包含蛋白质生产率提高表型的突变和遗传修饰的丝状真菌菌株及其方法技术

本发明专利技术的菌株和本公开的方法涉及丝状真菌中的遗传修饰，所述遗传修饰产生包含蛋白质生产率提高表型的丝状真菌的变体菌株。更具体地，如本文所呈现、描述和举例说明，包含蛋白质生产率提高表型的丝状真菌的此类变体菌株非常适用于在深层培养中生长，诸如用于大规模生产用于商业应用的目的蛋白。产用于商业应用的目的蛋白。产用于商业应用的目的蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含蛋白质生产率提高表型的突变和遗传修饰的丝状真菌菌株及其方法


[0001]本公开总体上涉及生物学、遗传学、分子生物学、丝状真菌、工业蛋白生产等领域。更特别地，本专利技术的菌株和本公开的方法涉及丝状真菌中的遗传修饰，所述遗传修饰产生包含蛋白质生产率提高表型的丝状真菌的变体菌株。更具体地，如本文所呈现、描述和举例说明，包含蛋白质生产率提高表型的丝状真菌的此类变体菌株非常适用于在深层培养中生长，诸如用于大规模生产用于商业应用的目的蛋白。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2018年7月30日提交的美国临时专利申请序列号62/711,846的优先权，所述美国临时专利申请通过引用以其全文特此并入。
[0004]序列表的引用
[0005]名为“NB41504
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WO
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PCT_SequenceListing.txt”的文本文件序列表的电子提交的内容创建于2019年7月24日，并且大小为160KB，其通过引用以其全文特此并入。

技术介绍

[0006]丝状真菌(例如，曲霉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种衍生自亲代细胞的修饰的子囊菌门细胞，所述修饰的细胞包含编码变体LOV蛋白的多核苷酸序列，所述变体LOV蛋白与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:4的位置813的氨基酸序列位置处包含赖氨酸(K)残基，其中当在相同条件下发酵时，所述修饰的细胞相对于所述亲代细胞包含蛋白质生产率提高表型。2.如权利要求1所述的修饰的细胞，所述修饰的细胞包含编码目的蛋白(POI)的多核苷酸。3.如权利要求1所述的修饰的细胞，所述修饰的细胞包含编码SEQ ID NO:19的NIK1(M743T)蛋白的多核苷酸构建体。4.如权利要求1
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3中任一项所述的修饰的细胞，所述修饰的细胞包含至少一种遗传修饰，所述遗传修饰缺失、破坏或减少了选自由SSB7、MPG1 SFB3、SEB1、CRZ1、TSP2和/或GAS1组成的组的蛋白质的表达/产生。5.如权利要求1
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4中任一项所述的修饰的细胞，其中所述子囊菌门细胞选自木霉属物种(Trichoderma sp.)、曲霉属物种(Aspergillus sp.)、镰刀菌属物种(Fusarium sp.)、青霉属物种(Penicillium sp.)、假丝酵母属物种(Candida sp.)、金孢霉属物种(Chrysosporium sp.)、头孢霉属物种(Cephalosporium sp.)、篮状菌属物种(Talaromyces sp.)、脉孢菌属物种(Neurospora sp.)和毁丝霉属物种(Myceliophthora sp.)。6.如权利要求5所述的修饰的细胞，其中亲代曲霉属物种细胞包含编码天然LOV蛋白的多核苷酸序列，所述天然LOV蛋白与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:2的位置813的氨基酸序列位置处包含苏氨酸(T)残基。7.如权利要求5所述的修饰的细胞，其中亲代青霉属物种细胞包含编码天然LOV蛋白的多核苷酸序列，所述天然LOV蛋白与SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:2的位置813的氨基酸序列位置处包含苏氨酸(T)残基。8.如权利要求5所述的修饰的细胞，其中亲代篮状菌属物种细胞包含编码天然LOV蛋白的多核苷酸序列，所述天然LOV蛋白与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:2的位置813的氨基酸序列位置处包含苏氨酸(T)残基。9.如权利要求5所述的修饰的细胞，其中亲代镰刀菌属物种细胞包含编码天然LOV蛋白的多核苷酸序列，所述天然LOV蛋白与SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:2的位置813的氨基酸序列位置处包含苏氨酸(T)残基。10.如权利要求5所述的修饰的细胞，其中亲代毁丝霉属物种细胞包含编码天然LOV蛋白的多核苷酸序列，所述天然LOV蛋白与SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:2的位置813的氨基酸序列位置处包含苏氨酸(T)残基。11.如权利要求5所述的修饰的细胞，其中亲代脉孢菌属物种细胞包含编码天然LOV蛋白的多核苷酸序列，所述天然LOV蛋白与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:2的位置813的氨基酸序列位置处包含苏氨酸(T)残基。12.如权利要求5所述的修饰的细胞，其中亲代假丝酵母属物种细胞包含编码天然LOV蛋白的多核苷酸序列，所述天然LOV蛋白与SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:2的位置813的氨基酸序列位置处包含苏氨酸(T)残基。
13.如权利要求5所述的修饰的细胞，其中亲代木霉属物种细胞包含编码天然LOV蛋白的多核苷酸序列，所述天然LOV蛋白与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:18具有至少50％序列同一性并且在对应于SEQ ID NO:2的位置813的氨基酸序列位置处包含苏氨酸(T)残基。14.一种POI，所述POI由如权利要求1
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13中任一项所述的修饰的细胞产生。15.一种衍生自包含野生型多核苷酸序列的亲代细胞的修饰的子囊菌门细胞，所述野生型多核苷酸序列在严格杂交条件下与...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：