反相高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内七种氨基酸的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种反相高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内七种氨基酸的检测方法。所述检测方法包括如下步骤：采用水提取蚯蚓样品，离心后取上清夜，经稀释后进行反相高效液相色谱串联质谱检测，得到待测蚯蚓样品中亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的峰面积；根据每种氨基酸的峰面积与浓度之间的标准曲线，即得到蚯蚓样品中各氨基酸的浓度。本发明专利技术与以往检测氨基酸的方法相比，减少了繁琐的衍生化过程，并且前处理较为简单，直接用水提取即可，避免使用有机有毒试剂，对研究者而言是一种更加有益健康的方法，还能为生物毒理学研究提供可靠的理论支撑。

【技术实现步骤摘要】
反相高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内七种氨基酸的检测方法
本专利技术涉及一种反相高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内七种氨基酸的检测方法。
技术介绍
七种氨基酸(亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸)除了合成多肽和蛋白质外，还参与一些特殊的代谢反应，而代谢过程可以直接反映生物体在当前所处的生理环境的变化情况。这7种代谢物的变化主要影响机体的三羧酸循环过程。三羧酸循环是三大营养素(氨基酸、糖类和脂类)的最终代谢途径，又是这三种主要代谢相互联系的枢纽。这些代谢物的显著变化严重影响了三羧酸循环过程，导致机体的各代谢之间的不协调，从而影响机体的正常生命活动。目前，大量的代谢组学研究都采用核磁共振光谱对代谢物进行检测和分析，但是由于核磁共振低灵敏度的局限性与生物样品的复杂性导致核磁共振光谱检测较为有限。而高效液相色谱串联电喷雾三重四极杆质谱(HPLC-ESI-MS)因其灵敏度和限行范围方面具有的优势被大量使用测定代谢物。联用技术的使用为生物代谢物来了极大的方便。如中国专利申请(公开号CN111638293A)公开了一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种反相高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内七种氨基酸的检测方法，包括如下步骤：/n采用水提取蚯蚓样品，离心后取上清夜，经稀释后进行反相高效液相色谱串联质谱检测，得到待测蚯蚓样品中亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的峰面积；/n根据每种氨基酸的峰面积与浓度之间的标准曲线，即得到蚯蚓样品中各氨基酸的浓度。/n

【技术特征摘要】
1.一种反相高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内七种氨基酸的检测方法，包括如下步骤：
采用水提取蚯蚓样品，离心后取上清夜，经稀释后进行反相高效液相色谱串联质谱检测，得到待测蚯蚓样品中亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的峰面积；
根据每种氨基酸的峰面积与浓度之间的标准曲线，即得到蚯蚓样品中各氨基酸的浓度。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述反相高效液相色谱串联质谱检测的条件如下：
液相条件为：
色谱柱为：ZORBAXEclipsePlusC18色谱柱；
流动相A：体积比为1000：1的水与甲酸的混合液；
流动相B：体积比为1000：1的乙腈与甲酸的混合液；
梯度洗脱的程序如下：
0～1min，流动相A的体积分数为99％；
1～8min，流动相A的体积分数由99％下降至90％；
8～9min，流动相A的体积分数保持为90％；
9.01～10min，流动相A的体积分数由90％上升至99％；
流速为0.2mL/min；
柱温为30℃；
进样量为5μL。...

【专利技术属性】
技术研发人员：史雅娟，邵秀清，梁若玉，宋帅，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：北京;11