一种异源表达大球盖菇β-葡萄糖苷酶基因的方法技术

本发明专利技术公开了一种异源表达大球盖菇β

【技术实现步骤摘要】
一种异源表达大球盖菇
β
‑
葡萄糖苷酶基因的方法


[0001]本专利技术食用菌
，具体涉及一种异源表达大球盖菇β
‑
葡萄糖苷酶基因的方法。

技术介绍

[0002]我国作为农业生产大国，拥有丰富的农作物秸秆资源。秸秆也是一种生物质能源，是仅次于煤炭、石油和天然气之后第四大能源，并且是唯一可再生的能源。而秸秆主要由纤维素、半纤维素、木质素组成。所以如何充分利用秸秆资源，早已成为科研工作者持续关注的问题。
[0003]食用菌作为秸秆资源基料化和原料化的有效利用物种，不仅能够快速的降解秸秆资源，还会产生可观的附加产值。大球盖菇作为食用菌中为数不多的能够在自然条件下对农作物秸秆进行降解的食用真菌，近年来已经在全国范围内大面积的推广和栽培种植。
[0004]大球盖菇在降解秸秆过程中主要分泌木质纤维素酶类对复杂的木质纤维素进行降解，其中β
‑
葡萄糖苷酶是能特异性地催化水解低聚糖、烷基和芳香族羟基末端非还原性的β
‑
D
‑
葡萄糖苷键，从而释放本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种异源表达大球盖菇β
‑
葡萄糖苷酶基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在大球盖菇基因组中获得大球盖菇β
‑
葡萄糖苷酶核苷酸序列如SEDQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEDQ ID NO.2所示，并设计引物包括：EC2
‑
1F：ATCGTCGACATGAAGGACTCCTTTAACGTEC2
‑
1R:GCCGAATTCTTATCCACAGATATTGGGGT（2）提取大球盖菇RNA，反转录成CDNA作为模板，然后根据设计的引物EC2
‑
1F、EC2
‑
1R进行PCR扩增；（3）使用内切酶对扩增的EC2基因片段进行双酶切，并使用胶回收试剂盒进行β
‑
葡萄糖苷酶基因片段回收；（4）使用和步骤（3）中相同的内切酶对载体质粒PMAL
‑
c5g进行双酶切，并使用胶回收试剂盒进行回收PMAL
‑
c5G空载体片段；（5）将步骤（3）获得的β
‑
葡萄糖苷酶基因片段和步骤（4）获得的PMAL
‑
c5G空载体片段进行连接；（6）将步骤（4）的连接体系转入大肠杆菌Top 10感受态细胞转化培养；然后挑取阳性转化子进行PCR验证，并将验证成功的菌株进行测序，选择测序比对成功的菌株，作为重组载体；（7）将重组载体转至大肠杆菌E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosett...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒯本科，郝海波，吴声栋，张鼎宇，窦锦慧，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：