一种降低脱靶效应的RNA基因编辑系统的制备方法技术方案

本发明专利技术涉及基因编辑技术领域，具体涉及一种降低脱靶效应的RNA基因编辑系统的制备方法。本发明专利技术提供的一种融合蛋白，自N端至C端依次包括Cas13b蛋白的氨基酸序列、ADAR2蛋白的氨基酸序列和具有二氢叶酸还原酶活性的氨基酸序列；上述融合蛋白应用到RNA基因编辑系统如RESCUE系统中，通过在碳端融合具有二氢叶酸还原酶活性的氨基酸序列，具有二氢叶酸还原酶活性的氨基酸序列可以结合TMP调控dRanCas13b表达Cas13b蛋白与hADAR2表达ADAR2蛋白，在不影响编辑效率的前提下，显著减少RNA编辑过程中脱靶SNP数量，进而提高RNA单碱基编辑系统应用安全性。

【技术实现步骤摘要】
一种降低脱靶效应的RNA基因编辑系统的制备方法
本专利技术涉及基因编辑
，具体涉及一种降低脱靶效应的RNA基因编辑系统的制备方法。
技术介绍
CRISPR-Cas9系统介导的基因编辑技术为人类单碱基突变疾病的修复提供了新的方向与思路。目前的主要单碱基编辑工具，包括CBE(Komoretal.,2016；Nishida,Ketal.,2016；Li,Xetal.,2018),ABE(Gaudelli,N.Metal.,2017),PE(AnzaloneAVetal.,2019)等可以进行DNA的单碱基编辑，修正疾病突变SNP，已经成为一种潜在的基因治疗技术。但是DNA的单碱基编辑是一种永久性的变化。相比之下，RNA编辑可以进行临时修复，消除蛋白质中的突变，停止它们的产生，或者改变它们在特定器官和组织中的工作方式。因为细胞会迅速降解未使用的核糖核酸，所以治疗带来的任何错误都会被清楚，而不是永远存在。目前，介导RNA单碱基编辑的工具主要有两类，第一类为介导A>G编辑的REPAIR系统(CoxDBTetal.,2017)，CRISP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其特征在于，自N端至C端依次包括Cas13b蛋白的氨基酸序列、ADAR2蛋白的氨基酸序列和具有二氢叶酸还原酶活性的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，自N端至C端依次包括Cas13b蛋白的氨基酸序列、ADAR2蛋白的氨基酸序列和具有二氢叶酸还原酶活性的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，编码具有二氢叶酸还原酶活性的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1中第6149位-6619位。


3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，还包括报告基团蛋白氨基酸序列；
可选的，所述融合蛋白，自N端至C端依次包括Cas13b蛋白的氨基酸序列、ADAR2蛋白的氨基酸序列、报告基团蛋白氨基酸序列和具有二氢叶酸还原酶活性的氨基酸序列；
可选的，所述报告基团蛋白为mCherry蛋白；
可选的，所述融合蛋白还包括NES氨基酸序列；
可选的，所述融合蛋白，自N端至C端依次包括Cas13b蛋白的氨基酸序列、NES氨基酸序列、ADAR2蛋白的氨基酸序列、报告基团蛋白氨基酸序列和具有二氢叶酸还原酶活性的氨基酸序列。


4.生物材料，其特征在于，包括如下任意一种：
1)编码权利要求1-3任一项所述的融合蛋白的核酸分子；可选的，所述核酸分子为DNA或RNA；可选的，所述DNA包括DNA分子、cDNA、基因组DNA或重组DNA；可选的，所述RNA为mRNA或hnRNA；可选的，如SEQIDNO.1所示的第926位-6619位的DNA分子或cDNA；
2)表达权利要求1-3任一项所述的融合蛋白的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系；
3)含1)所述的核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系；
4)含2)或3)中所述的表达盒的重组载体、重组微生物或转基因细胞系；
5)含2)或3)或4)中所述的重组载体的重组微生物或转基因细胞系。


5.权利要求1-3任一项所述的融合蛋白或权利要求4所述的生物材料在基因编辑或制备基因编辑工具中的用途；
可选的，所述基因编辑为RNA基因编辑；
可选的，在提高RNA基因编辑安全性中的用途；
可选的，在降低RNA基因编辑中脱靶效应的用途；
可选的，所述RNA基因编辑为RNA单碱基基因编辑；
可选的，所述RNA基因编辑为真核生物RNA单碱基基因编辑；
可选的，所述真核生物包括真核细胞。


6.一种RNA基因编辑系统，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的融合蛋白；
可选的，所述RNA基因编...

【专利技术属性】
技术研发人员：马旭，王译晗，高建恩，
申请(专利权)人：国家卫生健康委科学技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11