含有抗PD-L1抗体的稳定制剂制造技术

本发明专利技术提供一种稳定的抗PD‑L1(程序性细胞死亡蛋白配体1)抗体的药物制剂及其在医药上的应用。该制剂含有抗PD‑L1抗体、缓冲液，还可以含有至少一种稳定剂，任选的还可以含有表面活性剂。本发明专利技术提供的药物制剂可以有效的抑制抗体的聚集，阻止抗体产品的降解，具有高稳定性。

【技术实现步骤摘要】
含有抗PD-L1抗体的稳定制剂
本专利技术涉及治疗性药物制剂领域。尤其是，本专利技术涉及医药制剂领域，该制剂含有一种与程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)特异性结合的人源化抗体。
技术介绍
程序性细胞死亡蛋白配体1(Programmeddeath-ligand1，PD-L1)，又可称为分化簇274(clusterofdifferentiation274，CD274)或者B7同源蛋白1(B7homolog1，B7-H1)，属于肿瘤坏死因子超家族，是由290个氨基酸残基组成的I型跨膜糖蛋白，包含一个IgV样区、一个IgC样区、一个跨膜疏水区和一个30个氨基酸的胞内尾部，完整分子量为40kDa。PD-L1mRNA在几乎所有组织中都有表达，但PD-L1蛋白只在少部分组织中持续表达，包括肝脏、肺脏、扁桃体以及免疫特赦组织如眼、胎盘等。PD-L1也表达于活化的T细胞，B细胞，单核细胞，树突状细胞，巨噬细胞等。PD-L1的受体为PD-1，主要表达于CD4+T细胞、CD8+T细胞、NKT细胞、B细胞和活化的单核细胞等免疫细胞表面。PD-L1与PD-1结合可以启动PD-1胞浆区ITIM(免疫受体酪氨酸抑制作用模块)酪氨酸残基的磷酸化，促使酪氨酸磷脂酶与SHP2结合，活化SHP2，使下游Syk和PI3K发生去磷酸化从而传递终止信号，限制抗原呈递细胞或者树突状细胞与T细胞的相互作用。这种结合还可以进一步抑制T细胞的代谢，抑制抗凋亡蛋白Bcl-X2的分泌，减少效应细胞因子IL-2、IFN-r的分泌，诱导T细胞耗竭和凋亡，从而降低免疫T细胞参与的免疫应答，行使负性调节功能。T细胞识别抗原并活化后会分泌IFN-r。T细胞来源的IFN-r会扩增和维持T细胞功能，比如上调MHC分子，增强目标细胞的抗原处理和呈递，促进T细胞分化。IFN-r同时也会诱导免疫炎症部位组织的PD-L1表达，防止过度免疫对组织造成伤害。IFN-r可以诱导常规上皮细胞，血管内皮细胞，髓样细胞，幼稚T细胞等细胞表面PD-L1的表达。IFN-r诱导产生的干扰素调节因子1(IRF-1)也可以与PD-L1转录起始位点前200bp和320bp处的干扰素调节因子结合位点结合，从转录水平调节PD-L1。PD-L1可以与T细胞表面的PD-1结合行使负调节功能，从而保护炎性部位。PD-L1的负性调控功能在肿瘤免疫中发挥着重要作用。2004年，Konishi等率先在非小细胞肺癌病人的组织样本中发现PD-L1的表达，随后PD-L1被发现表达于各种肿瘤病人的组织中，包括胃癌，肺癌，肝癌，肝内胆管癌，结肠癌，胰腺癌，卵巢癌，乳腺癌，子宫颈癌，头颈鳞状细胞癌，鼻咽癌，食管癌，膀胱癌，肾细胞癌，皮肤癌，口腔鳞状细胞癌等。细胞恶变过程中，由于基因突变、外源基因(病毒)表达或静止基因激活等原因会产生新的蛋白分子，这些蛋白质在细胞内降解后，某些降解的肽段可以表达于细胞表面，成为肿瘤抗原。免疫系统可以通过免疫监察识别肿瘤抗原并清除肿瘤细胞，而肿瘤细胞则利用PD-L1逃避免疫攻击。肿瘤部位PD-L1的表达可以通过多种途径保护肿瘤细胞免受伤害。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)分泌IFN-r可诱导肿瘤细胞及周围基质细胞表达PD-L1。而肿瘤细胞的PD-L1可以与TIL上PD-1结合，抑制TIL细胞的活化，并进一步导致其凋亡。体外实验证明，肿瘤细胞相关PD-L1可以增加肿瘤特异T细胞的调亡，而PD-L1单克隆抗体可以减弱这种作用。肿瘤相关PD-L1可以促进T细胞表达IL-10，进一步抑制免疫反应。PD-L1不仅仅是PD-1的配体，他也可以作为受体传递反向的信号保护肿瘤细胞免受FAS-FASL等其他抗肿瘤途径诱导的凋亡。多种慢性和急性病毒也利用PD-L1信号逃避人体免疫检测。Wang等发现HIV感染者骨髓来源的树突状细胞上PD-L1的表达明显上调，经过抗病毒感染，抑制HIV复制后，PD-L1的表达下调，同时伴随T细胞数目的上调；Chen等研究发现慢性HBV感染者的T淋巴细胞和树突状细胞上PD-L1的表达也上调。病毒感染会诱导感染细胞高表达PD-L1，同时诱导CD8+T细胞表达PD-1，从而抑制T细胞作用，导致效应T细胞耗竭。因此，本领域存在着对于高稳定性的蛋白质制剂的需求。
技术实现思路
本专利技术通过提供含有与程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)特异性结合的人源抗体的医药制剂。一方面，本专利技术提供了一种抗PD-L1抗体药物制剂，包含：(1)缓冲液；(2)稳定剂；(3)抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。作为一种优选方式，所述的药物制剂还可以包含非离子型表面活性剂。在一些实施方式中，其中所述的缓冲液为醋酸缓冲液、枸橼酸缓冲液、组氨酸缓冲液之一或其组合。在一些实施方式中，其中所述的缓冲液为组氨酸缓冲液。在一些实施方式中，该组氨酸缓冲液是由L-组氨酸和L-组氨酸单盐酸盐制成。在本专利技术的实施方案中，缓冲液的浓度为约1mM～50mM，优选5mM～40mM，更优选10mM～30mM。在一些实施方式中，组氨酸缓冲液的浓度约10mM～30mM。在一些实施方式中，该组氨酸缓冲液的浓度约10mM。在一些实施方式中，该组氨酸缓冲液的浓度约20mM。在一些实施方式中，该组氨酸缓冲液的浓度约30mM。在一些实施方式中，其中所述的稳定剂包含选自氯化钠、盐酸精氨酸、甘露醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖的一种或其组合。在一些实施方式中，其中所述的稳定剂为海藻糖。在本专利技术的实施方案中，稳定剂的浓度为约50mM～300mM，优选100mM～300mM，更优选200mM～250mM。在一些实施方式中，海藻糖的浓度约200mM至约250mM。在一些具体的实施方式中，海藻糖的浓度约200mM、120mM或240mM。在一些实施方式中，其中所述的药物制剂的pH为约5.0～6.5。在一些实施方式中，其中所述的药物制剂的pH为约5.0。在一些实施方式中，其中所述的药物制剂的pH为约5.5。在一些实施方式中，其中所述的药物制剂的pH为约6.0。在一些实施方式中，其中所述的药物制剂的pH为约6.5。在一些实施方式中，其中所述的抗体或其抗原结合片段包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：HCDR1具有的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；HCDR2具有的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；HCDR3具有的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；LCDR1具有的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示；LCDR2具有的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示；并且LCDR3具有的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示。在一个具体的实施方式中，其中所述的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH具有的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；和VL具有的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。在一个具体的实施方式中，其中所述的抗体或其抗原结合片段包含重链(HC)和轻链(LC)，其中HC具有的氨基酸序列如SEQIDNO:9所示；和LC具有的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示。在一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗PD-L1抗体药物制剂，包含：/n(a)缓冲液；/n(b)稳定剂；/n(c)特异性结合人PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体或其抗原结合片段包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：/nHCDR1具有的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；/nHCDR2具有的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；/nHCDR3具有的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；/nLCDR1具有的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；/nLCDR2具有的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；和/nLCDR3具有的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；并且/n该药物制剂的pH为约5.0～6.5。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗PD-L1抗体药物制剂，包含：
(a)缓冲液；
(b)稳定剂；
(c)特异性结合人PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体或其抗原结合片段包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：
HCDR1具有的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；
HCDR2具有的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；
HCDR3具有的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；
LCDR1具有的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示；
LCDR2具有的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示；和
LCDR3具有的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；并且
该药物制剂的pH为约5.0～6.5。


2.如权利要求1所述的药物制剂，其特征为所述的缓冲液为醋酸缓冲液、枸橼酸缓冲液、组氨酸缓冲液之一或其组合。


3.如权利要求2所述的药物制剂，其特征为所述的缓冲液为组氨酸缓冲液。


4.如权利要求1～3任一项所述的药物制剂，其特征为所述的缓冲液的浓度约为10～30mM。


5.如权利要求1所述的药物制剂，其特征为所述的稳定剂为氯化钠、盐酸精氨酸、甘露醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖之一或其组合。


6.如权利要求5所述的药物制剂，其特征为所述的稳定剂为海藻糖。


7.如权利要求1、5或6任一项所述的药物制剂，其特征为所述的稳定剂浓度为约30-300mM、优选200～250mM。
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘洪川，刘沛想，张静，孟琴，姚盛，冯辉，武海，
申请(专利权)人：上海君实生物医药科技股份有限公司，苏州君盟生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31