一种复合型芽孢杆菌益生菌及其制备与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌，其名称为AH‑G201，其保藏编号为CCTCC M 2020794。本发明专利技术公开了一种地衣芽孢杆菌，其名称为AH‑G202，其保藏编号为CCTCC M 2020795。本发明专利技术公开了一种复合型芽孢杆菌益生菌，包括：上述枯草芽孢杆菌，以及上述地衣芽孢杆菌。本发明专利技术公开了上述复合型芽孢杆菌益生菌制备方法，将上述枯草芽孢杆菌和上述地衣芽孢杆菌分别接种于种子培养液，恒温摇床培养；将含有上述枯草芽孢杆菌的种子培养液和含有上述地衣芽孢杆菌的种子培养液混合，得到复合型芽孢杆菌益生菌。本发明专利技术还公开了上述枯草芽孢杆菌、上述地衣芽孢杆菌以及上述复合型芽孢杆菌益生菌的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种复合型芽孢杆菌益生菌及其制备与应用
本专利技术涉及微生态制剂
，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌、一种地衣芽孢杆菌、及一种复合型芽孢杆菌益生菌及其制备、应用。
技术介绍
目前动物微生态制剂需求量巨大，市场对于动物微生态制剂进行大力研制并投入生产，但多数微生态制剂仅用于防止畜禽的腹泻，仅有少数微生态制剂被成功研发应用于医疗保健和饲料添加中，提高畜禽生长性能，降低料肉比。而作为合格的微生态制剂，其中的益生菌在使用过程中首先必须能耐受消化道低pH的环境、高温环境以及胆汁的作用，才能发挥有效作用。为了避免饲料加工过程和进入肠道后活菌数的损失，在筛选益生菌的初期必须进行分离株耐热性、耐酸碱性等诸多方面的研究。同时益生菌具有良好的病原拮抗作用，减少肠道内有害菌群的数量，并促进有益菌群的生长，有助于维持肠道菌群的平衡，提高机体抗病能力。虽然单一菌种也可作为益生菌，应用于畜禽养殖，但往往单一使用某种菌株的效果有限，而复合型益生菌中由于多种菌株可引发“协同效应”，不仅提高菌株生存能力，而且可以更加稳定地发挥作用。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种枯草芽孢杆菌、一种地衣芽孢杆菌、及一种复合型芽孢杆菌益生菌及其制备、应用。一种枯草芽孢杆菌，其名称为AH-G201，其保藏编号为CCTCCM2020794。一种地衣芽孢杆菌，其名称为AH-G202，其保藏编号为CCTCCM2020795。上述2种芽孢杆菌均来源于7日龄健康雏鹅肠道内容物。一种复合型芽孢杆菌益生菌，包括：上述枯草芽孢杆菌，以及上述地衣芽孢杆菌。优选地，枯草芽孢杆菌的活菌数≥5×1010cfu/mL，地衣芽孢杆菌的活菌数≥5×1011cfu/mL。上述复合型芽孢杆菌益生菌的制备方法，将上述枯草芽孢杆菌和上述地衣芽孢杆菌分别接种于种子培养液，37±1℃恒温摇床培养22-26h，转速为160-200r/min；将含有上述枯草芽孢杆菌的种子培养液和含有上述地衣芽孢杆菌的种子培养液混合，得到复合型芽孢杆菌益生菌。优选地，接种过程中，上述菌种的接种量为2-4％(V/V)。优选地，种子培养液的pH值为7.0±0.1，其组分包括：胰蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠和蒸馏水，胰蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠和蒸馏水的质量比为1：0.5：1：100。优选地，将含有上述枯草芽孢杆菌的种子培养液和含有上述地衣芽孢杆菌的种子培养液混合后进行冷冻干燥。即复合型芽孢杆菌益生菌可以为多种剂型，包括但不限于：悬浮液、油剂、水溶液、冻干粉。上述枯草芽孢杆菌、上述地衣芽孢杆菌、上述复合型芽孢杆菌益生菌中任意一种作为饲料添加剂的应用。上述枯草芽孢杆菌、上述地衣芽孢杆菌、上述复合型芽孢杆菌益生菌中任意一种在制备预防或治疗肠道感染的药物中的应用。上述枯草芽孢杆菌、上述地衣芽孢杆菌、上述复合型芽孢杆菌益生菌中任意一种在制备提高免疫力的药物中的应用。本专利技术提供了枯草芽孢杆菌AH-G201、地衣芽孢杆菌AH-G202、以及复合型芽孢杆菌益生菌具有良好的生长性、耐酸性、耐胆盐性和安全性，而且可以促进禽类生长，降低料肉比，同时能抑制大肠杆菌及沙门氏菌，提高机体免疫力，维护肠道微生态环境。附图说明图1为枯草芽孢杆菌AH-G201的菌落照片。图2为枯草芽孢杆菌AH-G201的镜检形态图片。图3为地衣芽孢杆菌AH-G202的菌落照片。图4为地衣芽孢杆菌AH-G202的镜检形态图片。图5为枯草芽孢杆菌AH-G201和地衣芽孢杆菌AH-G202的菌液生长情况。图6为枯草芽孢杆菌AH-G201和地衣芽孢杆菌AH-G202的进化树图谱。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1取7日龄健康雏鹅肠道内容物，采用灭菌生理盐水稀释，经70℃水浴10min，涂布于营养琼脂培养基，37℃恒温培养24h，观察菌落形态，挑取单菌落染色镜检。其中，营养琼脂培养基的pH值为7.0±0.1，由胰蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠和蒸馏水按质量比为1：0.5：1：100组成。所得枯草芽孢杆菌AH-G201属于兼性厌氧的、革兰氏阳性芽孢杆菌；菌体呈棒杆状，偶尔见长杆状，芽孢中生，呈椭圆形；最适生长温度为37±1℃，最适生长pH为7.0-7.4；营养琼脂平板培养12h，菌落不规则、边缘不光滑，菌落中央具有明显的环状凸起，经过16SrRNA基因测序、伯杰氏细菌手册(第9版)生理生化试验及细菌、菌落形态确定为枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌AH-G201。枯草芽孢杆菌AH-G201的菌落如图1所示，枯草芽孢杆菌AH-G201的镜检形态如图2所示。所得地衣芽孢杆菌AH-G202属于兼性厌氧的、革兰氏阳性芽孢杆菌；菌体呈棒杆状，偶尔见长杆状，芽孢中生，呈椭圆形；最适生长温度为37±1℃，最适生长pH为7.0-7.4；营养琼脂平板培养12h，菌落不规则、边缘不光滑，菌落有明显的褶皱。经过16SrRNA基因测序、伯杰氏细菌手册(第9版)生理生化试验及细菌、菌落形态确定为地衣芽孢杆菌，命名为地衣芽孢杆菌AH-G202。地衣芽孢杆菌AH-G202的菌落如图3所示，地衣芽孢杆菌AH-G202的镜检形态如图4所示。根据枯草芽孢杆菌AH-G201和地衣芽孢杆菌AH-G202的16SrRNA基因测序结果构建系统进化树，其结果如图6所示。实施例2实施例1中枯草芽孢杆菌AH-G201和地衣芽孢杆菌AH-G202于2020年11月30日送中国典型培养物保藏中心(中国武汉武汉大学)进行保藏，枯草芽孢杆菌AH-G201(BacillussubtilisAH-G201)的保藏编号为CCTCCNO:M2020794，地衣芽孢杆菌AH-G202(BacilluslicheniformisAH-G202)的保藏编号为CCTCCNO:M2020795。一种复合型芽孢杆菌益生菌，包括：上述枯草芽孢杆菌AH-G201，以及上述地衣芽孢杆菌AH-G202。该复合型芽孢杆菌益生菌的制备方法，包括如下步骤：将胰蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠和蒸馏水的质量比为1：0.5：1：100混合，灭菌得到pH值为7.0±0.1的种子培养液；将上述枯草芽孢杆菌和上述地衣芽孢杆菌按3％(V/V)分别接种于种子培养液，37℃恒温摇床培养24h，转速为180r/min。实施例3按5％(V/V)接种实施例2所得含有活化后菌株的种子培养液于LB培养基中，37℃恒温摇床培养24h，转速为180r/min；每隔2h用分光光度计测其OD600数值以检测菌液生长情况，其结果如图5所示。由图5表明：枯草芽孢杆菌AH-G201和地衣芽孢杆菌AH-G202生长情况良好。实施例4按5％(V/V)接种实施例2所得含有活化后菌株的种子培养液于LB培养基中，滴加浓度为0.1mol/L的盐酸调整LB培养基的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，其名称为AH-G201，其保藏编号为CCTCC M2020794。/n

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，其名称为AH-G201，其保藏编号为CCTCCM2020794。


2.一种地衣芽孢杆菌，其特征在于，其名称为AH-G202，其保藏编号为CCTCCM2020795。


3.一种复合型芽孢杆菌益生菌，其特征在于，包括：如权利要求1所述枯草芽孢杆菌，以及如权利要求2所述地衣芽孢杆菌。


4.根据权利要求1所述复合型芽孢杆菌益生菌，其特征在于，枯草芽孢杆菌的活菌数≥5×1010cfu/mL，地衣芽孢杆菌的活菌数≥5×1011cfu/mL。


5.一种如权利要求3或4所述复合型芽孢杆菌益生菌的制备方法，其特征在于，将如权利要求1所述枯草芽孢杆菌和如权利要求2所述地衣芽孢杆菌分别接种于种子培养液，37±1℃恒温摇床培养22-26h，转速为160-200r/min；将含有上述枯草芽孢杆菌的种子培养液和含有上述地衣芽孢杆菌的种子培养液混合，得到复合型芽孢杆菌益...

【专利技术属性】
技术研发人员：王桂军，吴琼，朱英奇，张冲，吕炫，张淼，曹守林，王蓓，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34