一种植物乳杆菌、抗菌肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种植物乳杆菌，该菌株SHY21‑2在中国典型培养物保藏中心进行保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 2020043。还公开了一种抗菌肽及其制备方法，为该植物乳杆菌产生，是通过该植物乳杆菌发酵得到发酵液，经浓缩、纯化得到抗菌肽。还公开了该抗菌肽的编码基因，该植物乳杆菌在制备抗菌药物或者食品防腐剂中的应用，该抗菌肽在制备抗菌药物或者食品防腐剂中的应用。本发明专利技术的抗菌肽抗菌谱广，但是与已报道的其它抗菌肽不同，对常见的益生菌没有抑制效果，活性稳定，具有很好的耐热性；该抗菌肽能被人体消化吸收，能够用作天然食品防腐剂，对人体安全无害；并且该肽分子量小便于人工合成，可以用于食品、医药等领域。

【技术实现步骤摘要】
一种植物乳杆菌、抗菌肽及其应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一株新的植物乳杆菌菌株、其产生的抗菌肽和应用。
技术介绍
食品生产加工及贮藏过程的微生物安全问题一直是食品产业长期的关注焦点。添加化学防腐剂是目前常用的防腐手段，比如苯甲酸及其盐、山梨酸及其盐等防腐剂。但随着消费者对高品质食品需求的增加，化学防腐添加剂的潜在危害得到越来越多的关注。因此，利用无毒、无害的生物防腐剂进行防腐是未来的一个重要发展方向。抗菌肽(Antimicrobialpeptides,AMPs)以其分子量小，易于合成，无毒、无污染、无副作用、无抗药性以及能被人体消化等性质受到了人们的青睐。但是，目前食品工业中使用的的细菌素只有Nisin一种，但Nisin抗菌谱窄，不能抑制革兰氏阴性菌、酵母菌。因此寻找一种高效的、广谱的细菌素具有重要意义。昆虫、两栖类、水产动物，以及包括人在内的哺乳动物甚至植物及细菌等生物中都有抗菌肽产生。其中，乳酸菌能产生抑菌谱广，性质稳定的抗菌肽；并且乳酸菌广泛存在于各种发酵食品中，更便于食品防腐。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述问题，提供一种新的植物乳杆菌菌株、其产生的抗菌肽和应用。本专利技术为了实现其目的，采用的技术方案是：一种植物乳杆菌，该植物乳杆菌菌株LactobacillusplantarumSHY21-2在中国典型培养物保藏中心进行保藏，其保藏编号为CCTCCNO：M2020043。一种抗菌肽，该抗菌肽为上述的植物乳杆菌产生。优选地，该抗菌肽，其氨基酸序列为RPNEPRLLLPR。上述抗菌肽的制备方法，是通过上述的植物乳杆菌发酵得到发酵液，经浓缩、纯化得到抗菌肽。一种上述的抗菌肽的编码基因。优选地，该编码基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。前述的植物乳杆菌在制备抗菌药物或者食品防腐剂中的应用。前述的抗菌肽在制备抗菌药物或者食品防腐剂中的应用。本专利技术的有益效果是：该抗菌肽抗菌谱广，但是与已报道的其它抗菌肽不同，对常见的益生菌没有抑制效果，比如干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌等。对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为156ug/mL，并且活性稳定，即使121℃处理30min活性也没有显著变化，表明其具有很好的耐热性。该抗菌肽能被人体消化吸收，能够用作天然食品防腐剂，对人体安全无害。并且该肽分子量小便于人工合成，可以用于食品、医药等领域。附图说明图1是抗菌肽plantaricinLP21-2高效液相色谱洗脱曲线。图2是抗菌肽plantaricinLP21-2质谱图。图3是抗菌肽对plantaricinLP21-2金黄色葡萄球菌的作用方式。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但并不因此而限制本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。主要试剂如下：MRS肉汤培养基，购自广东环凯微生物科技有限公司，货号：027312；LB肉汤，购自北京索莱宝科技有限公司，货号：L8291。实施例1：抗菌肽plantaricinLP21-2的制备和分离纯化将1LMRS液体培养基，灭菌、冷却后，接入1％(v/v)的培养至对数期的植物乳杆菌LactobacillusplantarumSHY21-2菌液，37℃培养26h，将得到的发酵液在4000rpm下离心10min得上清液，上清液中加入80％硫酸铵盐析，11000rpm下离心15min得沉淀，离心得到的沉淀溶解在20mM的pH＝3.0柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，充分溶解后用纯水将溶液电导稀释至10mS/cm以下。稀释过后的样品，使用SPSepharoseFsatFlow阳离子柱(美国GE公司产品)分离；缓冲液为：A液是20mM的pH＝3.0的柠檬酸-磷酸盐缓冲液，B液是A中加入NaCl。收集洗脱液，在通过疏水柱OctylSepharose4FastFlow(美国GE公司产品)进一步分离；分离所用缓冲液为：A液是含1.3mol/LNH2SO4的20mM的柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH＝4)，B液是A液中不加入NH2SO4。经疏水柱纯化后的样品冻干浓缩，使用Superdex-20010/300GL凝胶柱(美国GE公司产品)进一步纯化，洗脱液为pH＝4的20mM柠檬酸-磷酸盐缓冲液。将分子筛纯化过后的具有抑菌活性的峰使用反相高效液相色谱进行最终纯化(图1是抗菌肽plantaricinLP21-2高效液相色谱洗脱曲线)，得到抗菌肽plantaricinLP21-2，纯化条件：安捷伦Shim-packArataC18(5μm，250L×4.6)，A液：超纯水+0.1％(v/v)三氟乙酸，B液：乙腈+0.1％三氟乙酸；梯度洗脱程序：0-4min，10％B；4-33min10％-100％B；33-38min，100％B；38-43min，100％-0％B；进样量：100uL，检测波长：220nm，流速：0.6mL/min。琼脂扩散法检测抑菌活性，选择金黄色葡萄球菌为指示菌；活性峰收集保留时间为4.835min。将植物乳杆菌菌株LactobacillusplantarumSHY21-2于2020年1月送中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)进行保藏，地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。保藏日期为2020年1月13日，保藏编号为CCTCCNO：M2020043，分类名为LactobacillusplantarumSHY21-2。通过LC-MS/MS方法对抗菌肽plantaricinLP21-2进行结构解析与氨基酸测序，图2是抗菌肽plantaricinLP21-2质谱图。得到抗菌肽plantaricinLP21-2的氨基酸序列为RPNEPRLLLPR(SEQIDNO:1)，该肽的分子量为1362.84Da。抗菌肽plantaricinLP21-2的具体特点如下：(a)序列特征：长度：11类型：氨基酸序列链型：单链拓扑结构：线性(b)分子类型：蛋白质(c)假设：否(d)反义：否实施例2：抗菌肽plantarumLP21-2抑菌实验(1)抑菌谱采用琼脂扩散法测定抗菌肽的抑菌活性，选择金黄色葡萄球菌为指示菌，首先在无菌培养皿中倒入薄薄的一层1.5％的灭菌琼脂，待其凝固后，用镊子夹取牛津杯均匀放置在琼脂上。配置LB半固体培养基，灭菌后冷却至不烫手；再将对数期的指示菌添加1％(v/v)到LB半固体培养基中(终浓度为106CFU/mL)，制成含指示菌的培养基，摇匀后倒入放有牛津杯的琼脂平板上，含指示菌的培养基没过牛津杯四分之一。待半固体培养基凝固后，取出牛津杯，打开平板盖子，放置无菌操作台中0.5h，使水分挥发。取实施例1中经纯化的抗菌肽plantarumLP21-2溶液(浓度是0.4mg/mL)，用移液器吸取100μL到平板的牛津杯孔中，封口胶封口后将平板放置在4℃的冰箱中2h，使细菌素在平板中充分扩散。最后将平本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物乳杆菌，该植物乳杆菌菌株Lactobacillus plantarum SHY21-2在中国典型培养物保藏中心进行保藏，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020043。/n

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌，该植物乳杆菌菌株LactobacillusplantarumSHY21-2在中国典型培养物保藏中心进行保藏，其保藏编号为CCTCCNO：M2020043。


2.一种抗菌肽，其特征在于：该抗菌肽为权利要求1的植物乳杆菌产生。


3.如权利要求2所述的抗菌肽，其特征在于：其氨基酸序列为RPNEPRLLLPR。


4.如权利要求2或3所述的抗菌肽的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：索化夷，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50