棕榈酰肉碱作为检测靶点在制备ICP辅助诊断试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了棕榈酰肉碱作为检测靶点在制备ICP辅助诊断试剂盒中的应用。棕榈酰肉碱作为检测靶标在制备妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断试剂中的应用。定量检测棕榈酰肉碱的试剂在制备妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断试剂中的应用。本发明专利技术发现棕榈酰肉碱是与ICP发病高度相关的高特异性和敏感性的脂类代谢分子，多因素Logistic回归分析结果表明，棕榈酰肉碱与ICP的发病存在着显著关联，其ROC如附图，AUC为0.896，可为ICP的筛查和诊断治疗提供实验室支持。和诊断治疗提供实验室支持。和诊断治疗提供实验室支持。

【技术实现步骤摘要】
棕榈酰肉碱作为检测靶点在制备ICP辅助诊断试剂盒中的应用
专利

[0001]本专利技术属于代谢组学及生殖医学领域，涉及棕榈酰肉碱作为检测靶点在制备ICP 辅助诊断试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是妊娠期严重危害母婴健康的并发症，这是一种以皮肤瘙痒、血清肝酶和总胆汁酸升高为特征的妊娠相关综合征，其发病率高达12.0％，可引起胎儿宫内窘迫、自发性早产、死胎等不良妊娠结局，增加围产儿发病率和死亡率。ICP对妊娠最大的危害是发生难以预测的胎儿宫内死亡，有研究指出围产儿的死亡率约为正常妊娠者的6
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10倍。如能早期发现ICP并进行干预可有效降低该病所造成的母婴并发症，降低该病给母婴和其家庭带来的疾病痛苦和经济压力。然而目前为止临床上ICP的监测手段非常有限，只能基于总胆汁酸的筛查，其敏感度及特异性较低。因而，探究ICP疾病发生的敏感分子事件，并筛选易感生物标志物(susceptible biomarker)可为ICP疾病的诊断和实施干预提供有效手段，对于促进人类母婴健康具有重大的科学意义。
[0003]代谢组学(Metabolomics)是一门新兴的组学技术，其研究的是代谢物，被称为最接近表型的组学，被认为是对基因组、蛋白组执行结果的全面诠释。近年来代谢组学成功应用于各类疾病的早期预测，成为转化医学疾病敏感预测标志物筛选的备受关注的组学平台，代谢组学用于妊娠期相关疾病的诊断及发病机制研究已成为一个热门的新兴领域。代谢组学可以从全新角度揭示ICP的机制并寻找敏感的分子诊断标志物。
[0004]然而，目前还没有用于ICP辅助诊断的较为稳定的代谢分子标志物的报道，若能筛选出 ICP特异或异常表达的代谢物质作为分子标志物，并研制相应的辅助诊断试剂盒，将极大改善我国ICP的诊断现状。

技术实现思路

[0005]本专利技术的首要目的是针对上述技术问题，提供一种与ICP辅助诊断相关的孕期血清/血浆代谢分子标志物。
[0006]本专利技术第二个目的是为将孕期血清/血浆代谢分子标志物用于ICP辅助诊断提供基于 UPLC
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Q exactive MS的应用。
[0007]本专利技术第三个目的是提供用于ICP辅助诊断的试剂盒。
[0008]本专利技术的目的是通过下列技术方案实现的：
[0009]棕榈酰肉碱作为检测靶标在制备妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断试剂中的应用。
[0010]定量检测棕榈酰肉碱的试剂在制备妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断试剂中的应用。
[0011]一种妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断试剂盒，该试剂盒含有含有棕榈酰肉碱标准品，碳13标记的棕榈酰肉碱稳定同位素内标物。
[0012]作为本专利技术的一种优选，所述的辅助诊断试剂盒含有棕榈酰肉碱标准品，碳13标记的棕榈酰肉碱稳定同位素内标物、配套Hypersil GOLD C18色谱柱(100mm
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2.1mm,粒径1.9umThermo Scientific,Germany)、试剂A(沉淀蛋白用，含100％甲醇)、试剂B(流动相用，含0.1％的甲酸的水)、试剂C(流动相用，含0.1％的甲酸的乙腈)，试剂D(复溶用，超纯水)。
[0013]本专利技术的专利技术点在于发现棕榈酰肉碱可以作为ICP辅助诊断相关的血清/血浆代谢分子标志物。
[0014]具体地说，棕榈酰肉碱作为血清/血浆代谢分子标志物通过以下方法筛选得到：(1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的组织标本及血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)ICP患者胎盘组织代谢组学分析：选择ICP病例、与ICP病例年龄匹配的健康女性对照，采用UPLC
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Q exactive MS方法检测ICP病例及对照组胎盘组织中各代谢物的含量，分析ICP病例和健康女性对照间代谢物共性和特性，筛选差异表达代谢物。(3)ICP患者血清/血浆中棕榈酰肉碱代谢分子标志物检测：扩大样本量，同样采用 UPLC
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Q exactive MS方法检测ICP病例及对照血清/血浆中代谢分子棕榈酰肉碱的含量。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术提供的血清/血浆代谢分子标志物棕榈酰肉碱作为ICP诊断的标志物的优越性在于：
[0017]本专利技术以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液及组织样本，系统收集完整的人口学资料、临床资料等(这些资料可用于判断疾病进展，患者年龄等因素对于发病的影响)，并采用基于UPLC
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Q exactive MS的代谢组学方法，通过研究初产、单胎妊娠的ICP病例和与其年龄匹配的健康孕妇对照组织/血清中代谢物的变化，发现棕榈酰肉碱是与ICP发病高度相关的高特异性和敏感性的脂类代谢分子，多因素Logistic回归分析结果表明，棕榈酰肉碱与ICP的发病存在着显著关联，其ROC如附图，AUC为0.896，可为ICP的筛查和诊断治疗提供实验室支持。
[0018]本专利技术初期采用代谢组学研究的方法获取患者胎盘组织中疾病特异和异常表达的代谢物棕榈酰肉碱，并同时应用UPLC
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Q exactive MS方法在ICP大样本血清中进行了验证；以上方法和策略的应用加速和保证了血清/血浆代谢分子标志物棕榈酰肉碱诊断试剂盒的应用，也为其他疾病生物标志物的研制提供方法和策略上的借鉴。
[0019]本专利技术通过控制年龄等对疾病发展的影响因素，研究血清/血浆代谢分子标志物棕榈酰肉碱在ICP诊断的应用前景，阐述异常表达的棕榈酰肉碱对于ICP进展的影响，揭示其对 ICP的诊断价值。因此，本专利技术获得了ICP发病特异性血清/血浆代谢分子标志物；通过血清/血浆代谢分子标志物棕榈酰肉碱和诊断试剂盒的研制和应用，可使得ICP的诊断更加方便易行，为临床医生快速准确诊断ICP及采取治疗措施奠定基础，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。
附图说明
[0020]图1血清棕榈酰肉碱对ICP的诊断价值
具体实施方式
[0021]实施例1研究样本的收集和资料整理
[0022]专利技术人于2017年3月至2018年10月从南京医科大学附属无锡妇幼保健院收集了大量 ICP患者及健康对照孕妇的外周血样品及胎盘组织样本(用于研究的样本为同期收取，采样、分装、保存条件均一)，通过对样品资料的整理，专利技术人从中选择了100例符合下列标准的样本作为基于UPLC
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Q exactive MS方法进行代谢组学检测和验证的实验样品：
[0023](1)纳入病例组：ICP诊断标准参照ICP患者诊疗指南(第一版)，具体标准如下：1)妊娠中晚期出现皮肤瘙痒，或伴有不同程度的黄疸；2)实验室检查：血清总胆汁酸(TBA)增高(>40μmol/L)，或伴转氨酶(ALT及本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.棕榈酰肉碱作为检测靶标在制备妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断试剂中的应用。2.定量检测棕榈酰肉碱的试剂和/或设备在制备妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断...

【专利技术属性】
技术研发人员：张婷，董蕊锐，罗亮，赵绍杰，叶宁珍，姚婷婷，王晶，邹萍，李娜，陈敏健，邹少晗，周从华，
申请(专利权)人：无锡市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：