定量LIF的方法及其用途技术

本文描述了用于定量来自生物学样品的总LIF的测定。LIF的测定。LIF的测定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】定量LIF的方法及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2018年6月18日提交的欧洲申请序列号18382433.3的权益，其内容通过引用以其整体特此并入。

技术介绍

[0003]白血病抑制因子(LIF)是白细胞介素6(IL6)细胞因子家族的成员。根据LIF的已知生理学活性、LIF缺乏的临床特征以及健康组织和肿瘤中LIF表达的非临床研究，预期在一系列实体瘤中对LIF的抑制是很好耐受的并产生抗肿瘤功效，这些实体瘤包括但不限于非小细胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌、卵巢癌和多形性胶质母细胞瘤(GBM)。
[0004]LIF通过与LIFR结合、然后募集gp130以形成能够启动细胞内JAK
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STAT激活的三元复合物而发出信号。因此，LIF对LIFR和gp130都有结合位点，为抑制LIF信号传导提供了多种选择。一种策略是直接阻断LIF细胞因子与LIFR的结合。替代性地，抑制LIF信号传导的另一种策略是阻断LIF与gp130的结合。在这种情况下，结合与LIF的gp130结合位点重叠的表位的mAb通过抑制gp130向LIF/LIFR复合物的募集(这对于信号转导是必需的)来阻止下游信号传导。
[0005]正常健康个体中LIF的典型血浆或血清浓度为0
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10pg/ml之间。但是，由于抗体/配体复合物的清除比游离配体的清除慢，因此一旦细胞因子与抗体结合，血浆中总LIF的水平可能会增加。参见例如，Chakraborty A，Tannenbaum S，Rordorf C等人(2012)“Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Properties of Canakinumab，a Human Anti
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Interleukin
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1βMonoclonal Antibody[人抗白细胞介素1β单克隆抗体卡那单抗的药代动力学和药效学特性]”Clin Pharmacokinet[临床药代动力学].51：e1
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e18；Dudai S，Subramanian K，Flandre T等人(2015)“Integrated pharmacokinetic，pharmacodynamics and immunogenicity profiling of an anti
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CCL21monoclonal antibody in cynomolgus monkeys[食蟹猴中抗CCL21单克隆抗体的整合药代动力学、药效学和免疫原性分析]”mAbs[单克隆抗体].7：829
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837。因此，可以将药物
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配体复合物或总配体的积累以及饱和的持续时间并入PK
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PD模型中，以预测靶标接合以及在外围中的功效。

技术实现思路

[0006]本披露涉及抗白血病抑制因子(LIF)抗体的在施用于LIF的gp130结合位点处或附近结合的治疗性抗体后用于检测患者样品(如血液、血浆或血清)中总LIF水平的用途。在使用本文所述的夹心方法的酶联免疫吸附测定(ELISA)中，LIF可以通过将其夹在固定的捕获抗体和与可检测标记物质缀合的另一种抗体(检测抗体)之间来定量检测，其中这些抗体结合至LIF的非重叠表位。在本披露中，LIF的捕获和检测抗体表位另外都不与治疗性mAb h5D8的结合位点重叠。因此，已经鉴定出LIF的三个不同的非重叠表位，使得三种抗体(捕获、检测和治疗性抗体)可以同时结合LIF。这种形式的优点在于，无论是否被该治疗性抗体结合，都可以检测LIF，从而定量样品中存在的“总LIF”(结合的和未结合的)。该测定能够准
确测量20pg/ml(1pM)和2ng/ml(100pM)之间的总LIF水平，但不限于此。总LIF水平可以作为重要的治疗指标，并允许临床医生密切监测个体中LIF治疗性抗体的PK/PD动态。
[0007]在某些方面，本文描述的是白血病抑制因子(LIF)复合物，该复合物包含：LIF、与LIF特异性结合的LIF捕获抗体、与LIF特异性结合的LIF检测抗体、以及任选地与LIF特异性结合的LIF治疗性抗体，其中该LIF检测抗体或该LIF捕获抗体包括A4或其LIF结合片段。在某些实施例中，该LIF复合物的用途是用于定量LIF的体外测定。在某些实施例中，该LIF捕获抗体或该LIF检测抗体不竞争与该LIF治疗性抗体的结合。在某些实施例中，该LIF是人LIF。在某些实施例中，该LIF治疗性抗体包括：(a)免疫球蛋白重链互补决定区1(VH
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CDR1)，其包括SEQ ID NO：1
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3中任一项所阐述的氨基酸序列；(b)免疫球蛋白重链互补决定区2(VH
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CDR2)，其包括SEQ IDNO：4或5中任一项所阐述的氨基酸序列；(c)免疫球蛋白重链互补决定区3(VH
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CDR3)，其包括SEQ ID NO：6
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8中任一项所阐述的氨基酸序列；(d)免疫球蛋白轻链互补决定区1(VL
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CDR1)，其包括SEQID NO：9或10中任一项所阐述的氨基酸序列；(e)免疫球蛋白轻链互补决定区2(VL
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CDR2)，其包括SEQ ID NO：11或12中任一项所阐述的氨基酸序列；以及(f)免疫球蛋白轻链互补决定区3(VL
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CDR3)，其包括SEQ ID NO：13所阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，该LIF治疗性抗体包括：(a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其具有与SEQ ID NO：14、15、17或38中任一项所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；以及(b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其具有与SEQ ID NO：18
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21中任一项所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，该LIF治疗性抗体包括：(a)免疫球蛋白重链序列，其具有与SEQ ID NO：30
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33或39中任一项所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；以及(b)免疫球蛋白轻链序列，其具有与SEQ ID NO：34
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37中任一项所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，该LIF捕获抗体偶联至表面。在某些实施例中，该表面包括导电物质。在某些实施例中，该导电物质是电极。在某些实施例中，该LIF检测抗体偶联至可检测部分。在某些实施例中，该可检测部分产生化学信号、电化学信号、发光信号或荧光信号。在某些实施例中，该可检测部分产生电化学信号。在某些实施例中，该LIF检测抗体和该LIF捕获抗体不结合至LIF的在物理上与gp130相互作用的区域。在某些实施例中，该LIF捕获抗体或该LIF检测抗体包括：(a本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种白血病抑制因子(LIF)复合物，该复合物包含：LIF、与LIF特异性结合的LIF捕获抗体、与LIF特异性结合的LIF检测抗体、以及任选地与LIF特异性结合的LIF治疗性抗体，其中该LIF检测抗体或该LIF捕获抗体包括A4或其LIF结合片段。2.如权利要求1所述的LIF复合物的用途，其中该LIF捕获抗体或该LIF检测抗体不竞争与该LIF治疗性抗体的结合。3.如权利要求1至2中任一项所述的LIF复合物，其中该LIF治疗性抗体包括：a)免疫球蛋白重链互补决定区1(VH
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CDR1)，其包括SEQ ID NO：1
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3中任一项所阐述的氨基酸序列；b)免疫球蛋白重链互补决定区2(VH
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CDR2)，其包括SEQ ID NO：4或5中任一项所阐述的氨基酸序列；c)免疫球蛋白重链互补决定区3(VH
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CDR3)，其包括SEQ ID NO：6
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8中任一项所阐述的氨基酸序列；d)免疫球蛋白轻链互补决定区1(VL
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CDR1)，其包括SEQ ID NO：9或10中任一项所阐述的氨基酸序列；e)免疫球蛋白轻链互补决定区2(VL
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CDR2)，其包括SEQ ID NO：11或12中任一项所阐述的氨基酸序列；以及f)免疫球蛋白轻链互补决定区3(VL
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CDR3)，其包括SEQ ID NO：13所阐述的氨基酸序列。4.如权利要求1至2中任一项所述的LIF复合物，其中该LIF治疗性抗体包括：a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其具有与SEQ ID NO：14、15、17或38中任一项所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；以及b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其具有与SEQ ID NO：18
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21中任一项所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。5.如权利要求1至2中任一项所述的LIF复合物，其中该LIF治疗性抗体包括：a)免疫球蛋白重链序列，其具有与SEQ ID NO：30
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33或39中任一项所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；以及b)免疫球蛋白轻链序列，其具有与SEQ ID NO：34
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37中任一项所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。6.如权利要求1至5中任一项所述的LIF复合物，其中该LIF捕获抗体偶联至表面，其中该表面包含导电物质，或其中该导电物质是电极。7.如权利要求1至5中任一项所述的LIF复合物，其中该LIF检测抗体偶联至可检测部分，其中该可检测部分产生化学信号、电化学信号、发光信号或荧光信号，或其中该可检测部分产生电化学信号。8.如权利要求1至7中任一项所述的LIF复合物，其中该LIF检测抗体和该LIF捕获抗体不结合至LIF的在物理上与gp130相互作用的区域。9.如权利要求1至8中任一项所述的LIF复合物，其中该LIF捕获抗体或该LIF检测抗体包括：a)免疫球蛋白重链可变区序列，其具有与SEQ ID NO：41所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；以及
b)免疫球蛋白轻链可变区序列，其具有与SEQ ID NO：42所阐述的氨基酸序列至少约80％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。10.如权利要求1至9中任一项所述的LIF复合物，其中该复合物包含在多孔板的至少一个孔中，其中该复合物包含在96孔板、384孔板或1536孔板的至少一个孔中，或其中该复合物可以每毫升1纳克的水平检测到。11.一种定量来自个体的包含白血病抑制因子(LIF)的样品中的LIF的方法，其包括：a)使该包含LIF的样品与特异性结合LIF的捕获抗体接触；b)使该包含LIF的样品与特异性结合LIF的检测抗体接触；c)检测该样品中与该捕获抗体和该检测抗体结合的LIF；其中该LIF检测抗体或该LIF捕获抗体包括A4或其LIF结合片段。12.如权利要求11所述的方法，其中该个体已经用LIF治疗性抗体治疗。13.如权利要求11至12中任一项所述的方法，其中该LIF治疗性抗体包括：a)免疫球蛋白重链互补决定区1(VH
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CDR1)，其包括SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：瓦尔德希伯伦肿瘤研究所加泰罗尼亚研究和深造学院，
类型：发明
国别省市：