一种CRISPR系统及其在高山被孢霉中的应用技术方案

本发明专利技术公开了一种CRISPR系统及其在高山被孢霉中的应用，属于生物工程技术领域技术领域。本发明专利技术采用的核酸酶为毛螺科菌(Lachnospiraceae bacterium)的LbCpf1，所使用的诱导型启动子为里氏木霉(Trichoderma reesei)中的cbh1，所选靶向基因为尿嘧啶基因ura5，所用的出发菌株为高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型MAU1，本发明专利技术提供的基于CRISPR技术的高山被孢霉系统，可实现生物量和产脂含量与野生菌无显著性差异，并可以实现多基因表达，此方法将为构建高工业价值的重组高山被孢霉提供技术手段。

【技术实现步骤摘要】
一种CRISPR系统及其在高山被孢霉中的应用
本专利技术涉及一种CRISPR系统及其在高山被孢霉中的应用，属于生物工程

技术介绍
高山被孢霉是一株具有工业价值的高产花生四烯酸的产油丝状真菌。目前，高山被孢霉的产脂途径已基本明晰，其体内的多个产脂相关基因的功能已被成功验证。为进一步构建高产菌株，研究者需要借助多基因表达手段，将已验证功能的产脂关键基因导入到高山被孢霉基因组中。目前，高山被孢霉中进行基因表达局限在两个基因层面。受转化方法及筛选标记的局限，传统的共转化法、多操纵子法等无法应用于高山被孢霉。传统的筛选标记回收法包括Cre/LoxP以及FLP/FRT，这两个系统会出现由于多个识别位点遗留而导致宿主菌正常基因功能缺失或者死亡的问题。如何根据高山被孢霉自身的遗传背景以及现存的技术手段解决多基因表达是后续构建高产菌株首先需要解决的技术难题。规律间隔成簇短回文重复序列(Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats，CRISPR)系统是近几年兴起的靶向基因敲除技术。此系统本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸酶LbCpf1编码基因，其特征在于，含有SEQ ID NO.1所示的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种核酸酶LbCpf1编码基因，其特征在于，含有SEQIDNO.1所示的序列。


2.含有权利要求1所述核酸酶LbCpf1编码基因的表达载体。


3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，是组成型表达载体或诱导型表达载体。


4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，诱导型表达载体含有诱导型启动子Pcbh1。


5.含有权利要求2～4任一所述表达载体，或基因组上整合有权利要求1所述核酸酶LbCpf1编码基因的重组丝状真菌细胞。


6.根据权利要求5所述的重组丝状真菌细胞，其特征在于，以高山被孢霉为宿主。


7.一种基于CRISPR技术的丝状真菌系统，其特征在于，含有用于产生引导链CrRNA的表达载体，和表达SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海琴，王顺贤，常璐璐，张灏，陈永泉，陈卫，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32