【技术实现步骤摘要】
一种基于Ag@Au的多孔结构的双信号纳米放大探针及其SPR免疫检测的方法
本专利技术涉及免疫学分析检测
，特别涉及一种基于Ag@Au的双信号纳米放大探针及SPR免疫检测的方法。
技术介绍
表面等离子体共振传感是基于表面等离子体共振SPR这一光学现象发展的。Liedberg等人于1983年发现金属表面附近的质量累积会影响金属与电介质交界面的折射率，而SPR信号对折射率变化很敏感，首次开发了表面等离子体共振传感器研究结合反应。SPR传感器为研究分子结合提供了一种快速、实时、高选择性和高灵敏性的测定方法；SPR可在分子水平上分析生物及药物分子之间的相互作用，如：蛋白质、DNA、脂质到小分子、噬菌体及病毒等，SPR传感器还可以研究其相互作用而应用于临床医学、药物筛选、食品安全及环境检测领域。SPR传感器电化学分析技术和免疫检测技术相结合，因制作简单、损耗小及高选择性和实时性等优点而备受关注。夹心免疫分析是利用抗体与待测抗原发生特异性结合时，根据待测物浓度对SPR信号变化的影响关系实现免疫检测的灵敏度。现有技术中...
【技术保护点】
1.一种基于Ag@Au的多孔结构的双信号纳米放大探针，其特征在于，通过如下步骤备制得到：/n第一步，氯金酸为金源，硝酸银为银源，超纯水作为溶剂，过氧化氢为刻蚀溶剂，合成的多孔核壳纳米粒子p-Ag@Au；/n第二步，利用11-巯基十一烷酸MUA将p-Ag@Au核壳纳米粒子表面羧基功能化，然后将二级抗体Ab
【技术特征摘要】
1.一种基于Ag@Au的多孔结构的双信号纳米放大探针，其特征在于，通过如下步骤备制得到：
第一步，氯金酸为金源，硝酸银为银源，超纯水作为溶剂，过氧化氢为刻蚀溶剂，合成的多孔核壳纳米粒子p-Ag@Au；
第二步，利用11-巯基十一烷酸MUA将p-Ag@Au核壳纳米粒子表面羧基功能化，然后将二级抗体Ab2，固定于其表面得到多孔结构的双信号放大探针p-Ag@Au-Ab2。
2.根据权利要求1所述的基于Ag@Au的多孔结构的双信号纳米放大探针，其特征在于，
第一步中，多孔核壳纳米粒子p-Ag@Au的合成方法为：将超纯水加热至100℃后，边搅拌边加入抗坏血酸，1min后，加入氯化钠溶液、硝酸银溶液和柠檬酸钠的混合溶液，继续搅拌并于100℃保持1h，用超纯水离心洗涤后，将固相微粒分散于超纯水中得到Ag纳米颗粒水溶胶；将所得Ag纳米颗粒水溶胶超声30min，边搅拌边加入氨水溶液和氯金酸并加热回流30min,待冷却至室温，以11000rpm离心，超纯水洗涤数次后获得Ag@Au核壳纳米粒子；最后，将Ag@Au核壳纳米粒子超声分散均匀到H2O2中，磁力搅拌下，经H2O2刻蚀得到多孔的核壳纳米粒子p-Ag@Au；
第二步中，将多孔的核壳纳米粒子p-Ag@Au超声分散于PBS磷酸缓冲溶液中，加11-巯基十一烷酸MUA搅拌，在多孔的核壳纳米粒子p-Ag@Au表面修饰羧基，接着以EDC和NHS活化羧基，然后再加入二级抗体Ab2，4℃条件下低温下搅拌，再通过低温10000转/分的高速离心分离后，得到多孔结构的双信号放大探针p-Ag@Au-Ab2，并分散于PBS中，于4℃低温储藏。
3.根据权利要求2所述的基于Ag@Au的多孔结构的双信号纳米放大探针，其特征在于，第二步中，所述多孔的核壳纳米粒子p-Ag@Au在PBS磷酸缓冲溶液中的分散浓度为0.5-2mg/mL，MUA的浓度为100mM/L，EDC和NHS的浓度为10mg/mL，二级抗体(Ab2)的浓度为1mg/mL；其中，p-Ag@Au、MUA、EDC和NHS的摩尔投料量比为7：1：5：6；所述低温为4℃，离心转速及时间为10000r和30～60min。
4.一种采用权利要求1或2或3所述的多孔结构的双信号纳米放大探针进行SPR免疫检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：
第1步，将清洗干净的SPR芯片装入表面等离子体共振检测分析仪，并以一定的流速将PBS磷酸盐缓冲溶液通入检测池使检测仪的偏移信号基线平稳；
第2步，将一级抗体Ab1固定于SPR芯片表面，并用牛血清蛋白溶液进行封闭；
第3步，向检测池中注入已知浓度的抗原溶液和一级抗体Ab1与，使SPR芯片表面实现一级抗体Ab1与抗原的结合；
第4步，将向检测池注入适当浓度的双信号...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨占军，石凤，李娟，詹婧逸，欧阳璞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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