一种化妆品中玻色因的液相检测方法技术

本发明专利技术提供一种化妆品中玻色因的液相检测方法，属于化妆品检测领域。该检测方法为HPLC‑示差折光检测法，HPLC的色谱条件为：色谱柱采用氨基柱，流动相为75～85％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为5～12μL。该方法的样品前处理简单、检测灵敏度高，线性范围宽，能够实现对各种化妆品中玻色因的含量进行有效检测。

【技术实现步骤摘要】
一种化妆品中玻色因的液相检测方法
本专利技术涉及化妆品检测领域，尤其涉及化妆品中玻色因的液相检测方法。
技术介绍
玻色因(Pro-Xylane)，又名羟丙基四氢吡喃三醇，是一种生物活性物质，能促进糖胺聚糖(GAG)的产生，进而促进蛋白聚糖的产生，同时，玻色因在这个过程中，还能通过GAG促进合成一些细胞因子和胶原蛋白再生，从而使玻色因具有对抗皮肤老化、脱水等症状，使肌肤变得紧致、有弹性。另外，还有一些实验证明，玻色因能够促进成纤维细胞生长因子(FGF，类似EGF)的再生，能够有效修复受损肌肤。因此，玻色因被广泛应用于化妆品领域，主要应用于抗皱等高端护肤品产品上。目前，市面上有多种化妆品，均声称其含有玻色因，但鲜少能明确标示出玻色因的含量。而即便有产品标示出相关浓度，也仅是其所含活性物质的浓度，而非纯的玻色因的浓度，比如欧莱雅旗下产品赫莲娜，其活性物质的浓度一般是30％，但其实际所含玻色因的浓度未公布。因此，如何快速而有效的检测各种护肤品中玻色因的实际含量，对于相关产品的质量控制具有非常重要的意义，而现有的检测方法难以实现对化妆品中玻色因含量的有效检测。鉴于此，本申请提出一种玻色因的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种化妆品中玻色因的液相检测方法，该方法的样品前处理简单、检测灵敏度高，线性范围宽，能够实现对各种化妆品中玻色因的含量进行有效检测。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种化妆品中玻色因的液相检测方法，所述方法为HPLC-示差折光检测法，所述HPLC的色谱条件为：色谱柱采用氨基柱，流动相为75～85％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为5～12μL；检测步骤包括：A.制备标准工作曲线：准确称取玻色因标准物质，用超纯水配制成25～50mg/ml的标准贮备液，再成倍稀释成一系列不同浓度的玻色因溶液，采用所述HPLC的色谱条件检测后，以响应峰面积对浓度积分得到标准曲线；B.样品制备：用三氯甲烷分散待测样品后，加入超纯水涡旋萃取后，8000～15000rmp/min离心8～15min，取上清液过滤，滤液供检测；C.样品检测：采用所述HPLC的色谱条件检测待测样品后，得到所述待测样品中所含玻色因的响应峰面积，代入到所述标准曲线中进行计算，得到所述待测样品中所含玻色因的浓度。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述制备标准工作曲线步骤中，一系列玻色因溶液的浓度分别为：5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述HPLC的色谱条件中，柱温为65～72℃。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述HPLC的色谱条件中，流速为0.5～1mL/min。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述样品制备步骤中，采用0.45μm水相滤膜对所述上清液进行过滤。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，采用所述制备标准工作曲线的方法，得到的标准曲线为y＝0.7273x，相关系数为0.996，线性范围为5～25mg/mL。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，采用所述HPLC-示差折光检测法，检出限为0.2g/100g。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述氨基柱为ShodexAsahipakNH2P-504E。本专利技术的效果如下：本专利技术提供的这种化妆品中玻色因的液相检测方法，采用HPLC-示差折光检测法，专属性强，灵敏度高，准确度好，线性范围宽，且样品的前处理过程简单快捷，能够实现对各种化妆品中玻色因的含量进行有效检测，有助于各类以玻色因为主要活性成分的化妆品的产品质控。附图说明图1为本专利技术实施例1中标准对照品的液相色谱图；图2为本专利技术实施例1中的标准曲线；图3为本专利技术实施例1中1号待测样品的液相色谱图；图4为本专利技术实施例1中2号待测样品的液相色谱图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1本实施例提供一种化妆品中玻色因的液相检测方法，其包括：(1)制备标准曲线：准确称取玻色因标准物质50mg，用超纯水配制成50mg/ml的标准贮备液，再成倍稀释至5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL，采用HPLC-示差折光检测法进行检测后，得到如图1所示的色谱图，其中保留时间在5.4min处的色谱峰为玻色因，以响应峰面积对浓度积分得到如图2所示的标准曲线：y＝0.7273x，相关系数为0.9963；其中，HPLC的色谱条件为：色谱柱采用ShodexAsahipakNH2P-504E，流动相为80％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为10μL，柱温为68℃，流速为0.8mL/min；(2)样品制备：以某公司市售的无痕抗皱霜为1号待测样品。称取1g待测样品，加入5ml三氯甲烷分散后，加入5ml超纯水涡旋萃取，10000rmp/min离心10min，取上清液，用0.45μm水相滤膜过滤，得到1号待测样品供试液。(3)样品检测：采用上述步骤(1)中的述HPLC的色谱条件检测1号待测样品供试液，得到如图3所示的色谱图，将该色谱图中玻色因的响应峰面积，代入到所述标准曲线y＝0.7273x中进行计算，得到待测样品中所含玻色因的浓度为59mg/g。实施例2本实施例提供一种化妆品中玻色因的液相检测方法，其包括：(2)制备标准曲线：准确称取玻色因标准物质50mg，用超纯水配制成50mg/ml的标准贮备液，再成倍稀释至5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL，采用HPLC-示差折光检测法进行检测后，以响应峰面积对浓度积分得到标准曲线：y＝0.7273x，相关系数为0.9963；其中，HPLC的色谱条件为：色谱柱采用ShodexAsahipakNH2P-504E，流动相为75％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为5μL，柱温为72℃，流速为0.5mL/min；(2)样品制备：以通过化学合成方法得到的玻色因原料为2号待测样品，其中所含成分为玻色因和水。将其用0.45μm水相滤膜过滤，得到2号待测样品供试液。(3)样品检测：采用上述步骤(1)中的述HPLC的色谱条件检测2号待测样品供试液，得到如图4所示的色谱图，将该色谱图中玻色因的响应峰面积，代入到所述标准曲线y＝0.7273x中进行计算，得到待测样品中所含玻色因的浓度为48.05％。下面通过实验对本专利技术提供的玻色因的液相检测方法进行方法学考察，结果如下：...

【技术保护点】
1.一种化妆品中玻色因的液相检测方法，其特征在于，所述方法为HPLC-示差折光检测法，所述HPLC的色谱条件为：色谱柱采用氨基柱，流动相为75～85％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为5～12μL；/n检测步骤包括：/nA.制备标准工作曲线：准确称取玻色因标准物质，用超纯水配制成25～50mg/ml的标准贮备液，再成倍稀释成一系列不同浓度的玻色因溶液，采用所述HPLC的色谱条件检测后，以响应峰面积对浓度积分得到标准曲线；/nB.样品制备：用三氯甲烷分散待测样品后，加入超纯水涡旋萃取后，8000～15000rmp/min离心8～15min，取上清液过滤，滤液供检测；/nC.样品检测：采用所述HPLC的色谱条件检测待测样品后，得到所述待测样品中所含玻色因的响应峰面积，代入到所述标准曲线中进行计算，得到所述待测样品中所含玻色因的浓度。/n

【技术特征摘要】
1.一种化妆品中玻色因的液相检测方法，其特征在于，所述方法为HPLC-示差折光检测法，所述HPLC的色谱条件为：色谱柱采用氨基柱，流动相为75～85％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为5～12μL；
检测步骤包括：
A.制备标准工作曲线：准确称取玻色因标准物质，用超纯水配制成25～50mg/ml的标准贮备液，再成倍稀释成一系列不同浓度的玻色因溶液，采用所述HPLC的色谱条件检测后，以响应峰面积对浓度积分得到标准曲线；
B.样品制备：用三氯甲烷分散待测样品后，加入超纯水涡旋萃取后，8000～15000rmp/min离心8～15min，取上清液过滤，滤液供检测；
C.样品检测：采用所述HPLC的色谱条件检测待测样品后，得到所述待测样品中所含玻色因的响应峰面积，代入到所述标准曲线中进行计算，得到所述待测样品中所含玻色因的浓度。


2.根据权利要求1所述的化妆品中玻色因的液相检测方法，其特征在于，所述制备标准工作曲线步骤中，一系列玻色因溶液的浓度分别为：5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：王甜甜，饶亮明，李兴德，
申请(专利权)人：湖州中科院应用技术研究与产业化中心，中国科学院成都生物研究所湖州生物资源利用与开发创新中心，
类型：发明
国别省市：浙江;33