一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌Z-14菌株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌Z‑14菌株及其应用，该菌株已于2020年9月25日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.20821；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该枯草芽孢杆菌Z‑14菌株对引起果蔬根腐病的常见病原菌具有显著的拮抗作用，能够有效防治果蔬根腐病。同时，该枯草芽孢杆菌Z‑14菌株还具有较强的产生3‑吲哚乙酸和嗜铁素的能力，能够促进植物对营养物质的吸收，从而促进植物生长。

【技术实现步骤摘要】
一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌Z-14菌株及其应用
本专利技术涉及微生物
，特别是涉及一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌Z-14菌株及其应用。
技术介绍
根腐病是设施果蔬生产上危害最为严重的土传病害之一，尤其以黄瓜、番茄等葫芦科和茄科蔬菜根部病害尤为严重，一般会导致产量损失10％-15％以上，有时可达30％-40％以上，甚至绝收。根腐病主要发生在植株的茎基部和根部，在整个生育期均可发病，侵害植株根部维管组织使植株死亡，其中镰孢菌(Fusariumspp.)引发的根腐病尤为常见。据报道尖孢镰孢菌(F.oxysporium)是引起土传病害的优势种群。目前，蔬菜根部病害的防治仍以化学防治为主，但由于高毒、高残留、污染环境等诸多弊端，越来越多的化学农药被逐渐限制使用。生物防治绿色环保，病原菌不易产生耐药性。生防菌剂生产工艺较简单、且能促进作物生长，应用前景广阔。
技术实现思路
针对化学防治蔬菜根部病害具有高毒、高残留、污染环境等诸多弊端的技术问题，本专利技术提供一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌Z-14菌株及其应用。该枯草芽孢杆菌Z-14菌株对引起果蔬根腐病的常见病原菌具有显著的拮抗作用，特别对于番茄根腐病具有显著的防治效果，并具有较强的产生3-吲哚乙酸(IAA)和嗜铁素的能力，既能够有效防治果蔬根腐病，又能够促进植物对营养物质的吸收，促进植物生长。为解决上述技术问题，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：一方面，本专利技术实施例提供一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌Z-14菌株，其分类名称为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，于2020年9月25日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo.20821；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本专利技术所提供的枯草芽孢杆菌Z-14菌株从非感病地块黄瓜根际土壤中分离得到，属于芽孢杆菌属，其对引起果蔬根腐病的常见病原菌具有显著的拮抗作用，能够有效防治果蔬根腐病。同时，该枯草芽孢杆菌Z-14菌株还具有较强的产生3-吲哚乙酸(IAA)和嗜铁素的能力，能够促进植物对营养物质的吸收，从而促进植物生长。其16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示。该枯草芽孢杆菌Z-14菌株的筛选方法具体包括以下步骤：①从非感病地块黄瓜植株体内分离产芽孢细菌，然后从中筛选对尖孢镰刀菌有抑制作用的拮抗菌菌株；②将步骤①得到的拮抗菌菌株在NA斜面培养基上活化，将活化的菌株接种于NB培养基，37℃恒温振荡培养过夜。离心收集菌体，用无菌水洗涤并重悬于等体积的Msgg培养基中。吸取Msgg培养基菌悬液在37℃静置培养，从中筛选出具有显著的生物膜生成能力的拮抗菌菌株；③将步骤②得到的拮抗菌菌株转接到NB培养基中，37℃摇床振荡培养24h后再转接到YMA培养基中，37℃摇床振荡培养4d。取培养菌液以10000r/min离心15min，取上清液，加入等量PC比色液，在黑暗中静置0.5h，以培养基为对照，通过紫外—分光光度法筛选出具有产生IAA能力的拮抗菌菌株；④将步骤②得到的拮抗菌菌株点接在CAS蓝色定性检测培养基上，37℃恒温培养箱中倒置培养4d，筛选出具有产生嗜铁素能力的拮抗菌菌株；从中选择既能产生IAA、又能产生嗜铁素的拮抗菌菌株；⑤将步骤④得到的既能产生IAA、又能产生嗜铁素的拮抗菌菌株接种于NA斜面培养基，37℃恒温培养过夜进行活化，挑取菌苔接种NB培养基，37℃恒温振荡培养过夜，按照10％接种量将菌液接种于种子培养基中，37℃恒温振荡培养48h，离心回收上清液，采用0.22μm微孔滤膜过滤，收集滤液。以禾谷丝核菌(Rhizoctoniacerealis)、胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)、禾旋孢腔菌(Cochliobolussativus)、假禾谷镰刀菌(Fusariumpseudograminearum)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、大丽轮枝菌(Verticilliumdahliae)为指示菌，通过琼脂扩散法对滤液进行检测，筛选得到所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株。第二方面，本专利技术实施例还提供上述枯草芽孢杆菌Z-14菌株在防治果蔬根腐病中的应用。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌Z-14菌株及其分泌物具有对引起果蔬根腐病的多种病原菌均有显著的拮抗作用，能够有效防治果蔬根腐病。田间试验数据证明，枯草芽孢杆菌Z-14菌株对黄瓜、番茄和草莓根腐病均具有显著的防治效果。第三方面，本专利技术实施例还提供一种防治果蔬根腐病的方法，将果蔬幼苗在浓度为0.5×109～1.5×109cfu/mL的所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株的发酵菌液中浸泡10～20min后再种植。优选地，所述方法还包括在种植所述果蔬幼苗后18～42天用浓度为0.5×109～1.5×109cfu/mL的所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株的发酵菌液进行至少一次灌根处理。灌根用量以8～12L/hm2为宜。优选地，所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株的发酵菌液的制备方法包括：将所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株接种到NA斜面培养基，37℃恒温培养12～24h进行活化，挑取活化菌苔接入NB培养基中，37℃摇床振荡培养12～24h，以10％的接种量将培养物接种到NB培养基，37℃摇床振荡培养48～60h，用无菌水调节发酵液中芽孢浓度至0.5×109～1.5×109cfu/mL，即得所述发酵菌液。第四方面，本专利技术实施例还提供一种菌剂，所述菌剂包括上述枯草芽孢杆菌Z-14菌株的发酵物。该菌剂可用于处理果蔬幼苗或灌根、穴施，以达到防治果蔬根腐病、促进果蔬生长的作用。优选地，所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株的发酵物的制备方法包括：将所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株接种到NA斜面培养基，37℃恒温培养12～24h进行活化，挑取活化菌苔接入NB培养基中，37℃摇床振荡培养12～24h，以10％的接种量将培养物接种到NB培养基，37℃摇床振荡培养48～60h。附图说明图1为实施例1中分离的部分芽孢杆菌对尖孢镰刀菌的拮抗作用检测结果；图2为实施例1中Z-14菌株的发酵上清液对植物病原真菌的抑制作用；图3为实施例1中Z-14菌株的菌体形态特征；图4为实施例1中Z-14菌株的菌落形态特征；图5为实施例1中Z-14菌株及相关菌株的系统发育树。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。以下实施例中所采用的实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法。以下实施例中所采用的原料、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径获得。以下实施例中试验数据采用SPSS13.0软件进行分析，用单因素ANOVA进行方差分析，结果均以平均数±标准差表示，并用Duncan法进行多重比较。实施例1...

【技术保护点】
1.一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌Z-14菌株，其特征在于，其分类名称为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，于2020年9月25日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.20821；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。/n

【技术特征摘要】
1.一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌Z-14菌株，其特征在于，其分类名称为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，于2020年9月25日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo.20821；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。


2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌Z-14菌株在防治果蔬根腐病中的应用。


3.用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌Z-14菌株防治果蔬根腐病的方法，其特征在于，将果蔬幼苗在浓度为0.5×109～1.5×109cfu/mL的所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株的发酵菌液中浸泡10～20min后再种植。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在种植所述果蔬幼苗后18～42天用浓度为0.5×109～1.5×109cfu/mL的所述枯草芽孢杆菌Z-14菌株的发酵菌液进行至少一次灌根处理。


5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：张冬冬，肖嘉文，张学超，陈晓萌，
申请(专利权)人：河北冀微生物技术有限公司，河北农业大学，
类型：发明
国别省市：河北;13