一种二酮哌嗪类化合物在制备抗冠状病毒药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种二酮哌嗪类化合物在制备抗冠状病毒药物中的应用。具体地，本发明专利技术涉及式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐。本发明专利技术发现该化合物能在体外有效抑制α冠状病毒HCoV

【技术实现步骤摘要】
药效学试验证实了该化合物在体外细胞模型中能有效抑制α群冠状病毒HCoV
‑
229E的 复制，具有用于制备抗冠状病毒药物的潜力。
[0007]所述二酮哌嗪类化合物的结构式如式I所示。
[0008][0009]本专利技术所提供的式I所示化合物或其药学上可接受的盐的应用为下述(a)和/或(b) 和/或(c)：
[0010](a)式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗冠状病毒所致疾病或冠状 病毒感染的产品中的应用；
[0011](b)式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备预防冠状病毒所致疾病或冠状 病毒感染的产品中的应用；
[0012](c)式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备冠状病毒抑制剂中的应用。
[0013]所述产品可为药物或药物制剂。
[0014]所述冠状病毒抑制剂能够抑制冠状病毒的复制。
[0015]所述冠状病毒可为α属冠状病毒和/或β属冠状病毒，具体的选自人冠状病毒 2019
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nCoV、HCoV
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229E、HCoV
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OC43、SARS
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CoV和MERS
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CoV中的至少一种。
[0016]上述应用中，“式I所示化合物药学上可接受的盐”指在可靠的医学判断范围内， 适合用于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、刺激、过敏反应等， 且与合理的效果/风险比相称的盐。式I所示化合物药学上可接受的盐是本领域公知 的，包括但不限于钠盐、钾盐、钙盐、盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷 酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、草酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐和马来酸盐等。
[0017]上述应用中，制备药物或药物制剂时，式I所示化合物或其药学上可接受的盐可 作为有效成分之一，也可作为唯一有效成分。
[0018]上述应用中，制备药物或药物制剂时，式I所示化合物或其药学上可接受的盐可 作为活性成分之一，也可作为唯一活性成分。
[0019]上述应用中，制备药物时，还可加入载体材料。
[0020]载体材料包括但不限于水溶性载体材料(如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、有机酸 等)、难溶性载体材料(如乙基纤维素、胆固醇硬脂酸酯等)、肠溶性载体材料(如醋 酸纤维素酞酸酯和羧甲乙纤维素等)。使用这些材料可以制成多种剂型，包括但不限于 片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、 透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各 种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载 体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露 醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润 剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉
含10％胎牛血清(inactivated fetal bovine serum)和1％双抗(青霉素和链霉素)的DMEM 或1640培养基中，37℃，5％CO2培养箱中培养，2
‑
3天传代一次。
[0050]毒株
[0051]HCoV
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229E于Huh7细胞中传代，保存于
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80℃冰箱。
[0052]3.实验方法
[0053]细胞培养
[0054]以Huh7细胞为例：在长满Huh7细胞的培养瓶内加0.25％Trypsin
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EDTA(胰酶 细胞消化液)3ml，37℃消化1～2分钟，弃消化液，加培养液吹打，1:4传代，2
‑
3天 传代一次，种板时配制成每毫升20万个细胞，接种96孔细胞培养板，每孔0.1ml， 37℃，5％CO2培养过夜，细胞长成单层后进行实验。
[0055]抗HCoV
‑
229E的活性测定(CPE法)
[0056]实验在传代Huh7细胞中进行，Huh7细胞1
×
104个/孔接种于96孔板中，过夜培 养后将100μl HCoV
‑
229E病毒液(100TCID
50
)感染96孔板内Huh7细胞，待测药物 用维持液稀释，分别于感染同时给药和感染后2h给药两种给药方案进行测定，待测药 物以三倍稀释8个剂量的样品进行实验，每个剂量设2个平行孔，同时设物无药物的 病毒对照组。以观察细胞病变为指标，显微镜下观察细胞病变，以细胞死亡比例分别 标记为4+(细胞死亡比例75％～100％)、3+(细胞死亡比例50％～75％)、2+(细胞 死亡比例25％～50％)、1+(细胞死亡比例0～25％)、0+(细胞全部存活)。待病毒对 照组病变达4+号时观察结果，记录并用Reed
‑
Muench法计算药物对病毒的半数抑制浓 度(公式如下)及选择指数(SI＝TC
50
/IC
50
)。
[0057][0058]其中：A＝累积抑制率<50％的药物浓度，B＝累积抑制率>50％的抑制率，C＝累 积抑制率<50％的抑制率，D＝log稀释倍数
[0059]细胞毒性测定方法(CPE法)
[0060]细胞按1.5
×
104个/孔接种于96孔板中，过夜培养后加入含待测药物的维持液， 待测药物以三倍稀释8个剂量的样品进行实验，继续培养。给药2天后倒置显微镜下 药物对细胞的毒性，并用Reed
‑
Muench法计算半数有毒浓度TC
50
，计算公式如下：
[0061][0062]其中：A＝累积抑制率<50％的药物浓度，B＝累积抑制率>50％的抑制率，C＝累积抑制 率<50％的抑制率，D＝log稀释倍数
[0063]4.实验结果
[0064]药物在Huh7细胞内对HCoV
‑
229E的抑制作用
[0065]如表1所示，CPE法测定式I化合物对HCoV
‑
229E毒株的IC
50
为1.23μg/ml，选 择指数SI为12.98；RBV对HCoV
‑
229E的IC
50
为4.81μg/ml，选择指数SI为19.23。
[0066]表1.化合物在Huh7细胞内对HCoV
‑
229E的抑制作用(IC
50
)(CPE法)
[0067][0068]5.结论
[0069]本实验条件下，式I化合物对HCoV
‑
229E毒株具有抑制作用；RBV对HCoV
‑
229E 毒株具有抑制作用，并且RBV的抗冠状病毒HCoV
‑
229E活性与文献和本实验之前的 结果相当，说明实验系统成立。
[0070]尽管本专利技术的具体实施方式已经得到详细的描述，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.结构式如式I所示化合物或其药学上可接受的盐的应用，所述应用为下述(a)和/或(b)和/或(c)：(a)式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的产品中的应用；(b)式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备预防冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的产品中的应用；(c)式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备冠状病毒抑制剂中的应用；2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品为药物或药物制剂。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述冠状病毒为α属冠状病毒和/或β属冠状病毒；所述冠状病毒抑制剂能够抑制冠状病毒的复制。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述冠状病毒选自人冠状病毒2019
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nCoV、HCoV
‑
229E、HCoV
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OC43、SARS
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CoV和MERS
‑
CoV中的至少一种。5.一种药物或药...

【专利技术属性】
技术研发人员：车永胜，蒋建东，李玉环，
申请(专利权)人：中国医学科学院医药生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：