及，将通过前述操作得到的前述试样供于第1质谱分析。
[0013]专利技术的效果
[0014]根据本专利技术，能够使用质谱分析更准确地进行维罗毒素的检测。
附图说明
[0015]图1是示出一个实施方式的维罗毒素的检测方法的流程的流程图。
[0016]图2是示出维罗毒素的B亚单位的各亚型的氨基酸序列的表格。
[0017]图3是实施例1中使用抗维罗毒素2抗体进行纯化操作而得到的试样的质谱图。
[0018]图4是实施例1中使用抗维罗毒素1抗体进行纯化操作而得到的试样的质谱图。
[0019]图5是实施例2中使用抗维罗毒素2抗体进行纯化操作而得到的试样的质谱图。
[0020]图6是实施例2中使用抗维罗毒素1抗体进行纯化操作而得到的试样的质谱图。
具体实施方式
[0021]以下参照附图对用于实施本专利技术的方式进行说明。
[0022]－实施方式－
[0023]本实施方式的维罗毒素的检测方法中，在进行使用与维罗毒素结合的分子来纯化试样中的维罗毒素的操作后，进行质谱分析。
[0024]图1是示出本实施方式的维罗毒素的检测方法的流程的流程图。步骤S1001中，准备试样和与维罗毒素结合的分子。
[0025](关于试样)
[0026]试样只要是包含维罗毒素或可能包含维罗毒素的液体或固体等就没有特别限定。例如，试样包括含有肠出血性大肠埃希氏菌或可能含有肠出血性大肠埃希氏菌的液体或固体等。作为可能包含维罗毒素的试样，例如，可包括有食物中毒症状的人类等生物所摄取过或接触过的食品或饮料、以及该生物的呕吐物。进而，由这些试样培养菌而得到的菌液或菌的群落、以及将菌液或菌的群落溶菌而得到的溶菌液也是适合作为本实施方式的方法的对象的试样。通过对可能包含维罗毒素的试样应用本实施方式的方法，并进行维罗毒素的检测或者类型或亚型的识别，从而能够进行成为食物中毒原因的食品或饮料的鉴定、诊断或症状的预测等。还可以对检测出维罗毒素的试样进行本实施方式的方法。例如，利用本实施方式的方法，可以进行如下操作：在检测到的维罗毒素的类型或亚型未知的情况下进行类型或亚型的识别、或对于维罗毒素的研究有用、或对利用其它方法得到的维罗毒素检测结果进行确认。
[0027]试样包含多种微生物等的情况，在判定1种微生物是否产生维罗毒素时，优选：用平板培养基等培养微生物，回收通过培养而得到的菌落，由此来提取单一种类的微生物。在此情况下，如上所述可以将包含菌落的菌液或使菌落溶菌而得到的溶菌液作为试样。
[0028](关于与维罗毒素结合的分子)
[0029]以下，将与维罗毒素结合的分子称为维罗毒素结合分子。对于维罗毒素结合分子，只要在试样包含维罗毒素的情况下能利用维罗毒素结合分子与维罗毒素的结合来进行试样的纯化就没有特别限定。此处，试样的纯化是指：试样中的除维罗毒素以外的至少一部分分子的浓度与维罗毒素的浓度相比相对降低。
[0030]维罗毒素结合分子优选为抗体或作为细胞中的维罗毒素的受体的神经酰胺三己糖苷(globotriaosylceramide)。以下的实施方式中，“抗体”除了包括IgG等免疫球蛋白之
外、还包括虽然不是免疫球蛋白但含有在免疫球蛋白中承担抗原特异性的可变区的免疫球蛋白样分子。
[0031]可以将能与希望检测的维罗毒素的类型或亚型结合的分子用作维罗毒素结合分子。维罗毒素以包含1个A亚单位和5个B亚单位的方式构成。A亚单位以包含A1亚单位和A2亚单位的方式构成。维罗毒素结合分子可以是与A1亚单位结合的分子，可以是与A2亚单位结合的分子，还可以是与B亚单位结合的分子。
[0032]图2是示出维罗毒素的类型和亚型、及各类型和亚型的维罗毒素的B亚单位的氨基酸序列的图。维罗毒素1型存在Stx1a、Stx1c和Stx1d的亚型。Stx1a的B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种维罗毒素的检测方法，其具备：准备试样和与维罗毒素结合的分子；进行利用所述分子与维罗毒素的结合来纯化所述试样中的维罗毒素的操作；以及，将通过所述操作得到的所述试样供于第1质谱分析。2.根据权利要求1所述的维罗毒素的检测方法，其具备：基于所述第1质谱分析中检测到的维罗毒素的质荷比，识别维罗毒素的类型和亚型中的至少一者。3.根据权利要求1所述的维罗毒素的检测方法，其中，所述与维罗毒素结合的分子为抗体和神经酰胺三己糖苷中的至少一者。4.根据权利要求3所述的维罗毒素的检测方法，其中，所述抗体为多克隆抗体。5.根据权利要求3所述的维罗毒素的检测方法，其中，所述与维罗毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：児岛浩一，寺本华奈江，岩本慎一，若林友骑，坂田淳子，
申请(专利权)人：地方独立行政法人大阪健康安全基盘研究所，
类型：发明
国别省市：