清开灵注射液中间体及成品中指标成分含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及到清开灵注射液中间体及成品中指标成分含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法或其它分析方法测定其中各指标成分的含量，采用紫外分光光度法对稀释后的样品进行全波长扫描；将样品分为两部分：校正集和验证集，根据校正集样品的紫外光谱数据及含量，采用化学计量学方法对数据进行处理，利用ＴＱＡｎａｌｙｓｔ软件和Ｍａｔｌａｂ６．５软件建立数学模型，将验证集样品的紫外光谱数据代入数学模型，比较预测值与真值，验证该技术的准确可靠。本发明专利技术的方法可用于银黄液中绿原酸及黄芩苷的含量测定，四混液中栀子苷和总氮的含量测定，可用于对以上成分含量的快速在线检测；可用于清开灵注射液中间体及成品的含量测定及快速在线检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及清开灵注射液生产过程中间体及成品中指标成分含量的快速测定方法，更具体地说，涉及银黄液中绿原酸和黄芩苷含量的紫外光谱测定方法，四混液中栀子苷和总氮的含量的紫外光谱测定方法，涉及到对清开灵注射液生产过程中间体-银黄液中绿原酸及黄芩苷含量的测定方法或对该中间体银黄液中绿原酸及黄芩苷含量的在线检测方法，涉及到对清开灵注射液生产过程中间体四混液中栀子苷和总氮的含量的在线检测方法。
技术介绍
清开灵注射液是由古方安宫牛黄丸经拆方研制而成的一种现代中药注射剂，其处方由胆酸、猪去氧胆酸、珍珠母、板蓝根、水牛角、黄芩苷、栀子、金银花八味药组成，具有清热解毒、清营凉血、泻火除烦、化痰通络、镇惊安神、醒神开窍的功能。清开灵注射液中间体及成品中的指标成分包括总氮、黄芩苷、栀子苷、胆酸、猪去氧胆酸和绿原酸。银黄液是清开灵注射液生产过程中间体之一，是由金银花提取液与黄芩苷水溶液按照一定比例混合而成。目前，相关规定及报导中多采用凯氏定氮法测定清开灵注射液成品中的总氮含量，采用高效液相色谱法测定成品中其它指标成分例如绿原酸和黄芩苷的含量，但未见对生产过程中间体中的指标成分绿原酸和黄芩苷进行检测，并且这些方法检测时间长，不适于中药制剂生产过程的在线质量控制。
技术实现思路
为了克服现有的检测方法费时的缺点，实现清开灵注射液生产过程中间体及成品中的指标成分的在线检测，本专利技术采用紫外光谱法结合化学计量学例如偏最小二乘法进行分析和数据处理，不仅快速方便，而且准确可靠。 本专利技术的，通过下述技术方案予以实现 ，其特征在于采用高效液相色谱法及其它分析方法(如凯氏定氮法)测定清开灵注射液中间体及成品中指标成分的含量，并采用紫外分光光度法对稀释后的样品进行全波长扫描；将样品分为两部分，即校正集和验证集，根据校正集样品的紫外光谱数据及含量，采用化学计量学方法对数据进行处理，并利用TQ Analyst软件和Matlab6.5软件建立数学模型，再将验证集样品的紫外光谱数据代入数学模型，比较预测值与真值，验证该技术的准确可靠。 如以上所述的方法，其特征在于所述的是指 银黄液中绿原酸及黄芩苷的含量的测定方法，是采用反相高效液相色谱法测定银黄液样品中绿原酸和黄芩苷的含量，并采用紫外光谱-化学计量学方法中的偏最小二乘法进行分析和数据处理； 上述银黄液紫外光谱的测定是指采用HP-8453紫外-可见分光光度仪，将银黄液样品稀释2000倍，在190～400nm进行扫描，扫描间隔1nm； 上述采用紫外光谱-偏最小二乘法进行分析和数据处理是指 采用紫外分光光度法对稀释2000倍的银黄液样品进行全波长扫描，将银黄液样品分为两部分，即校正集和验证集，根据校正集样品的紫外光谱数据及含量，采用偏最小二乘并利用TQ Analyst软件和Matlab 6.5软件建立数学模型，再将验证集样品的紫外光谱数据代入数学模型，比较预测值与真值，验证该技术的准确可靠； 上述运用TQ Analyst软件是指，分别采用逐步多元线形回归、主成分回归和偏最小二乘法进行数据处理，建立UV预测模型，并对模型进行检验，比较结果。 如以上所述的方法，其中上述采用TQ Analyst软件进行数据处理，是以偏最小二乘PLS为例，说明以下数据处理过程的 打开TQ Analyst软件，看操作界面，在标签栏可以看到“Description”、“Pathlength”、“Component”等标签； 在“Description”标签下，选择定量方法为PLS，并为该分析方法加标题及相关信息； 在“Pathlength”标签下，选择光程类型constant，固体样品则选择MSC或SNV； 在“component”标签下，填写样品中待测组分信息，包括组分名称、缩写、单位、测量精度； 待测组分为绿原酸和黄芩苷，含量单位为mg·mL-1，测量精度到小数点后4位，并定义分析范围，绿原酸含量范围是0～1mg·mL-1，黄芩苷含量范围是20～45mg·mL-1； 在“Standards”标签下，点击“Open Standard”，选择用于建模的样品的UV光谱，常见文件格式有.spa和.csv，填写各样品中组分含量； 通过点击“Usage”下拉框可以为样品选择类别Calibration或Validation； 将“Allow spectral processing”选中，则在“Standard”标签后出现新标签“Spectra”； 在“Spectra”标签下，选择光谱预处理方法包括是否需要背景校正、导数变换或平滑处理； 在“Regions”标签下，选择用于建模的光谱范围，并根据模型预测结果对光谱范围进行优化；筛选的波长范围为271～346nm； 在“Other”标签下，选择数据是否进行标准化处理及方法；调整因子数，因子数由校正集交叉验证均方差(RMSECV)或预报残差平方和(PRESS)来确定； 点击标签栏上方的“Calibrate”按钮，即可出现绿原酸含量建模结果的界面； 界面中的左图为模型计算值与HPLC测定结果的相关图，图中的两个数据分别是校正集样品绿原酸含量的计算值与真值的相关系数(R)和均方根误差(RMSEC)，R越大，RMSEC越小，模型拟合能力越好；右图为偏差图，图下方的两个数据分别是验证集样品绿原酸含量的计算值与真值的均方根误差(RMSEP)和因子数，RMSEP越小，模型预测能力越强； 表格中显示了每个样品中绿原酸含量的计算值、真值及偏差； 点击表右侧的“next”或“back”按钮，则会翻到黄芩苷含量建模结果的界面； 点击菜单栏中的“Diagnostics”，选择该菜单中的“PRESS”项对校正集采用交叉验证法，通常选择留一法，计算不同因子数时的PRESS和RMSECV； 当因子数为6时，绿原酸含量的RMSECV最小，因此在建立绿原酸含量的UV-PLS模型时因子数取6； 点击“nest”或“back”按钮，翻到黄芩苷含量的PRESS界面，同理选择了建立黄芩苷含量的UV-PLS模型时的因子数6。 如以上所述的，所述的是指四混液中栀子苷和总氮的含量的测定方法，上述四混液中栀子苷和总氮的含量测定方法， 所用仪器为Agilent 1100高效液相色谱仪，包括四元泵、真空脱气泵、自动进样器、柱温箱、DAD二极管阵列检测器、HP数据处理工作站，KDY型定氮仪； 所用试药为栀子苷对照品购自中国药品生物制品鉴定所，四混液由指定药厂提供，乙腈为色谱纯； 所用方法为色谱条件Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相乙腈-水(13∶87)；流速1.0mL·min-1；检测波长238nm；柱温30℃，其中总氮的含量测定按常规方法进行； 其中四混液紫外光谱的测定方法如下 所用仪器为HP-8453紫外-可见分光光度仪； 具体步骤为将四混液样品稀释500倍，在190～400nm进行扫描，扫描间隔1nm，得到四混液紫外光谱图； 接着进行数据处理 运用TQ Analyst软件，分别采用逐步多元线性回归、主成分回归和偏最小二乘法对四混液的高效液相色谱及本文档来自技高网...

【技术保护点】
清开灵注射液中间体及成品中指标成分含量的测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法及其它分析方法测定清开灵注射液中间体及成品中各指标成分的含量，并采用紫外分光光度法对稀释后的样品进行全波长扫描；将样品分为两部分，即校正集和验证集，根据校正集样品的紫外光谱数据及含量，采用化学计量学方法对数据进行处理，并利用ＴＱ　Ａｎａｌｙｓｔ软件和Ｍａｔｌａｂ　　６．５软件建立数学模型，再将验证集样品的紫外光谱数据代入数学模型，比较预测值与真值，验证该技术的准确可靠。

【技术特征摘要】
1.清开灵注射液中间体及成品中指标成分含量的测定方法，其特征在于采用高效液相色谱法及其它分析方法测定清开灵注射液中间体及成品中各指标成分的含量，并采用紫外分光光度法对稀释后的样品进行全波长扫描；将样品分为两部分，即校正集和验证集，根据校正集样品的紫外光谱数据及含量，采用化学计量学方法对数据进行处理，并利用TQ Analyst软件和Matlab 6.5软件建立数学模型，再将验证集样品的紫外光谱数据代入数学模型，比较预测值与真值，验证该技术的准确可靠。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的清开灵注射液中间体及成品中指标成分含量的测定方法是指银黄液中绿原酸及黄芩苷的含量的测定方法，是采用反相高效液相色谱法测定银黄液样品中绿原酸和黄芩苷的含量，并采用紫外光谱-化学计量学方法中的偏最小二乘法进行分析和数据处理；上述银黄液紫外光谱的测定是指采用HP-8453紫外-可见分光光度仪，将银黄液样品稀释2000倍，在190～400nm进行扫描，扫描间隔1nm；上述采用紫外光谱-偏最小二乘法进行分析和数据处理是指采用紫外分光光度法对稀释2000倍的银黄液样品进行全波长扫描，将银黄液样品分为两部分，即校正集和验证集，根据校正集样品的紫外光谱数据及含量，采用偏最小二乘并利用TQ Analyst软件和Matlab6.5软件建立数学模型，再将验证集样品的紫外光谱数据代入数学模型，比较预测值与真值，验证该技术的准确可靠；上述运用TQAnalyst软件是指，分别采用逐步多元线形回归、主成分回归和偏最小二乘法进行数据处理，建立UV预测模型，并对模型进行检验，比较结果。3.如权利要求1所述的清开灵注射液中间体及成品中指标成分含量的测定方法，所述的清开灵注射液中间体及成品中指标成分含量的测定方法是指四混液中栀子苷和总氮的含量的测定方法，上述四混液中栀子苷和总氮的含量测定方法所用仪器为Agilent 1100高效液相色谱仪，包括四元泵、真空脱气泵、自动进样器、柱温箱、DAD二极管阵列检测器、HP数据处理工作站；KDY型定氮仪；所用试药为栀子苷对照品购自中国药品生物制品鉴定所，四混液由指定药厂提供，乙腈为色谱纯；所用方法为色谱条件Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相乙腈-水(13∶87)；流速1.0mL·min-1；检测波长238nm；柱温30℃；其中总氮的含量测定按常规方法进行；其中四混液紫外光谱的测定方法如下所用仪器为HP-8453紫外-可见分光光度仪；具体步骤为将四混液样品稀释500倍，在190～400nm进行扫描，扫描间隔1nm，得到四混液紫外光谱接着进行数据处理运用TQ Analy...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娜，史新元，张卓勇，朱向荣，乔延江，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]