一种基于C2c2的基因表达调控系统及其应用技术方案

本发明专利技术提供一种基于C2c2的基因表达调控系统及其应用。所述基因表达调控系统包括：报告酶表达模板、报告酶底物、无细胞蛋白表达系统、C2c2蛋白和crRNA；其中，所述报告酶表达模板经转录和/或翻译后得到报告酶；所述无细胞蛋白表达系统将所述报告酶的mRNA翻译为报告酶；所述C2c2蛋白与crRNA结合后形成的剪切复合物，目标RNA激活所述剪切复合物，而后被激活的剪切复合物切割所述报告酶的mRNA。本发明专利技术通过待测目标物激活C2c2:crRNA复合物的附带切割效应，调控蛋白表达，并结合报告酶对底物的催化作用，实现酶促的级联放大，简单、快速且灵敏地对目标核酸分子进行特异性检测。

【技术实现步骤摘要】
一种基于C2c2的基因表达调控系统及其应用
本专利技术属于生物医学和分子生物学领域，具体涉及一种核酸的快速检测方法，尤其涉及一种基于C2c2的基因表达调控系统及其应用。
技术介绍
全基因组测序是一种先进的核酸检测技术，能够获得海量、精准的核酸信息，但其检测耗时长(超过3天)、成本高，未能在医院中推广。RT-PCR技术是医院中常用的体外检测特定核酸片段的分子生物学技术，其成本相对较低、耗时较短，并且具有较高的灵敏度和特异性。然而，RT-PCR技术依赖昂贵仪器，检测能力有限，需要训练有素的操作员，无法应对突然剧增的病例。对于具有传染性的病毒而言，病毒感染者无法及时确诊和隔离，易导致病毒的扩散和蔓延。尽管目前已经开发了许多用于检测核酸的方法，但它们不可避免地需要在灵敏度、特异性、简单性和速度之间进行权衡。例如，将等温核酸扩增(如RPA、LAMP、NASBA等)与便携式平台相结合的新方法，在护理点(POC)环境中提供了高检测特异性，但由基于这种技术的试剂盒开发要比常规PCR试剂盒复杂，涉及多对引物，人工操作步骤多，且假阳性率高。Pard本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于C2c2的基因表达调控系统，其特征在于，所述基因表达调控系统包括：/n报告酶表达模板、报告酶底物、无细胞蛋白表达系统、C2c2蛋白和crRNA；/n其中，所述报告酶表达模板经转录和/或翻译后得到报告酶；/n所述无细胞蛋白表达系统将所述报告酶的mRNA翻译为报告酶；/n所述C2c2蛋白与crRNA结合后形成的剪切复合物，目标RNA激活所述剪切复合物，而后被激活的剪切复合物切割所述报告酶的mRNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于C2c2的基因表达调控系统，其特征在于，所述基因表达调控系统包括：
报告酶表达模板、报告酶底物、无细胞蛋白表达系统、C2c2蛋白和crRNA；
其中，所述报告酶表达模板经转录和/或翻译后得到报告酶；
所述无细胞蛋白表达系统将所述报告酶的mRNA翻译为报告酶；
所述C2c2蛋白与crRNA结合后形成的剪切复合物，目标RNA激活所述剪切复合物，而后被激活的剪切复合物切割所述报告酶的mRNA。


2.根据权利要求1所述的基因表达调控系统，其特征在于，所述报告酶表达模板包括编码报告酶的表达质粒和/或编码报告酶的mRNA；
优选地，所述编码报告酶的表达质粒包括启动子、调节子和编码酶的基因序列。


3.根据权利要求1或2所述的基因表达调控系统，其特征在于，所述无细胞蛋白表达系统包括大肠杆菌提取物蛋白表达系统、麦胚蛋白表达系统、兔网织红细胞裂解液系统或昆虫蛋白表达系统中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述无细胞蛋白表达系统包括氨酰-tRNA合成酶、转肽酶、起始因子、延长因子、释放因子、氨基酸或tRNA中的任意一种或至少两种的组合。


4.根据权利要求1～3任一项所述的基因表达调控系统，其特征在于，所述C2c2蛋白包括天然的C2c2蛋白和/或人工改造的C2c2蛋白；
优选地，所述crRNA上还包括发卡核酸配体序列和/或脚手架RNA。


5.根据权利要求1～4任一项所述的基因表达调控系统，其特征在于，所述基因表达调控系统还包括报告酶底物；
优选地，所述基因表达调控系统的pH值为7.5～8.5；
优选地，所述基因表达调控系统的缓冲液中包括Mg2+、Tris-HCl、DTT、聚乙二醇、乙酸钾、AT...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐峰，张超，张鹏晖，
申请(专利权)人：苏州缔因安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32