辅酶Q10的菌种扩培方法技术

本发明专利技术公开了一种辅酶Q10的菌种扩培方法，基于扩培要求获取对应的单菌落菌种，并利用灭菌的玻璃珠在含有9ml灭菌后的生理盐水的三角瓶中进行均匀破碎，得到菌悬液；利用刻度吸管嘴将吸取的0.2ml的所述菌悬液均匀的点布在培养板上；将所述培养板在32℃的培养箱中正常培养4个小时后，将所述培养板在32℃的培养箱中倒置培养5‑6天，完成扩培，提高生产实用性。

【技术实现步骤摘要】
辅酶Q10的菌种扩培方法
本专利技术涉及菌种培养
，尤其涉及一种辅酶Q10的菌种扩培方法。
技术介绍
yhD菌种为BJ01(辅酶Q10)产品发酵生产专用菌株，工艺要求为自然选育平板涂布生长5～6天的单菌落接种母瓶培养基摇床培养达到标准后接种种子罐进行生产一级种子培养。此方法要求单菌落数量巨大，自然选育涂布生长出来的单菌落大小、颜色等不够均匀，个体差异始终存在，菌落太小之后操作人员短时间挑取大量φ2mm左右的单菌落又必须保证不受人为操作的污染，比较考验操作者的细心、耐心及体力，人为挑取的过程中难免会眼花造成单菌落选择差异性的存在，接入母瓶培养后，个体差异可能就随着扩大，菌种的均一性和同步性就会对后续的发酵生产造成影响，导致生产实用性降低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种辅酶Q10的菌种扩培方法，提高生产实用性。为实现上述目的，本专利技术提供了一种辅酶Q10的菌种扩培方法，包括以下步骤：基于扩培要求获取对应的单菌落菌种，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液；利用刻度吸管嘴将吸取的0.2ml的所述菌悬液均匀的点布在培养板上；将所述培养板在32℃的培养箱中倒置培养5-6天，完成扩培。其中，基于扩培要求获取对应的单菌落菌种，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液，包括：基于扩培要求，在完成初始培育的三级菌种中任意挑取一个单菌落菌种；将所述单菌落菌种放入灭菌后的三角瓶中，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液。其中，将所述单菌落菌种放入灭菌后的三角瓶中，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液，包括：将所述单菌落菌种加入含有9ml灭菌后的生理盐水的三角瓶中；向所述三角瓶中加入多个灭菌后的所述玻璃珠，在设定的驱动力和设定的时间下，摇晃所述三角瓶，使所述单菌落菌种均匀破碎，得到菌悬液。其中，将所述培养板在32℃的培养箱中倒置培养5-6天，完成扩培之前，所述方法还包括：将所述培养板在32℃的培养箱中正常培养4个小时；4个小时后，将所述培养板倒置，继续在32℃的所述培养箱中培养。其中，利用刻度吸管嘴将吸取的0.2ml的所述菌悬液均匀的点布在培养板上之后，所述方法还包括：将所述培养板置于室温，直至所述菌悬液被完全吸收。本专利技术的一种辅酶Q10的菌种扩培方法，基于扩培要求获取对应的单菌落菌种，并利用灭菌的玻璃珠在含有9ml灭菌后的生理盐水的三角瓶中进行均匀破碎，得到菌悬液；利用刻度吸管嘴将吸取的0.2ml的所述菌悬液均匀的点布在培养板上；将所述培养板在32℃的培养箱中正常培养4个小时后，将所述培养板在32℃的培养箱中倒置培养5-6天，完成扩培，提高生产实用性。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术提供的一种辅酶Q10的菌种扩培方法的步骤示意图。图2是本专利技术提供的单菌落菌种点布示意图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。在本专利技术的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。请参阅图1，本专利技术提供一种辅酶Q10的菌种扩培方法，包括以下步骤：S101、基于扩培要求获取对应的单菌落菌种，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液。具体的，基于扩培要求，在完成初始培育的三级菌种中任意挑取一个单菌落菌种，所述扩培要求为颜色均一、圆润饱满，且达到三级菌种要求；然后，将所述单菌落菌种放入含有9ml灭菌后的生理盐水的三角瓶中，向所述三角瓶中加入多个灭菌后的所述玻璃珠，在设定的驱动力和设定的时间下，摇晃所述三角瓶，使所述单菌落菌种均匀破碎，得到菌悬液，采用的玻璃珠的数量根据所述三角瓶的容积进行限定，并且所述玻璃珠的表面需光滑、无裂横等，避免的所述单菌落菌种的结构造成破坏，或者导致破碎不均匀；而摇晃所使用的所述驱动力为人为手摇控制，确保在摇晃的过程中，玻璃珠与所述三角瓶的碰撞不会使所述三角瓶破碎，摇晃设定的时间一般为3分钟左右，过多会导致所述单菌落菌种结构被破坏，时间过少，会导致破碎不均匀。S102、利用刻度吸管嘴将吸取的0.2ml的所述菌悬液均匀的点布在培养板上。具体的，利用完整的1ml刻度吸管吸取0.2ml的所述菌悬液，利用刻度吸管嘴将吸取的0.2ml的所述菌悬液均匀的点布在直径为150mm的培养板上，具体为：利用刻度吸管吸取0.2ml的所述菌悬液，按照单菌落10-12颗/块，每颗单菌落的尺寸为6-8mm，相邻两个单菌落之间的间距为30mm左右，如图2所示，将点布完成后的所述培养板置于室温下，直至所述菌悬液被完全吸收，其中，所述培养板可以事先涂布一些灭菌剂进行灭菌处理，保证培养过程的无菌性，所述培养板上具有扩培所需的所有的营养液。S103、将所述培养板在32℃的培养箱中倒置培养5-6天，完成扩培。具体的，首先，将所述培养板在32℃的培养箱中正常培养4个小时，正常培养的意思是就正常放置培养，在4个小时之后，将所述培养板倒置，继续在32℃的所述培养箱中培养5-6天，完成扩培。所述方法还包括：获取被培养菌种，按照培养流程将所述被培养菌种培养至所述三级菌种，并对所有器皿进行灭菌处理。具体的，首先，获取BJ01(辅酶Q10)产品发酵生产专用菌株：yhD菌种，然后按照常规的菌种培养过程，将所述被培养菌种培养至三级菌种，此过程大概需要5-6天，并且在培养过程中，需要进行灭菌处理，避免对后续的扩培过程造成影响，为了提高扩培的效率，提前将需要用到的所述三角瓶、所述生理盐水、所述刻度吸管、所述刻度吸管嘴、所述玻璃珠和所述培养板等进行灭菌处理，保证扩培过程的纯净度和结果的稳定性。本专利技术采用了一颗单菌落加生理盐水玻璃珠破碎均匀制备菌悬液，再用此菌悬液点板培养的简单方法，来获得大小形态相对均一、颜色均匀、生长同步且种源绝对保证统一的点板单菌落，用此点板单菌落接种母瓶后同样能够达到自然选育单菌落接种母瓶后发酵的效果，而且比较稳定，最关键的是采用点板菌落接种母瓶的可操作性大大提高，且更加高效的降低了我们的人员操作造成污染的可能性，两种方法接种同样数量的生产母瓶接点板单菌落的操作时间上缩短了2/3甚至更多，劳动强度也随着降低，同时点板菌落的培养基及培养成本没有增加，所以这一方法比较工艺要求的自然选育单菌落有较强的生产实用性，而且使用量正在递减实验阶段，极有可能实现10颗点板单菌落可以与选育单菌落650颗能达到同样效果。两种方法培养单菌落实验数据本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种辅酶Q10的菌种扩培方法，其特征在于，包括以下步骤：/n基于扩培要求获取对应的单菌落菌种，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液；/n利用刻度吸管嘴将吸取的0.2ml的所述菌悬液均匀的点布在培养板上；/n将所述培养板在32℃的培养箱中倒置培养5-6天，完成扩培。/n

【技术特征摘要】
1.一种辅酶Q10的菌种扩培方法，其特征在于，包括以下步骤：
基于扩培要求获取对应的单菌落菌种，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液；
利用刻度吸管嘴将吸取的0.2ml的所述菌悬液均匀的点布在培养板上；
将所述培养板在32℃的培养箱中倒置培养5-6天，完成扩培。


2.如权利要求1所述的辅酶Q10的菌种扩培方法，其特征在于，基于扩培要求获取对应的单菌落菌种，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液，包括：
基于扩培要求，在完成初始培育的三级菌种中任意挑取一个单菌落菌种；
将所述单菌落菌种放入灭菌后的三角瓶中，并利用灭菌的玻璃珠进行均匀破碎，得到菌悬液。


3.如权利要求2所述的辅酶Q10的菌种扩培方法，其特征在于，将所述单菌落菌种放入灭菌后的三角瓶中，并利用灭菌的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓亮，王钱钢，杨宗禄，邓波，刘泽鸿，
申请(专利权)人：丽江映华生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53