一种香蒲重金属ATP酶基因TyHMA3的克隆与功能表达方法技术

本发明专利技术属于生物技术综合利用领域，公开了一种香蒲重金属ATP酶基因

【技术实现步骤摘要】
一种香蒲重金属ATP酶基因TyHMA3的克隆与功能表达方法
本专利技术涉及生物技术综合利用领域，具体的说是一种香蒲重金属ATP酶基因TyHMA3的克隆与功能表达方法。
技术介绍
随着工农业发展，土壤重金属污染程度日益严重，其中较为突出的重金属有镉（Cd）和铅（Pb）。高浓度的Cd2+和Pb2+被植物吸收之后会引起细胞膜降解、离子外渗以及酶活性丧失，并可干扰植物体水分吸收、离子转运、细胞代谢等正常生理生化过程，对植物造成极大的伤害，甚至会导致枯萎死亡。P-typeATPase（P-ATPase）是一类通过水解ATP跨膜运送金属阳离子的转运蛋白构成的超级家族，该家族成员可选择性地吸收、转运部分必需金属离子（Zn2+、Cu2+和Co2+）及重金属离子（Cd2+和Pb2+）。HeavyMetalATPase（HMA）隶属于P-ATPase，多数定位在细胞质膜与液泡膜上，是介导重金属离子吸收、转运与区隔过程的关键转运蛋白，在植物重金属离子吸收、木质部装载、液泡区隔与离子稳态过程中发挥重要作用。目前，HMA的相关研究仅局限在拟南芥、大田作物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种香蒲重金属 ATP 酶基因

【技术特征摘要】
1.一种香蒲重金属ATP酶基因TyHMA3，其特征在于，为序列表中的SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述一种香蒲重金属ATP酶基因TyHMA3，其特征在于，为序列表中的SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。


3.一种能扩增出SEQIDNO.1的多重PCR引物组。


4.根据权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述引物组为：
HMA-F（TCTCAGTCTACTATTTAG）；
HMA-R（TCAATCATAAAGAAGAAA）。


5.一种用于权利要求1所述的香蒲重金属ATP酶基因TyHMA3克隆的载体，其特征在于，所述载体为pMD19-T载体。


6.一种香蒲重金属ATP酶基因TyHMA3克隆方法，其特征在于，包括以下步骤，
S1.选取香蒲幼苗作为供试材料；
S2.将S1中的香蒲幼苗放入营养液中培养，待叶片生长到25-40cm时，选择正常健壮且长势一致的植株，剪取根、走茎、假茎、叶片组织样品；
S3.提取S2中各个样品的总mRNA，并将各样品的总mRNA等比例混合；
S4.将S3提取出的总mRNA构建香蒲cDNA文库；
S5.香蒲组织三代转录组测序数据及注释结果，检索并拼接香蒲HMA基因；
S6.将S4中的cDNA与S5中拼接香蒲HMA基因设计权利要求4所述的引物组；
S7.用S6设计的引物组、以S4中的cDNA为模板进行PCR反应，分离和回收；
S8.将S7回收产物连入权利要求5所述载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞培养，挑选阳...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄志楠，段伟科，王云鹏，王晓莉，孙小川，靳丛，刘雨婷，
申请(专利权)人：淮阴工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32