两种多功能基因编辑工具的构造及其使用方法技术

本发明专利技术公开了两种人类基因组编辑工具的构建和使用方法。两种人类基因组编辑工具都由一种RTgRNA分子及对应的基因编辑融合蛋白结合而成。每种融合蛋白主是由一种改造过的Cas蛋白和改造过的逆转录酶连接而成。每种编辑器都可更改人类细胞基因组DNA。改变DNA的方式包括短片段删除、增加、替换DNA碱基。两种基因组编辑工具具有超高精准性，期望产物纯度高，对细胞伤害极低，拓展性强，能实现多种编辑，设计较容易，成本较低，能多位点同时编辑等特点。

【技术实现步骤摘要】
两种多功能基因编辑工具的构造及其使用方法
本专利技术属于分子生物学领域的基因组编辑技术一类，具体涉及两种基因组修改工具的构建、制备方法。每种基因组修改工具都可以在一种特殊设计的RNA的指导下，定位到人类基因组上指定靶点，进行DNA的插入，删除，多碱基突变。
技术介绍
本专利的基因编辑器是能和碱基编辑器对标的人类基因组超精准编辑器。首先，这种编辑器可以做12种碱基对的转换，碱基编辑器只能做4种碱基对的改变。第二，碱基编辑器不能插入或者删除人为设计的小片段DNA(大约1～100bp)到指定的编辑位点，然而本专利的技术可以做到。第三，专利中的基因组编辑器根据专利中所述的方法，可以实现人类细胞多位点，超精准，在打靶区域内，一个或多个碱基的转换，或者多个位点的删除和插入。为了方便理解，可以表达多位点不定量任意碱基转换(Multiplexingsingle-or-morearbitrarybaseconversion，MSMABCforshort)，简称MSMABC。以及多位点短片段DNA插入或删除(Multiplexingshortinserti本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.递送本专利的两种人类基因组编辑工具到人类和其他哺乳动物细胞的方式包括；电转化或电转孔(electroporation)递送法；纳米粒子递送，特别是脂质体(liposome)，脂质纳米粒子(lipid nanoparticle)，多聚合物纳米粒子(polymer nanoparticle)和脂质多聚合纳米粒子(lipid-polymer hybrid nanoparticle)；病毒载体递送，特别是第二代或第三代自失活的慢病毒载体系统(the 2

【技术特征摘要】
1.递送本专利的两种人类基因组编辑工具到人类和其他哺乳动物细胞的方式包括；电转化或电转孔(electroporation)递送法；纳米粒子递送，特别是脂质体(liposome)，脂质纳米粒子(lipidnanoparticle)，多聚合物纳米粒子(polymernanoparticle)和脂质多聚合纳米粒子(lipid-polymerhybridnanoparticle)；病毒载体递送，特别是第二代或第三代自失活的慢病毒载体系统(the2ndor3rdgenerationofself-inactivatinglentivirus)，逆转录病毒系统。


2.如权利要求1所述的递送方法，递送到细胞中的人类基因组编辑工具可以是表达SEQIDNO.1，SEQIDNO.2氨基酸链的DNA分子、mRNA分子，RNA和融合蛋白混合物。


3.如权利要求1所述，电转化或电穿孔所用的设备包括4D-NucleofectorTM(Lonza)和NeonTMnucleofection(ThermoFisherScientific)系统。


4.如权利要求1所述，每种基因组编辑工具都由一种融合蛋白和对应的RTgRNA构成，每种融合蛋白包含以下一条或者多条特征：
i.整个融合蛋白由改造过的Cas蛋白(以下简称为Cas)和改造过的逆转录酶(以下简称为RT)两个必要蛋白构成，改造过的Cas可以是改造过的SaCas9或改造过的CjCas9；
ii.整个融合蛋白的N端(简称为N-term)或...

【专利技术属性】
技术研发人员：李维，杜越，
申请(专利权)人：神拓生物技术无锡有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32