快速简易提取厌氧真菌DNA的方法及应用技术

本发明专利技术涉及菌株DNA的提取技术领域，具体涉及快速简易提取厌氧真菌DNA的方法及应用。所述的方法包括如下步骤：(1)菌株培养；(2)收集菌体；(3)破壁；(4)抽提DNA；(5)沉淀DNA；所述的厌氧真菌DNA提取方法，提取DNA的纯度和浓度高，且采用液氮研磨冷冻和钢珠振荡破碎厌氧真菌细胞壁，破碎过程中所需样本量较少，不易损失样本，破壁效果良好，简单易行。同时，本发明专利技术所述的抽提缓冲液配方简单，成本低廉，提取DNA的效果良好；采用本方法提取厌氧真菌的DNA操作简易，实验重复性好，能够获得高质量的DNA，对于促进厌氧真菌的研究具有重大意义。

【技术实现步骤摘要】
快速简易提取厌氧真菌DNA的方法及应用
本专利技术涉及菌株DNA的提取
，具体涉及快速简易提取厌氧真菌DNA的方法及应用。
技术介绍
厌氧真菌的DNA提取是厌氧真菌分子生物学研究中一项重要工作。目前，真菌基因组提取方法主要有CTAB法、SDS提取法、尿素提取法及酶解法等。上述提取方法的提取步骤大体相似，关键在于如何有效的破碎细胞壁。目前，常用的厌氧真菌细胞破壁的方法有(1)经典的液氮研磨法。(2)液氮冻融(和玻璃珠振荡)法。该方法使用液氮，增加了成本及设备要求；(3)酶解法。用于丝状真菌破壁的酶比较昂贵，在处理大量样品时很不经济；(4)化学试剂(氯化苄)法。化学试剂存在环保上的隐患。上述提取厌氧真菌DNA的方法大多为液氮研磨破碎厌氧真菌的细胞壁，但是破壁效果差，或用专用细胞破碎仪破碎厌氧真菌的细胞壁，然而细胞破碎仪的成本高，破壁过程繁琐，普及率不高。本领域技术人员最常用的真菌基因组提取方法是CTAB法，但CTAB法提取过程繁琐，所需试剂种类繁多，提取效果一般。针对上述技术问题，本领域技术人员研究出来了用于提取厌氧真菌DNA的试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.快速简易提取厌氧真菌DNA的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：/n(1)菌株培养：将厌氧真菌接种在厌氧培养基里，加入复合抗生素，静置培养；/n(2)收集菌体：将步骤(1)得到的菌液离心，取菌丝体；/n(3)破壁：将步骤(2)得到的菌丝体被快速液氮研磨后取0.1-1g加入到离心管中，再加入钢珠，冷却，振荡离心管，振荡期间离心管保持冷冻状态，使厌氧真菌细胞壁破碎；/n(4)抽提DNA：向步骤(3)得到的溶液中加入抽提缓冲液，振荡，恒温水浴后，加入乙酸铵，混匀，冷却，离心，取上清液，弃沉淀物和钢珠；上清液用等体积的Tris饱和酚：氯仿：异戊醇溶液抽提2次，混匀，离心，去除杂蛋白；/n(5...

【技术特征摘要】
1.快速简易提取厌氧真菌DNA的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
(1)菌株培养：将厌氧真菌接种在厌氧培养基里，加入复合抗生素，静置培养；
(2)收集菌体：将步骤(1)得到的菌液离心，取菌丝体；
(3)破壁：将步骤(2)得到的菌丝体被快速液氮研磨后取0.1-1g加入到离心管中，再加入钢珠，冷却，振荡离心管，振荡期间离心管保持冷冻状态，使厌氧真菌细胞壁破碎；
(4)抽提DNA：向步骤(3)得到的溶液中加入抽提缓冲液，振荡，恒温水浴后，加入乙酸铵，混匀，冷却，离心，取上清液，弃沉淀物和钢珠；上清液用等体积的Tris饱和酚：氯仿：异戊醇溶液抽提2次，混匀，离心，去除杂蛋白；
(5)沉淀DNA：取步骤(4)得到的上层水相至另一离心管中，加入异丙醇，混匀，低温放置以沉淀DNA；离心，弃上清，用乙醇洗涤沉淀，用无菌双蒸水溶解沉淀，即得厌氧真菌DNA。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的厌氧培养基的配制步骤如下：酵母膏1.0g，蛋白胨1.0g，葡萄糖1.0g，NaHCO37.0g，刃天青1.0g/L1mL，L-半胱氨酸盐酸盐1.7g，晨饲前采集瘤胃液8000×g，4℃离心20min后的上清170mL，盐溶液I165mL，盐溶液II165mL，蒸馏水定容至1000mL；盐溶液I的配制步骤如下：NaCl6g，(NH4)2SO43g，KH2PO43g，CaCl2·2H2O0.4g，MgSO4·2H2O0.6g，蒸馏水定容至1000mL；盐溶液II配制步骤如下：K2HPO44g，蒸馏水定容至1000mL。

【专利技术属性】
技术研发人员：魏亚琴，王霄霄，苟琦敏，
申请(专利权)人：甘肃省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62