基于DHFR的磺胺增效剂类药物多残留荧光偏振免疫分析方法技术

本发明专利技术提供一种基于DHFR的磺胺增效剂类药物多残留荧光偏振免疫分析方法，所述二氢叶酸还原酶DHFR来源于磺胺增效剂类药物敏感菌株，包括金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌。本发明专利技术首次建立了基于磺胺增效剂类药物受体蛋白二氢叶酸还原酶的磺胺增效剂类药物多残留荧光偏振免疫分析方法，并将建立的方法应用于牛奶中磺胺增效剂类药物多残留检测，为食品中磺胺增效剂类药物筛查提供方法技术支持。本发明专利技术创造性地采用来源于磺胺增效剂类药物敏感菌株的DHFR，在本领域中属于首创。本发明专利技术突破现有常规方法局限，拓展了应用范围，同时本发明专利技术方法还具有快速、简单、准确等优点。准确等优点。准确等优点。

【技术实现步骤摘要】
基于DHFR的磺胺增效剂类药物多残留荧光偏振免疫分析方法


[0001]本专利技术属于兽药残留检测
，具体涉及到一种基于DHFR的磺胺增效剂类药物多残留荧光偏振免疫分析方法。

技术介绍

[0002]磺胺增效剂类药物(Antibacterial synergists,ASGs)为2，4
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二氨基嘧啶类化合物，是一类阻断细菌叶酸代谢的二氢叶酸还原酶(Dihydrofolate Reductase，DHFR)抑制剂。磺胺增效剂类药物常见结构是二氨基嘧啶，其中，常见药物主要有甲氧苄啶(Trimethoprim，TMP)、二甲氧苄啶(Diaveridine，DVD)、奥美普林(Ormetoprim，OMP)、溴莫普林(Brodimoprim，BDP)、巴喹普林(Baquiloprim，BQP)等。磺胺增效剂类药物种类多，应用范围广，可与其他抗生素联用，扩大抗菌谱。如与磺胺类合用，则因磺胺类药物能抑制二氢叶酸合成酶，从而双重阻断细菌叶酸代谢，妨碍菌体核酸及蛋白质的生物合成，可增强抗菌作用，甚至产生杀菌作用。磺胺增效剂类与氟喹诺酮类药物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于DHFR的磺胺增效剂类药物多残留荧光偏振免疫分析方法，其特征是，所述方法基于二氢叶酸还原酶DHFR建立；所述二氢叶酸还原酶DHFR通过诱导二氢叶酸还原酶重组表达菌株得到。2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述诱导二氢叶酸还原酶重组表达菌株得到二氢叶酸还原酶的方法如下：提取磺胺增效剂类药物敏感菌株基因，PCR扩增得到二氢叶酸还原酶基因；构建重组克隆菌株，进一步获得高效表达二氢叶酸还原酶的重组表达菌株；最后诱导重组表达菌株表达得到重组二氢叶酸还原酶。3.如权利要求2所述的方法，其特征是，所述磺胺增效剂类药物敏感菌株包括金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌；所述诱导重组表达菌株表达重组二氢叶酸还原酶的条件为20℃、0.5mM IPTG诱导13～16h。4.如权利要求1所述的方法，其特征是，包括以下步骤：S1、将一系列已知浓度的磺胺增效剂类药物标准品溶液分别与荧光标记物溶液以及二氢叶酸还原酶溶液混合，孵育进行竞争反应，测定所得体系的荧光偏振值；S2、以测定的荧光偏振值为纵坐标，所述一系列已知浓度的磺胺增效剂类药物标准品浓度的对数值为横坐标，绘制标准曲线；S3、将待测样品代替步骤S1中的磺胺增效剂类药物标准品，将所述待测样品与所述荧光标记物溶液以及所述二氢叶酸还原酶溶液等体积混合，孵育进行竞争反应，测定所得...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁晓，于万鹏，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：