具有治疗2型糖尿病作用的一组合化合物制造技术

本专利本发明专利技术属于一种具有治疗2型糖尿病作用的人参皂苷组合物制备方法。其特征在于以五年生晒干人参，通过对药材原料的处理、提取、中空纤维素系统过滤、SB‑C18分离纯化，收集80%乙醇洗脱组分。得成分稳定的人参皂苷组合物。其特征在于12种人参皂苷组合物配比为noto‑R

【技术实现步骤摘要】
具有治疗2型糖尿病作用的一组合化合物
本专利技术属于一种从人参中提取的具有治疗2型糖尿病作用的一组合化合物。
技术介绍
人参，五加科植物人参(PanaxginsengC.A.Meyer)的干燥根及根茎，是我国名贵中药材，吉林省主要的道地药材。临床和实验研究均表明，人参及其主要活性成分具有调节糖脂代谢、抗糖尿病和肥胖的作用，效果较为显著，且耐受性好。在古代，人参被广泛的应用于糖尿病的治疗。在中药学科中描述的人参的药用价值中，“消渴”作用即是其中重要一项。据报道多种单体人参皂苷具有降低血糖，治疗糖尿病的作用，包括：人参皂苷Re、Rh2、Rg3、Rb1、Rc和Rg1。Xie[Xie,J.T.,Biochim.Biophys.Acta,2005,1740(3):319-25.]等利用ob/ob小鼠模型研究了人参皂苷Re的抗糖尿病效果，结果表明人参皂苷Re能有效降低糖尿病小鼠的血糖水平。Zhang等[ZhiguoZhang，MolecularEndocrinology.2007,22(1):186-195.]在3T3-L1小鼠脂肪细胞模型和大鼠模型中研究了人参皂苷Re在胰岛素信号通路中的作用，发现人参皂苷Re能够通过抑制JNK和NF-κB的活化来减轻胰岛素抵抗。Hwang等[J.T.Hwang,Phytother.Res.2009,23(2):262-266.]报道了在3T3-L1细胞中人参皂苷Rg3能有效地抑制脂肪细胞分化并且有效活化AMPK，这种活化具有时间依赖性。Shang等利用3T3-L1脂肪细胞模型研究发现，人参皂苷Rb1能够通过类胰岛素信号通路刺激葡萄糖摄取[ShangW,Journalofendocrinology.2008,198(3):561-569.]。Park等[SunminPark，Biosci.Biotechnol.Biochem.2008,72(11):2815-2823.]研究发现人参皂苷Rb1在3T3-L1脂肪细胞中能抑制甘油三酯的积累，他们还发现在Min6细胞中人参皂苷Rb1能通过PKA依赖的通路增强β细胞胰岛素分泌和生存能力。Lee等[Wen-KungLee，HormMetabRes.2007,39(5):347-354.]利用大鼠模型研究了人参皂苷Rh2增加胰岛素分泌，降低血糖水平以及改善胰岛素敏感性，减轻胰岛素抵抗的作用。在Lee等的研究中[Myoung-SuLee，JEthnopharmacol.2010,127(3):771-776.]，人参皂苷Rc在C2C12肌管细胞中通过一个AMPK依赖的机制刺激了葡萄糖摄取。Huang等[ChuanHuang，J.Agric.FoodChem.2010,58(10):6039-6047.]的研究表明，人参皂苷Rg1在3T3-L1小鼠脂肪细胞中能刺激葡萄糖摄取。本专利将人参通过水蒸气蒸制处理，再进行提取纯化，得到一组人参皂苷组合物。通过高脂高糖饲料喂养，链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠生化指标的检测筛选，对人参皂苷组合物中对2型糖尿病具有治疗作用的皂苷成分进行筛选分析。糖尿病及其并发症的发生与氧化及抗氧化系统失衡密切相关，高血糖使得自由基产生增多，抗氧化系统活性下降。SOD、GSH-Px、CAT三者一起构成了机体主要的抗氧化防御系统，抗氧化（SOD、GSH-Px、CAT）水平降低，可能导致糖尿病发病。糖尿病常伴随血脂异常，主要表现为胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高，高密度脂蛋白水平降低，会导致高血压、动脉粥样硬化及心脑血管疾病的发生，从而致死的严重后果。对体内甘油三酯和总胆固醇测定，并分析药物降低血清甘油三酯和总胆固醇水平的能力，会在一定程度上调节糖尿病患者体内脂质代谢，减少糖尿病并发症的发生。故而本专利利用2型糖尿病大鼠肝组织及血清样品进行脂质代谢及氧化应激水平检测对化合物进行筛选。实验结果表明，组合物中12中含量明确的人参皂苷有调节脂质代谢，提高氧化应激水平的作用，确定这组皂苷组合物对2型糖尿病具有治疗作用。
技术实现思路
本专利技术目的是制备一种具有治疗2型糖尿病作用的人参皂苷组合物。1.取五年生晒干人参，在温度为120℃的条件下，在高压水蒸气蒸锅中蒸制8小时，取出冷却至室温，放入烘箱70℃烘干，粉碎备用。2.用8-10倍量（W/V）水100℃水浴加热回流提取3次，每次1小时，，3KDa中空纤维素系统过滤取上清，后合并滤液，冻干得粗皂苷。3.用5倍量水溶解，通过SB-C18分离纯化，先用蒸馏水洗6-8倍柱体积，然后用20%乙醇除杂，80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱组分，蒸干溶剂，冻干既得成分稳定的人参皂苷组合物。4.12种人参皂苷组合物配比为noto-R1：Rg1:Re:Rf:Rg2:Rh1(s):Rb1:Rc:Rb2:Rb3:Rd:Rg3为0.32：1.00：0.94：1.35：1.15：0.54：0.54：0.81：0.94：0.66：1.52：0.89。二、含量测定1.优化得到色谱、质谱条件。采用超高效液相色谱—三重四级杆质谱联用技术，ThermoC-18色谱柱（100mm×2.1mm，1.7μm）；柱温30℃；采用二元线性梯度洗脱：流动相0.1%甲酸水溶液（A），乙腈（B）；洗脱梯度，0~5min(19%B)，5~25min(19%~28%B)，25~70min(28%~49%B)，70~77min(49%~90%B)，77~80min(90%B)，80~83min(90%~19%B)、83~88min(19%B)，流速为0.2mL·min-1，样品进样量为5μL。电喷雾离子源（ESI），雾化气温度为300℃，离子传输管温度为350℃，鞘气压力35Arb，辅助器压力10Arb，喷雾电压为2.5kV，选择负离子模式扫描，扫描范围m/z100-1500。2.精密称取人参皂苷组合物适量，80%色谱甲醇定容至5mL，过0.22μm滤膜进样分析。3.经LC-MS检测分析，人参皂苷组合物中12种人参皂苷组合物分别为：noto-R1为0.32g-4·g-1、Rg1为1.00g-4·g-1、Re为0.94g-4·g-1、Rf为1.35g-4·g-1、Rg2为1.15g-4·g-1、Rh1(s)为0.54g-4·g-1、Rb1为0.54g-4·g-1、Rc为0.81g-4·g-1、Rb2为0.94g-4·g-1、Rb3为0.66g-4·g-1、Rd为1.52g-4·g-1、Rg3为0.89g-4·g-1。经方法学考察，此方法准确稳定可行。12种人参皂苷组合物配比为noto-R1：Rg1:Re:Rf:Rg2:Rh1(s):Rb1:Rc:Rb2:Rb3:Rd:Rg3为0.32：1.00：0.94：1.35：1.15：0.54：0.54：0.81：0.94：0.66：1.52：0.89。二、皂苷组合物治疗2型糖尿病（T2DM）结果选用雄性Wistar大鼠180-220g，每组10只，适应环境一周后，用高脂高糖饲料（猪油18%，蔗糖20%，蛋黄3%，基础饲料59%）经8周连本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.本专利技术公开一种从人参中提取的具有治疗2型糖尿病作用，具有明确配比的人参皂苷组合物，其特征在于，所述的方法如下步骤：以生晒干参为原料经过水蒸气蒸制和烘干后，以水为提取溶剂加热回流提取，经过HPD-400大孔树脂纯化，冻干得到人参皂苷混合物。/n

【技术特征摘要】
1.本发明公开一种从人参中提取的具有治疗2型糖尿病作用，具有明确配比的人参皂苷组合物，其特征在于，所述的方法如下步骤：以生晒干参为原料经过水蒸气蒸制和烘干后，以水为提取溶剂加热回流提取，经过HPD-400大孔树脂纯化，冻干得到人参皂苷混合物。


2.权利要求1中所述原料特征在于：利用5年生晒干人参经过水蒸气蒸制，然后烘干为原料，取五年生晒干人参，在在高压水蒸气蒸锅中高压蒸汽蒸制8小时，温度控制在120℃，取出后放入烘箱70℃烘干。


3.权利要求1中所述方法，其特征在于：用8-10倍量（W/V）水100℃水浴加热回流提取3次，每次1小时，3KDa中空纤维素系统过滤取上...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴巍，焦丽丽，李慧，陈长宝，刘淑莹，
申请(专利权)人：长春中医药大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22