一种发酵罐深层培养W192双孢蘑菇液体原种的工艺制造技术

一种通过发酵罐深层培养批量制备W192蘑菇液体原种的制备工艺,目的是批量制备活力强纯度高的W192液体原种，可代替固体原种作为呼吸袋蘑菇栽培种生产的种源。本发明专利技术涉及食用菌菌种技术领域。包含以下工艺流程：摇瓶种子培养基的制作

【技术实现步骤摘要】
一种发酵罐深层培养W192双孢蘑菇液体原种的工艺


[0001]本专利技术属于食用菌菌种
，具体涉及一种食用菌液体菌种的制备工艺。

技术介绍

[0002]双孢蘑菇是世界性生产与消费的食用菌，我国双孢蘑菇年产量占世界的50%以上，产值100多亿元。近年来由于劳动力成本的提高，双孢蘑菇的工厂化种植成为蘑菇种植发展的趋势，而菌种可称之为蘑菇的“芯片”，是决定蘑菇生产安全的关键。福建省农业科学院食用菌研究所（本专利技术人单位）是国内唯一专注于研发双孢蘑菇菌种选育与制种工艺的科研单位，选育的As2796蘑菇菌株二十年来一直是国内蘑菇种植的主栽品种（占90%以上），适合传统的人工种植模式。为了适应当前蘑菇工厂化种植迅猛发展的需要，我所2012年选育出W192蘑菇新菌株，具有高产优质、潮次明显等特点，比较适合国内工厂化种植，可以和国外的工厂化品种进行竞争并具有一定优势。经多年攻关我所研发出采用固体原种制作呼吸袋蘑菇栽培种的新工艺（专利号：ZL200910111583.4），和W2000液体原种摇瓶培养的制备工艺（专利号：ZL201310365188.5），随着W192菌种在国内蘑菇工厂化生产中的普及，亟需研发采用发酵罐深层培养批量制备W192液体原种的制种工艺，以满足W192菌种批量生产的需要。为此2017年福建省科技厅立项“双孢蘑菇液态原种在透气袋栽培种生产中的应用研究”（公益类科研院所专项）并由我所承担，项目组经3年研究，研制出采用发酵罐深层培养W192液体原种的新工艺，并申请专利技术专利以形成对技术闭环的保护。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种采用发酵罐深层培养可批量制备W192双孢蘑菇液体原种的工艺, 本专利技术可批量制备出活力强的W192液体原种用于呼吸袋栽培种的生产，满足工厂化种植企业对W192菌种的需求。采用本工艺制备W192液体原种，具有成品率高、活力强的特点，用于呼吸袋栽培种生产可进一步提升呼吸袋栽培种生产效率和工艺水平并降低生产成本。
[0004]具体介绍本
技术实现思路
如下：1工艺流程摇瓶种子培养基的制作
→
灭菌
→
冷却
→
接种
→
摇床培养
→
发酵罐液体原种培养基的制作
→
灭菌
→
冷却
→
接种
→
发酵罐深层培养
→
接菌袋（瓶）
→
发菌培养。
[0005]2培养基配方2.1 W192母液培养基小米粉7.5g/L，黄豆粉 5.0g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨2g /L， MgSO4·
7H2O 0.75g/L, KH2PO
4 2.0g/L。
[0006]2.2W192发酵罐液体原种培养基2.2.1小米粉30g/L，黄豆粉12g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO
4 1.25g/L，MgSO4·
7H2O 0.75g/L，pH 6.0。
[0007]2.2.2玉米粉30g/L，黄豆粉12g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO
4 1.25g/L，MgSO4·
7H2O 0.75g/L，pH 6.0。2.3栽培种培养基2.3.1小麦 94%，石膏粉 3%，轻质碳酸钙3%，含水量48%
±
1%，pH 7.5
‑
8.0。
[0008]2.3.2小米 94%，石膏粉 3%，轻质碳酸钙3%，含水量48%
±
1%，pH 7.5
‑
8.0。
[0009]3 培养基的制备3.1摇瓶种子培养基的制备精确称量小米粉7.5g和黄豆粉5.0g，置于不锈钢锅中，加水500mL，一起煮沸5min，再加入葡萄糖10g，蛋白胨2g，MgSO4·
7H2O 0.75g，KH2PO
4 2.0 g用玻璃棒搅拌均匀后，用量筒定容至1000mL得摇瓶种子培养基，将配置好的培养基放置在磁力搅拌器上分装，每个三角瓶装100mL，后放置灭菌器中121℃，灭菌30min，灭菌好的培养基自然冷却，备用。
[0010]3.2发酵罐液体原种培养基的制备按照配方，称取相应量的发酵罐液体原种培养基，置于不锈钢锅中，加入3L水，搅拌均匀，即培养基浓缩液。待发酵罐中97L水温达80℃时，开启气泵通气，将配置好的培养基浓缩液倒入发酵罐内，加入20mL泡敌，密封发酵罐，121℃灭菌30min，冷却，即得发酵罐液体原种培养基。
[0011]3.3发酵罐液体原种培养基灭菌操作3.3.1罐体夹层加水首先对液体发酵罐夹层进行加水，方法：用硅胶管连接水管和夹层进水阀，必须打开夹层放水阀进行加水(以免夹层压力过高损伤内层罐体)，水量加至夹层放水阀出水即可。
[0012]3.3.2液体培养基灭菌调整控温箱温度为121℃，打开加热棒开始加温，开夹层放水阀，放掉夹层里的虚压和多余的水。
[0013]3.3.2.1给罐体加水通过接种阀或接种口往罐体里面加水，加水加至罐体视镜以下，直至水温升至60℃。
[0014]3.3.2.2加入培养基当罐体内水温达到60℃以上时，将制备好的液体原种培养基加入罐体，液体高度加至罐体观察镜以上为宜，加入20mL消泡剂，然后拧紧接发酵罐罐盖，开气泵，打开气泵步骤：打开滤壳放气阀，打开滤壳进气阀，再开气泵，关滤壳放气阀，打开罐体放气阀，直至温度升至70℃，关闭气泵，步骤为：关气泵，关滤壳放气阀和进气阀，再关罐体放气阀。继续加温。
[0015]3.3.3液体培养基灭菌当夹层放水阀出热蒸汽3
‑
5 min后关闭，关闭夹层出气阀（蒸气管两头连接夹层出气阀和罐体进气阀，单向阀箭头向下），当夹层压力升至0.1MPa时，打开夹层出气阀再打开罐体进气阀，小开罐体放气阀，等进气管烫手后关闭罐体放气阀。当罐体压力表达到0.15MPa开始计时，打开罐体放气阀1/3，根据压力来调节温度保持30 min灭菌。
[0016]3.3.4降温计时完毕后，关罐体进气阀，关夹层出气阀，把温控表调温至25℃，关闭加热棒。
[0017]3.3.5放夹层热水此时罐体放气阀可再开大点，通过夹层进水阀把夹层热水放掉，直至夹层压力表压力降为0.3.3.6液体培养基冷却打开夹层放水阀连接放水管至下水道，夹层进水阀通过硅胶管接入水管，进行冷却。当罐体压力表压力降至0.05MPa时，打开气泵（防止罐体在冷却过程中产生负压造成污染，并使下部冷水向上冷却较快）。开气泵步骤：打开滤壳放气阀，打开滤壳进气阀，再开气泵，关滤壳放气阀（在培养过程中可通过小开滤壳放气阀排冷凝水），通过罐体放气阀调节罐体压力在0MPa以上0.05MPa以下，温度降至24℃开始接种。
[0018]3.4栽培种培养基的制备小麦、小米基质培养基，按照栽培种配方，利用V型蒸煮器制备；颗粒基质培养基，按照配方精确称重，放入搅拌机中均匀搅拌，容器为透气袋，装袋后，126℃灭菌2.5h自然冷却，即得栽培种固体培养基。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种W192双孢蘑菇液体原种的发酵罐深层培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1）W192母液菌种制备将活化的双孢蘑菇平皿母种用打孔器切割成直径1.0 cm大小的菌块，转接到250mL三角瓶中的100mL灭菌摇瓶种子培养基上，每瓶三角瓶接2块菌块；后在培养温度24℃、摇瓶转数180r/min的培养振荡器上旋转振荡培养8d，得到双孢蘑菇母液菌种；2）发酵罐液体原种深层培养用带有手柄的铁丝圈缠绕纱布，倒上95%酒精；把火焰圈完全套于接种口上，打开放气阀，点着火焰圈，开接种口，接种口开到一半时关闭罐体放气阀，完全打开接种口后快、稳、轻的接入菌种，拧紧接种口；打开罐体放气阀，压力调至0以上0.05MPa以下，进入培养阶段；深层发酵培养7d，得到双孢蘑菇液体原种。2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述W192母液培养基的制备方法包含以下步骤：精确称量小米粉7.5g和黄豆粉5.0g，置于不锈钢锅中，加水500mL，一起煮沸5min，再加入葡萄糖10g，蛋白胨2g，MgSO4·
7H2O 0.75g，KH2PO
4 2.0 g用玻璃棒搅拌均匀后，用量筒定容至1000mL得摇瓶种子培养基，将配置好的培养基放置在磁力搅拌器上分装，每个三角瓶装100mL，后放置灭菌器中121℃，灭菌30min，灭菌好的培养基自然冷却，备用。3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述发酵罐液体原种培养基的制备方法包括以下步骤：（1）按每升液体原种培养基称取玉米粉或小米粉30g，黄豆粉12g，酵母粉3g，KH2PO
4 1.25g，MgSO4·
7H2O,0.75g进行配制；（2）按照配方，称取发酵罐液体原种培养基，置于不锈钢锅中，加入4L水，搅拌均匀，即培养基浓缩液；加水稀释成培养液后，待发酵罐中水温达80℃时，开启气泵通气，将配置好的培养基浓缩液倒入发酵罐内，加入泡敌，密封发酵罐，121℃灭菌30min，冷却，即得发酵罐液体原种培养基。4.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴建清，曾志恒，曾辉，陈美元，蔡志欣，
申请(专利权)人：福建省农业科学院食用菌研究所福建省蘑菇菌种研究推广站，
类型：发明
国别省市：