抗间皮素嵌合抗原受体(CAR)构建体及其用途制造技术

本文描述了经工程改造以表达单独的嵌合抗原受体(CAR)诸如抗间皮素CAR或其与滤泡刺激素受体(FSHR)结合结构域和/或显性负性转化生长因子‑β受体II(dnTGFβRII)的组合的T细胞，所述T细胞用于治疗与间皮素表达相关的疾病。还描述了经工程改造以表达修饰的T细胞受体(TCR)的T细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗间皮素嵌合抗原受体(CAR)构建体及其用途相关申请的交叉引用本申请要求于2018年8月29日提交的国际专利申请第PCT/CN2018/103050号和2019年4月23日提交的国际专利申请第PCT/CN2019/083918号的优先权权益，其内容通过引用整体并入本文。对以电子方式提交的序列表的引用本申请包含序列表，所述序列表作为ASCII格式的序列表经由EFS-Web以电子方式提交，文件名为“689296-13CN1序列表”且创建日期为2019年4月16日，并且大小为约727kb。经由EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，并且通过引用整体并入本文。
本专利技术一般涉及经工程改造以表达嵌合抗原受体(CAR)诸如抗间皮素CAR单独或与滤泡刺激素受体(FSHR)结合结构域和/或显性负性转化生长因子-β受体II(dnTGFβRII)组合的T细胞用于治疗与间皮素表达相关的疾病的用途。
技术介绍
过继性T细胞免疫疗法已在治疗血液恶性肿瘤中显示巨大前景，在所述疗法中患者自身的T淋巴细胞经工程改造以表达嵌合抗原受体(C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的多核苷酸，其包含编码融合蛋白的第一核苷酸序列，其中所述融合蛋白自N端至C端包含特异性结合到滤泡刺激素受体(FSHR)的第一多肽、以及选自由CD3-γ链、CD3-δ链和CD3-ε链组成的组中的CD3多肽的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180829 CN PCT/CN2018/103050;20190423 CN PCT/CN201.一种分离的多核苷酸，其包含编码融合蛋白的第一核苷酸序列，其中所述融合蛋白自N端至C端包含特异性结合到滤泡刺激素受体(FSHR)的第一多肽、以及选自由CD3-γ链、CD3-δ链和CD3-ε链组成的组中的CD3多肽的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域。


2.如权利要求1所述的分离的多核苷酸，所述胞外结构域包含分别选自由SEQIDNO:433至435组成的组中的氨基酸序列；所述跨膜结构域包含分别选自由SEQIDNO:436至438组成的组中的氨基酸序列；并且所述胞内结构域包含分别选自由SEQIDNO:439至441组成的组中的氨基酸序列。


3.如权利要求1或2所述的分离的多核苷酸，其还包含编码嵌合抗原受体(CAR)的第二核苷酸序列，其中所述CAR包含：(a)胞外结构域，其包含特异性结合到肿瘤抗原的抗原结合片段；(b)跨膜结构域；和(c)胞内信号传导结构域。


4.一种分离的多核苷酸，其包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列，其中所述CAR包含：
(a)胞外结构域，其包含特异性结合到滤泡刺激素受体(FSHR)的第一多肽和特异性结合到肿瘤抗原的抗原结合片段；
(b)跨膜结构域；和
(c)胞内信号传导结构域。


5.如权利要求1至4中任一项所述的分离的多核苷酸，其还包含第三核苷酸序列，所述第三核苷酸序列编码免疫细胞的细胞介导免疫反应的抑制剂的显性负性形式，优选为转化生长因子β(TGF-β)受体的显性负性形式。


6.如权利要求1至5中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述第一核苷酸序列、所述第二核苷酸序列和/或所述第三核苷酸序列经由2A肽编码序列彼此连接。


7.如权利要求1至6中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述第一多肽包含选自由SEQIDNO:319-331组成的组中的氨基酸序列，优选地，所述融合蛋白包含选自由SEQIDNO:442-444组成的组中的氨基酸序列。


8.如权利要求1至7中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述第一多肽经由接头连接到所述CD3多肽的胞外结构域或所述抗原结合片段的氨基端或羧基端。


9.如权利要求3至8中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述肿瘤抗原选自由间皮素、叶酸受体α、黏蛋白16(MUC16)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、人表皮生长因子受体2(HER2)、表皮生长因子受体(EGFR)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)组成的组。


10.如权利要求9所述的分离的多核苷酸，其中所述肿瘤抗原为间皮素，优选为人间皮素。


11.如权利要求3至10中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述抗原结合片段为Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、单链可变片段(scFv)、微抗体、双抗体、单结构域抗体(sdAb)、轻链可变结构域(VL)或骆驼抗体的可变结构域(VHH)。


12.如权利要求11所述的分离的多核苷酸，其中所述抗原结合片段包含：
i.包含互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3的单结构域抗体(sdAb)，所述互补决定区具有以下多肽序列：
a.分别为SEQIDNO:34、102和170；
b.分别为SEQIDNO:54、122和190；
c.分别为SEQIDNO:55、123和191；
d.分别为SEQIDNO:61、129和197；
e.分别为SEQIDNO:31、99和167；
f.分别为SEQIDNO:32、100和168；
g.分别为SEQIDNO:33、101和169；
h.分别为SEQIDNO:35、103和171；
i.分别为SEQIDNO:36、104和172；
j.分别为SEQIDNO:37、105和173；
k.分别为SEQIDNO:38、106和174；
l.分别为SEQIDNO:39、107和175；
m.分别为SEQIDNO:40、108和176；
n.分别为SEQIDNO:41、109和177；
o.分别为SEQIDNO:42、110和178；
p.分别为SEQIDNO:43、111和179；
q.分别为SEQIDNO:44、112和180；
r.分别为SEQIDNO:45、113和181；
s.分别为SEQIDNO:46、114和182；
t.分别为SEQIDNO:47、115和183；
u.分别为SEQIDNO:48、116和184；
v.分别为SEQIDNO:49、117和185；
w.分别为SEQIDNO:50、118和186；
x.分别为SEQIDNO:51、119和187；
y.分别为SEQIDNO:52、120和188；
z.分别为SEQIDNO:53、121和189；
aa.分别为SEQIDNO:56、124和192；
bb.分别为SEQIDNO:57、125和193；
cc.分别为SEQIDNO:58、126和194；
dd.分别为SEQIDNO:59、127和195；
ee.分别为SEQIDNO:60、128和196；
ff.分别为SEQIDNO:62、130和198；
gg.分别为SEQIDNO:63、131和199；
hh.分别为SEQIDNO:64、132和200；
ii.分别为SEQIDNO:65、133和201；
jj.分别为SEQIDNO:66、134和202；
kk.分别为SEQIDNO:67、135和203；或
ll.分别为SEQIDNO:68、136和204；或
ii.包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3的单链可变片段(scFv)，所述互补决定区具有以下多肽序列：
a.分别为SEQIDNO:1、69、137、2、70和138；
b.分别为SEQIDNO:19、87、155、20、88和156；
c.分别为SEQIDNO:23、91、159、24、92和160；
d.分别为SEQIDNO:25、93、161、26、94和162；
e.分别为SEQIDNO:27、95、163、28、96和164；
f.分别为SEQIDNO:29、97、165、30、98和166；
g.分别为SEQIDNO:3、71、139、4、72和140；
h.分别为SEQIDNO:5、73、141、6、74和142；
i.分别为SEQIDNO:7、75、143、8、76和144；
j.分别为SEQIDNO:9、77、145、10、78和146；
k.分别为SEQIDNO:11、79、147、12、80和148；
l.分别为SEQIDNO:13、81、149、14、82和150；
m.分别为SEQIDNO:15、83、151、16、84和152；
n.分别为SEQIDNO:17、85、153、18、86和154；或
o.分别为SEQIDNO:21、89、157、22、90和158。


13.如权利要求12所述的分离的多核苷酸，其中所述抗原结合片段包含：
i.所述单结构域抗体，其包含与选自由SEQIDNO:221-258和SEQIDNO:420-428组成的组中的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；或
ii.所述单链可变片段，其包含与选自由SEQIDNO:205-220组成的组中的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。


14.如权利要求4至13中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述CAR的所述胞外结构域包含选自由SEQIDNO:348-357组成的组中的氨基酸序列，或所述CAR包含选自由SEQIDNO:370-379和SEQIDNO:448-450组成的组中的氨基酸序列。


15.一种分离的多核苷酸，其包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列，其中所述CAR包含：
(a)胞外结构域，其包含特异性结合到间皮素、优选人间皮素的抗原结合片段；
(b)跨膜结构域；和
(c)胞内信号传导结构域，
其中所述CAR任选还包含在氨基端处的信号肽和连接所述胞外结构域与所述跨膜结构域的铰链区，并且其中所述抗原结合片段包含：
i.包含互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3的单结构域抗体(sdAb)，所述互补决定区具有以下多肽序列：
a.分别为SEQIDNO:34、102和170；
b.分别为SEQIDNO:54、122和190；
c.分别为SEQIDNO:55、123和191；
d.分别为SEQIDNO:61、129和197；
e.分别为SEQIDNO:31、99和167；
f.分别为SEQIDNO:32、100和168；
g.分别为SEQIDNO:33、101和169；
h.分别为SEQIDNO:35、103和171；
i.分别为SEQIDNO:36、104和172；
j.分别为SEQIDNO:37、105和173；
k.分别为SEQIDNO:38、106和174；
l.分别为SEQIDNO:39、107和175；
m.分别为SEQIDNO:40、108和176；
n.分别为SEQIDNO:41、109和177；
o.分别为SEQIDNO:42、110和178；
p.分别为SEQIDNO:43、111和179；
q.分别为SEQIDNO:44、112和180；
r.分别为SEQIDNO:45、113和181；
s.分别为SEQIDNO:46、114和182；
t.分别为SEQIDNO:47、115和183；
u.分别为SEQIDNO:48、116和184；
v.分别为SEQIDNO:49、117和185；
w.分别为SEQIDNO:50、118和186；
x.分别为SEQIDNO:51、119和187；
y.分别为SEQIDNO:52、120和188；
z.分别为SEQIDNO:53、121和189；
aa.分别为SEQIDNO:56、124和192；
bb.分别为SEQIDNO:57、125和193；
cc.分别为SEQIDNO:58、126和194；
dd.分别为SEQIDNO:59、127和195；
ee.分别为SEQIDNO:60、128和196；
ff.分别为SEQIDNO:62、130和198；
gg.分别为SEQIDNO:63、131和199；
hh.分别为SEQIDNO:64、132和200；
ii.分别为SEQIDNO:65、133和201；
jj.分别为SEQIDNO:66、134和202；
kk.分别为SEQIDNO:67、135和203；或
ll.分别为SEQIDNO:68、136和204；或
ii.包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3的单链可变片段(scFv)，所述互补决定区具有以下多肽序列：
a.分别为SEQIDNO:1、69、137、2、70和138；
b.分别为SEQIDNO:19、87、155、20、88和156；
c.分别为SEQIDNO:23、91、159、24、92和160；
d.分别为SEQIDNO:25、93、161、26、94和162；
e.分别为SEQIDNO:27、95、163、28、96和164；
f.分别为SEQIDNO:29、97、165、30、98和166；
g.分别为SEQIDNO:3、71、139、4、72和140；
h.分别为SEQIDNO:5、73、141、6、74和142；
i.分别为SEQIDNO:7、75、143、8、76和144；
j.分别为SEQIDNO:9、77、145、10、78和146；
k.分别为SEQIDNO:11、79、147、12、80和148；
l.分别为SEQIDNO:13、81、149、14、8...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴晴，刘健，杨帅，蒋坤，彭园园，呼晨，武术，
申请(专利权)人：南京传奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32