花生脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶AhFATB2基因启动子及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及花生脂酰

【技术实现步骤摘要】
花生脂酰
‑
酰基载体蛋白硫酯酶AhFATB2基因启动子及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种花生脂酰
‑
酰基载体蛋白硫酯酶AhFATB2基因启动子及其制备方法和应用，属于植物基因工程和生物


技术介绍

[0002]在植物转基因过程中有两个必需元件，分别是启动子和基因。启动子是位于基因5
′
端上游被RNA聚合酶特异性识别并结合的一段DNA序列，调控下游基因在不同组织、不同发育阶段和不同环境下的表达，是基因表达调控的必需元件。启动子按功能与转录模式可分为3类：组成型启动子、组织特异性启动子和诱导型启动子，在某些情况下一类启动子也会兼有其它类型启动子的特性。在实际应用中，每一类启动子的适用范围不同，各有优缺点，组织特异性和诱导型启动子可以驱动下游目的基因在特定组织中或特定条件下表达，最大限度的减少了由组成型启动子带来的负面效应，适用于启动在特定条件下和特定植物组织中表达的基因，而在实际应用过程中，人们往往需要在很多组织或整个植株中都表达某些特定基因，如抗虫或抗病基因的应用，因此本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种花生脂酰
‑
酰基载体蛋白硫酯酶AhFATB2基因的启动子P
AhFATB2
，其特征在于，其序列为序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。2.一种花生脂酰
‑
酰基载体蛋白硫酯酶AhFATB2基因的启动子P
AhFATB2
的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)利用SDS裂解法提取基因组DNA，所用引物为：P
AhFATB2
S：5
′‑
ACGCGTCGACGAAAACGCACGCGATAAAAACC
′‑3′
，P
AhFATB2
A：5
′‑
CGCGGATCCAATTGAATTCTTCACCTGAATGCGC
‑3′
；(2)以基因组DNA为模板，以P
AhFATB2
S、P
AhFATB2
A为引物进行PCR扩增，反应体系为25μL，包括：10
×
buffer 2.5μL，10mmol/L dNTPs mixture 1.0μL，10μmol/L引物P
AhFATB2
S 2.5μL，10μmol/L引物P
AhFATB2
A 2.5μL，5单位/μL Taq酶0.2μL，模板30～100ng；扩增过程为：95℃预变性1min；94℃变性10s，55℃退火30s，72℃延伸2min，35个循环；72℃延伸10min；(3)PCR产物经质量体积比1.0％的琼脂糖凝胶检测，用凝胶回收试剂盒回收目的片段；按目的片段、pMD18
‑
T载体3:1的摩尔比混合，加入5个单位的T
4 DNA连接酶，10
×
反应缓冲液2.5μL，用无菌水补充体积至25μL，16℃连接过夜，获得连接液；(4)用冻融法转化DH5
ɑ
菌株的感受态细胞，将连接液涂布于含有氨苄青霉素50mg/L的LB固体培养基平板上，37℃培养过夜，挑选白斑，进行菌落PCR检测，将阳性重组子接种于含氨苄青霉素50μg/mL的LB液体培养基中，37℃200r/min振荡培养过夜，用小量碱法提取质粒，SalⅠ/BamHI双酶切1μg质粒，用0.8％的琼脂糖凝胶电泳检测；将检测正确的阳性重组质粒克隆，将目的片段连入pMD18
‑
T载体，获得载体pMD18
‑
P
AhFATB2
，即得到所述的P
AhFATB2
启动子。3.如权利要求2所述的启动子P
AhFATB2
的制备方法，其特征在于，其中LB固体培养基的制备方法如下：分别称取10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10g氯化钠和8g琼脂依次溶解于蒸馏水中，定容于1000mL；然后分装于500mL三角瓶中，121℃、6.859

【专利技术属性】
技术研发人员：张新友，石磊，苗利娟，黄冰艳，张忠信，齐飞艳，代小冬，孙子淇，秦利，董文召，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：