本发明专利技术公开了一组猪繁殖障碍病原体多联检测引物组及含有该引物组的检测装置，属于生物技术领域。所述引物组合包括猪瘟病毒引物组、猪伪狂犬病毒引物组、猪繁殖与呼吸道综合征病毒引物组、猪细小病毒引物组、猪乙型脑炎病毒引物组和猪圆环病毒2型引物组。本发明专利技术将微流控芯片技术与核酸检测技术进行结合，实现单样品多指标同时检测，该系统简化了实验操作步骤、提高了检测通量，为猪繁殖障碍病原体多指标精准检测提供了新方法，满足多指标快速筛查及精准检测的迫切需求。
【技术实现步骤摘要】
猪繁殖障碍病原体多联检测引物组合及含有该引物组的检测装置
本专利技术属于生物
，具体涉及一组猪繁殖障碍病原体多联检测引物组及含有该引物组的检测装置。
技术介绍
目前的研究发现，猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒和猪圆环病毒2型是目前常见于猪繁殖障碍疾病的病原体，以妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊、产出无活力的弱仔、畸形仔、少仔和公、母猪的不育等为特征。这些病原体存在隐性感染的情况，并且经常存在混合感染的情况，这都给临床诊断带来很大的麻烦。而目前的实验室诊断方法主要有病原体直接涂片镜检观察、细胞培养检查、血清酶联免疫学检测和常规核酸检测技术，其中镜检和培养法的特异性最好，但灵敏度较差，对样本的采集、保存、运输和实验条件要求高；检测周期长，部分病原体极难培养、无法质控；对混合感染患者检出率低；而免疫学检测灵敏度低，而且病原体感染具有窗口期，对于诊断无并发症的猪繁殖障碍价值不大。常规核酸检测技术由于其高灵敏度和特异性已越来越广泛的应用于猪病相关病原体的检测，但较低的检测通量限制了其在病原微生物方面的应用。这些方法在实际应用中存在一定的局限性，而恒温扩增结合微流控检测技术则具有简便、快速、高度特异的特点，克服目前目时效差，指标单一和灵敏度低等缺点，在多重病原微生物检测方面有巨大的优势。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一组猪繁殖障碍病原体多联检测引物组，该引物组能进行多联常见猪繁殖障碍病原体检测。本专利技术的另一目的是提供一种含有上述引物组的检测装置，该装置实现单样品多指标同时检测，简化实验操作步骤、提高检测通量，以满足多指标快速筛查及精准检测的迫切需求。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：猪繁殖障碍病原体的多联检测引物组合，包括猪瘟病毒引物组、猪伪狂犬病毒引物组、猪繁殖与呼吸道综合征病毒引物组、猪细小病毒引物组、猪乙型脑炎病毒引物组和猪圆环病毒2型引物组，其中：所述猪瘟病毒引物组包括SEQIDNo：1所示的正向外引物CFSV-F3、SEQIDNo：2所示的反向外引物CFSV-B3、SEQIDNo：3所示的正向内引物CFSV-FIP、SEQIDNo：4所示的反向内引物CFSV-BIP、SEQIDNo：5所示的正向环引物CFSV-LF和SEQIDNo：6所示的反向环引物CFSV-LB；所述猪伪狂犬病毒引物组包括SEQIDNo：7所示的正向外引物PRV-F3、SEQIDNo：8所示的反向外引物PRV-B3、SEQIDNo：9所示的正向内引物PRV-FIP、SEQIDNo：10所示的反向内引物PRV-BIP、SEQIDNo：11所示的正向环引物PRV-LF、SEQIDNo：12所示的反向环引物PRV-LB；所述猪繁殖与呼吸道综合征病毒引物组包括SEQIDNo：13所示的正向外引物PRRSV-F3、SEQIDNo：14所示的反向外引物PRRSV-B3、SEQIDNo：15所示的正向内引物PRRSV-FIP、SEQIDNo：16所示的反向内引物PRRSV-BIP和SEQIDNo：17所示的正向环引物PRRSV-LF；所述猪细小病毒引物组包括SEQIDNo：18所示的正向外引物PPV-F3、SEQIDNo：19所示的反向外引物PPV-B3、SEQIDNo：20所示的正向内引物PPV-FIP、SEQIDNo：21所示的反向外引物PPV-BIP、SEQIDNo：22所示的正向环引物PPV-LF和SEQIDNo：23所示的反向环引物PPV-LB；所述猪乙型脑炎病毒引物组包括SEQIDNo：24所示的正向外引物JEV-F3、SEQIDNo：25所示的反向外引物JEV-B3、SEQIDNo：26所示的正向内引物JEV-FIP、SEQIDNo：27所示的反向内引物JEV-BIP、SEQIDNo：28所示的正向环引物JEV-LF和SEQIDNo：29所示的反向环引物JEV-LB；所述猪圆环病毒2型引物组包括SEQIDNo：30所示的正向外引物PCV2-F3、SEQIDNo：31所示的反向外引物PCV2-B3、SEQIDNo：32所示的正向内引物PCV2-FIP、SEQIDNo：33所示的反向内引物PCV2-BIP、SEQIDNo：34所示的正向环引物PCV2-LF和SEQIDNo：35所示的反向环引物PCV2-LB。上述引物组合在制备猪繁殖障碍病原体检测试剂中的应用；所述检测试剂可用于鉴定或检测样本中是否含有猪瘟病毒和/或猪伪狂犬病毒和/或猪繁殖与呼吸道综合征病毒和/或猪细小病毒和/或猪乙型脑炎病毒和/或猪圆环病毒2型。含有上述引物组合的检测装置，该检测装置包括一个或多个底片以及盖片，底片与盖片之间相互定位密封配合；所述底片上设置有第一试剂储存槽、第二试剂储存槽、连接第一试剂储存槽和第二试剂储存槽的连接通道；在所述第二试剂储存槽末端连接一个均分通道，在均分通道的内侧设置有排气系统，排气系统的入口与均分通道的末端相连；所述第一试剂储存槽、连接通道、第二试剂储存槽、均分通道和排气系统之间依次相连；所述均分通道包括均分流道，均分流道的首端至末端沿第一试剂储存槽和第二试剂储存槽的外周布置；沿所述均分流道外沿设置多个均分孔，在每个均分孔的径向上依次设置密封孔、第二缓冲孔和检测孔，均分孔、密封孔、第一缓冲孔和检测孔之间通过微细通道依次相连；在各个检测孔中分别容纳猪瘟病毒引物组、猪伪狂犬病毒引物组、猪繁殖与呼吸道综合征病毒引物组、猪细小病毒引物组、猪乙型脑炎病毒引物组和猪圆环病毒2型引物组中的任意一组或几组；在所述第二试剂储存槽或者检测孔中容纳扩增试剂。进一步地，所述均分流道的前端至末端沿第一试剂储存槽和第二试剂储存槽的外圆周呈半径递增式布置。进一步地，在所述均分流道的前端设置第一废液槽，在均分流道的末端设置第二废液槽，第二废液槽具有两个开口，第一开口与均分流道的末端相连，第二开口与排气系统的入口相连。进一步地，在所述第一试剂储存槽内设置有1个或多个第二缓冲孔，排气系统的末端与第一试剂储存槽末端的第一缓冲孔连通。进一步地，所述第一试剂储存槽和第二试剂储存槽为弧形结构，且弧形结构的半径向外逐渐增大。进一步地，所述第二试剂储存槽内设置有1个或多个堤坝。进一步地，所述第一缓冲孔的直径小于密封孔和检测孔的直径。进一步地，在所述排气系统上设置1个或多个第三缓冲孔，第三缓冲孔位于排气系统的外侧。进一步地，所述均分孔不少于8个。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：1.本专利技术将微流控芯片技术与核酸检测技术进行结合，实现单样品多指标同时检测，该系统简化了实验操作步骤、提高了检测通量，为猪繁殖障碍病原体多指标精准检测提供了新方法，满足多指标快速筛查及精准检测的迫切需求；2.将样品加入芯片后，在驱动力的作用下，样品均匀分布至各检测区，不同检测区内预包埋的试剂与样品进行充分溶解及混合，通过仪器的精准温度控制和探测器实时检测，判别各检测孔的结果；...
【技术保护点】
1.猪繁殖障碍病原体的多联检测引物组合，其特征在于：包括猪瘟病毒引物组、猪伪狂犬病毒引物组、猪繁殖与呼吸道综合征病毒引物组、猪细小病毒引物组、猪乙型脑炎病毒引物组和猪圆环病毒2型引物组，其中：/n所述猪瘟病毒引物组包括SEQ ID No：1所示的正向外引物CFSV-F3、SEQ ID No：2所示的反向外引物CFSV-B3、SEQ ID No：3所示的正向内引物CFSV-FIP、SEQ ID No：4所示的反向内引物CFSV-BIP、SEQ ID No：5所示的正向环引物CFSV-LF和SEQ ID No：6所示的反向环引物CFSV-LB；/n所述猪伪狂犬病毒引物组包括SEQ ID No：7所示的正向外引物PRV-F3、SEQ ID No：8所示的 反向外引物PRV-B3、SEQ ID No：9所示的正向内引物PRV-FIP、SEQ ID No：10所示的反向内引物PRV-BIP、SEQ ID No：11所示的正向环引物PRV-LF、SEQ ID No：12所示的反向环引物PRV-LB；/n所述猪繁殖与呼吸道综合征病毒引物组包括SEQ ID No：13所示的正向外引物PRRSV-F3、SEQ ID No：14所 示的反向外引物PRRSV-B3、SEQ ID No：15所示的正向内引物PRRSV-FIP、SEQ ID No：16所示的反向内引物PRRSV-BIP和SEQ ID No：17所示的正向环引物PRRSV-LF；/n所述猪细小病毒引物组包括SEQ ID No：18所示的正向外引物PPV-F3、SEQ ID No：19所示的反向外引物PPV-B3、SEQ ID No：20所示的正向内引物PPV-FIP、SEQ ID No：21所示的反向外引物PPV-BIP、SEQ ID No：22所示的正向环引物PPV-LF和SEQ ID No：23所示的反向环引物PPV-LB；/n所述猪乙型脑炎病毒引物组包括SEQ ID No：24所示的正向外引物JEV-F3、SEQ ID No：25所示的反向外引物JEV-B3、SEQ ID No：26所示的正向内引物JEV-FIP、SEQ ID No：27所示的反向内引物JEV-BIP、SEQ ID No：28所示的正向环引物JEV-LF和SEQ ID No：29所示的反向环引物JEV-LB；/n所述猪圆环病毒2型引物组包括SEQ ID No：30所示的正向外引物PCV2-F3、SEQ ID No：31所示的反向外引物PCV2-B3、SEQ ID No：32所示的正向内引物PCV2-FIP、SEQ ID No：33所示的反向内引物PCV2-BIP、SEQ ID No：34所示的正向环引物PCV2-LF和SEQ ID No：35所示的反向环引物PCV2-LB。/n...
【技术特征摘要】
1.猪繁殖障碍病原体的多联检测引物组合，其特征在于：包括猪瘟病毒引物组、猪伪狂犬病毒引物组、猪繁殖与呼吸道综合征病毒引物组、猪细小病毒引物组、猪乙型脑炎病毒引物组和猪圆环病毒2型引物组，其中：
所述猪瘟病毒引物组包括SEQIDNo：1所示的正向外引物CFSV-F3、SEQIDNo：2所示的反向外引物CFSV-B3、SEQIDNo：3所示的正向内引物CFSV-FIP、SEQIDNo：4所示的反向内引物CFSV-BIP、SEQIDNo：5所示的正向环引物CFSV-LF和SEQIDNo：6所示的反向环引物CFSV-LB；
所述猪伪狂犬病毒引物组包括SEQIDNo：7所示的正向外引物PRV-F3、SEQIDNo：8所示的反向外引物PRV-B3、SEQIDNo：9所示的正向内引物PRV-FIP、SEQIDNo：10所示的反向内引物PRV-BIP、SEQIDNo：11所示的正向环引物PRV-LF、SEQIDNo：12所示的反向环引物PRV-LB；
所述猪繁殖与呼吸道综合征病毒引物组包括SEQIDNo：13所示的正向外引物PRRSV-F3、SEQIDNo：14所示的反向外引物PRRSV-B3、SEQIDNo：15所示的正向内引物PRRSV-FIP、SEQIDNo：16所示的反向内引物PRRSV-BIP和SEQIDNo：17所示的正向环引物PRRSV-LF；
所述猪细小病毒引物组包括SEQIDNo：18所示的正向外引物PPV-F3、SEQIDNo：19所示的反向外引物PPV-B3、SEQIDNo：20所示的正向内引物PPV-FIP、SEQIDNo：21所示的反向外引物PPV-BIP、SEQIDNo：22所示的正向环引物PPV-LF和SEQIDNo：23所示的反向环引物PPV-LB；
所述猪乙型脑炎病毒引物组包括SEQIDNo：24所示的正向外引物JEV-F3、SEQIDNo：25所示的反向外引物JEV-B3、SEQIDNo：26所示的正向内引物JEV-FIP、SEQIDNo：27所示的反向内引物JEV-BIP、SEQIDNo：28所示的正向环引物JEV-LF和SEQIDNo：29所示的反向环引物JEV-LB；
所述猪圆环病毒2型引物组包括SEQIDNo：30所示的正向外引物PCV2-F3、SEQIDNo：31所示的反向外引物PCV2-B3、SEQIDNo：32所示的正向内引物PCV2-FIP、SEQIDNo：33所示的反向内引物PCV2-BIP、SEQIDNo：34所示的正向环引物PCV2-LF和SEQIDNo：35所示的反向环引物PCV2-LB。
2.权利要求1所述的引物组合在制备猪繁殖障碍病原体检测试剂中的应用；
所述检测试剂可用于鉴定或检测样本中是否含有猪瘟病毒和/或猪伪狂犬病毒和/或猪繁殖与呼吸道综合征病毒和/或猪细小病毒和/或猪乙型脑炎病毒和/或猪圆环病毒2型。
3.一种含有权利要求1所述引物组合的检测装置，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐大运，陈昌海，董永毅，徐小艳，陈俊飞，刘梅，邓永杰，
申请(专利权)人：无锡科智达科技有限公司，江苏省动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。