农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法技术

本发明专利技术属于农产品检测技术领域，具体涉及一种农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法。现有检测农产品中真菌毒素的方法要么检测流程复杂，要么检测成本高，不易推广的问题，本发明专利技术提供了一种农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法，包括以下步骤：a、取一定量的样品，加入10倍量的提取液，提取5

【技术实现步骤摘要】
农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法


[0001]本专利技术属于农产品检测
，具体涉及一种农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法。

技术介绍

[0002]农产品在储存过程中，容易受到各种霉菌的感染，可能会在农产品中残留一些真菌毒素，这样的农产品上市，会严重危害消费者的健康。
[0003]真菌毒素是一类由真菌产生的小分子次级代谢产物，农作物在生长，收获，贮存和运输等环节均易受到真菌毒素污染，现已发现400多种真菌毒素，大部分具有致癌，致畸和致突变作用，且混合污染时毒性会显著增强。真菌毒素可通过污染谷物和饲料或经动物源性食品进入食物链，对人类和动物健康造成严重伤害，近年来已成为食品安全领域的研究重点。一般农产品中主要的真菌毒素有黄曲霉毒素B1(Alfatoxin B1,AFB1)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)、伏马毒素B1(Fumonisin B1,FB1)和玉米赤霉烯酮(Zeralenone,ZEN)等。
[0004]目前，检测真菌毒素的方法主要包括生物鉴定法，化学分析法，仪器分析法和免疫分析法等。生物鉴定法专一性不强；化学分析法精确度低；免疫分析方法快速，灵敏度高，特异性好，并且成本较低，但其检测灵敏度仍有待增强。仪器分析灵敏度高，可准确定量，但样本前处理复杂并且检测仪器昂贵。这些方法检测农产品中的真菌毒素要么使用的范围局限，无法用在农产品上，要么检测成本高，检测流程复杂。因此，急需开展一些检测流程短、操作简单、检测成本低的农产品中真菌毒素的检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题为：现有检测农产品中真菌毒素的方法要么检测流程复杂，要么检测成本高，不易推广的问题。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案为：提供了一种农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法。该方法包括以下步骤：
[0007]a、样品前处理
[0008]取农产品样品，粉碎后过100目筛，取一定量的样品，加入10
‑
20倍量的提取液，漩涡振荡提取或摇床提取10min；提取结束后，在5000rpm离心1min，取100μl上清，加入500μl样品稀释液中，混匀，制备成待测溶液；
[0009]b、样品上机检测
[0010]取出荧光免疫定量POCT检测试纸条，采用荧光免疫定量POCT分析仪检测，待恒温孵育器温度升至37℃稳定后开始检测，取出荧光免疫定量POCT检测试纸条，水平放置于恒温孵育器加热板上，吸取100μl步骤a得到的待测溶液，加到试纸条的加样孔中，盖上盖子孵育8min；8min后将试纸条插入荧光免疫定量POCT分析仪的试纸条插槽中，进行读数；
[0011]c、检测结果的判定
[0012]若检测结果＜cutoff值，判断结果为阴性，表明真菌毒素量合格；若检测结果≥cutoff值，判断结果为阳性，表明真菌毒素量不合格。
[0013]其中，上述农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法中，步骤a所述的农产品包括玉米、小麦、大麦、谷物或高粱中的至少一种。
[0014]其中，上述农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法中，步骤a所述的样品为5ml，所述的提取液为70ml。
[0015]其中，上述农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法中，步骤a所述的提取液为甲醇、乙醇、丙二醇或异丁醇中的至少一种。
[0016]其中，上述农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法中，步骤b检测的真菌毒素包括黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、伏马毒素B1或玉米赤霉烯酮中的至少一种。
[0017]其中，上述农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法中，步骤b检测的环境条件为室温25
±
3℃、湿度40％
‑
60％。
[0018]其中，上述农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法中，步骤c读数需要在2min内进行。
[0019]本专利技术的有益效果为：
[0020]本专利技术提供了一种采用荧光免疫定量POCT仪检测农产品中真菌毒素的方法，拓宽了荧光免疫定量POCT仪的使用范围，能够使其应用于农产品真菌毒素的检测上，同时采用该方法检测真菌毒素，检测结果准确，检测灵敏度提高了2
‑
3个数量级，能够准确定量。并且检测流程很短，仅需前处理10min，检测8min即可完成样品的检测，极大的提高了检测效率。此外，本专利技术还提高了检测结果的线性范围，降低了黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、伏马毒素B1和玉米赤霉烯酮的检限，其中，黄曲霉毒素B1的线性范围可达1
‑
300ug/kg，赭曲霉毒素A的线性范围可达10
‑
5000ug/kg，伏马毒素B1的线性范围可达100
‑
65000ug/kg，玉米赤霉烯酮的线性范围可达20
‑
2000ug/kg，具有很好的实用价值。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供了一种农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法，包括以下步骤：
[0022]a、样品前处理
[0023]取农产品样品，粉碎后过100目筛，取一定量的样品，加入10
‑
20倍量的提取液，漩涡振荡提取或摇床提取10min；提取结束后，在5000rpm离心1min，取100μl上清，加入500μl样品稀释液中，混匀，制备成待测溶液；
[0024]b、样品上机检测
[0025]取出荧光免疫定量POCT检测试纸条，采用荧光免疫定量POCT分析仪检测，待恒温孵育器温度升至37℃稳定后开始检测，取出荧光免疫定量POCT检测试纸条，水平放置于恒温孵育器加热板上，吸取100μl步骤a得到的待测溶液，加到试纸条的加样孔中，盖上盖子孵育8min；8min后将试纸条插入荧光免疫定量POCT分析仪的试纸条插槽中，进行读数；
[0026]c、检测结果的判定
[0027]若检测结果＜cutoff值，判断结果为阴性，表明真菌毒素量合格；若检测结果≥cutoff值，判断结果为阳性，表明真菌毒素量不合格。
[0028]本专利技术方法适用于检测的农产品样品主要包括玉米、小麦、大麦、谷物或高粱中的至少一种，但本专利技术的检测方法的适用范围并不限于此，还可以检测其余农产品，如土豆、番薯等，只是在检测这些水分含量相对较高的样品时，加入的提取液比例需要相应的调整。
[0029]优选的，上述农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法中，步骤a所述的样品为5ml，所述的提取液为70ml。专利技术人经过大量的试验发现，当取5ml样品，采用70ml提取液进行提取时，效果最好，这可能是由于样品中的真菌毒素需要聚集到一定量才有利于检出。
[0030]其中，上述农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法中，步骤a所述的提取液为甲醇、乙醇、丙二醇或异丁醇中的至少一种。优选采用乙醇或丙二醇。更优选的，提取液采用乙醇与丙二醇按体积比5:8进行混合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.农产品中真菌毒素荧光免疫定量POCT检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a、样品前处理取农产品样品，粉碎后过100目筛，取一定量的样品，加入10
‑
20倍量的提取液，漩涡振荡提取或摇床提取10min；提取结束后，在5000rpm离心1min，取100μl上清，加入500μl样品稀释液中，混匀，制备成待测溶液；b、样品上机检测取出荧光免疫定量POCT检测试纸条，采用荧光免疫定量POCT分析仪检测，待恒温孵育器温度升至37℃稳定后开始检测，取出荧光免疫定量POCT检测试纸条，水平放置于恒温孵育器加热板上，吸取100μl步骤a得到的待测溶液，加到试纸条的加样孔中，盖上盖子孵育8min；8min后将试纸条插入荧光免疫定量POCT分析仪的试纸条插槽中，进行读数；c、检测结果的判定若检测结果＜cutoff值，判断结果为阴性，表明真菌毒素量合格；若检测结果≥cutoff值，判断结果为阳性，表明真菌毒素量不合格。2.根据权利要求1所述的农产品中真菌毒素...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪劲能，
申请(专利权)人：无锡精检生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：