一种金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖的提取纯化方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖的提取纯化方法。本发明专利技术首先将金黄色葡萄球菌进行酚酸处理，接着利用高速珠磨法裂解细菌、促进荚膜多糖的释放，然后利用季铵阳离子表面活性剂进行纯化、最后经纤维素凝胶色谱柱进一步提纯得到精制荚膜多糖，可以减少利用酚、氯仿、丙酮等造成的污染和对人体的伤害，安全环保，利用该方法制得的多糖不仅含量高产率和纯度较高，蛋白质、核酸含量低，可直接作抗原而不经进一步修饰，或与蛋白质偶联用于免疫接种。或与蛋白质偶联用于免疫接种。

【技术实现步骤摘要】
一种金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖的提取纯化方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖的提 取纯化方法。

技术介绍

[0002]金黄色葡萄球菌广泛地分布于自然界，致病性的葡萄球菌常引起各种化脓性 疾患，如脓肿、败血症或脓毒败血症等。金黄色葡萄球菌之所以难以防治，是因 为在菌体的表面存在一层“保护膜”，即荚膜。有研究表明，荚膜几乎存在于所 有金黄色葡萄球菌菌株的表面，可保护细菌免受抑菌或杀菌物质的侵害以及宿主 吞噬细胞的吞噬，同时还有助于细菌黏附于宿主细胞表面以诱发感染，是细菌得 以生存的重要表面结构。荚膜的主要成分为多糖，是细菌结构变化最少的表面抗 原之一，具有较好的免疫原性。据报道，94～100％的金黄色葡萄球菌都含有荚 膜，因此提取金黄色葡萄球菌荚膜多糖作为其疫苗的靶抗原已备受关注。目前， 已被鉴定的金黄色葡萄球菌有11个荚膜多糖血清型，其中70～80％的金黄色葡 萄球菌可产生5型多糖。
[0003]不论是荚膜多糖疫苗还是多糖蛋白结合疫苗的研制，荚膜多糖的提取与纯化 是其中的关键步骤之一，细菌荚本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖的提取纯化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)金黄色葡萄球菌的发酵培养：在哥伦比亚血琼脂基础培养基中加入1.8～2.2％的NaCl，高压灭菌后调节温度至40～50℃，加入8～12％的新生牛血清制成琼脂培养板；将鉴定为5型荚膜多糖的金黄色葡萄球菌种子液按0.8～1.2vol％的接种量接种到培养基上，在35～40℃、3～5％的CO2的生化培养箱中培养细菌不低于24h；2)金黄色葡萄球菌荚膜多糖的粗提：在培养基中加入5～10倍体积的经高压灭菌的PBS缓冲液(pH＝7.2～7.5)并制得菌悬液，然后将菌悬液以1.8～2.5mg/mL悬浮于蒸馏水中，加入0.5～1.2％的酚酸，在80～120℃下处理1～1.5h，酚酸处理过后的菌悬液高速珠磨2～5min；然后用0.2μm的纤维膜进行过滤除去菌体杂质，取滤过液备用；3)荚膜多糖的纯化：往步骤2)制备的滤过液中加入季铵盐阳离子表面活性剂，边加边搅拌，0～4℃静置过夜沉淀多糖，取沉淀用1～1.5mol/L的NaCl溶液解离；加入终浓度为70～95vol％的乙醇，收集沉淀，用去离子水复溶；复溶液以纤维素柱层析法分离，以质量比为7～9:2～2.5:1的乙醇、乙酸、水混合物作洗脱液，流速为0.8～1.4mL/min,示差检测器在线检测，按照洗脱峰收集，减压浓缩混合，得到白色粉末状物质即为精制荚膜多糖。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤2)酚酸为对羟基苯甲酸、原儿茶酸、没食子酸。3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述步骤2)高速珠磨过程中，每1mL菌悬液中加入0.3～0.5g...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ七四专利代理机构，
申请(专利权)人：沧州硕金生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：