草鱼IgZ重组表达蛋白、多克隆抗体制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种草鱼IgZ重组表达蛋白、多克隆抗体制备方法及其应用。本发明专利技术草鱼IgZ重组表达蛋白的制备方法，包括如下步骤：构建IgZ表达载体pET28a(+)‑IgZ；将构建的重组质粒pET28a(+)‑IgZ转入大肠杆菌菌株，使用IPTG诱导表达草鱼IgZ。本发明专利技术还涉及一种抗草鱼IgZ多克隆抗体的制备方法和抗草鱼IgZ多克隆抗体的应用。本发明专利技术为研究草鱼IgZ的结构、来源、功能提供了重要工具，尤其是在疫苗效果评价使用中发挥重要作用。本发明专利技术制备的抗草鱼IgZ的多克隆抗体，为草鱼疾病的预防及治疗提供了重要的技术手段，为其他养殖鱼类疾病的防治提供参考。

【技术实现步骤摘要】
草鱼IgZ重组表达蛋白、多克隆抗体制备方法及其应用
本专利技术涉及一种多克隆抗体的制备方法及其应用，具体讲是一种抗草鱼(Paralichthysolivaceus)IgZ重组表达蛋白、多克隆抗体制备方法及其应用，属于鱼类分子免疫学

技术介绍
草鱼(Ctenopharyngodonidellus)是我国传统的“四大家鱼”之一，也是我国重要的淡水养殖鱼类，但草鱼易患出血病、烂鳃病、赤皮病和肠炎病，这四大疾病严重影响着草鱼的规模化养殖。目前关于草鱼的免疫细胞因子有了一定研究，但对于草鱼免疫球蛋白的研究仍需深入开展，这将有助于了解草鱼体液免疫，为草鱼的免疫防治提供科学依据。目前，在草鱼中已经报道了IgM、IgZ和IgD三种类型免疫球蛋白，及新型免疫球蛋白IgZ2、IgM-IgZ，其中，IgM、IgZ存在分泌型和膜结合型两种形式。本专利制备抗草鱼IgZ的多克隆抗体，可以为阐明IgZ的结构、来源、功能以及与IgM的关系等提供有力工具；另外，鱼类感染某种病原或接种疫苗后，鱼体会产生黏液IgZ即分泌型IgZ(SIgZ)。因此，利用抗草鱼黏液I本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种草鱼IgZ重组表达蛋白的制备方法，包括如下步骤：构建IgZ表达载体pET28a(+)-IgZ；将构建的重组质粒pET28a(+)-IgZ转入大肠杆菌菌株，使用IPTG诱导表达草鱼IgZ。/n

【技术特征摘要】
1.一种草鱼IgZ重组表达蛋白的制备方法，包括如下步骤：构建IgZ表达载体pET28a(+)-IgZ；将构建的重组质粒pET28a(+)-IgZ转入大肠杆菌菌株，使用IPTG诱导表达草鱼IgZ。


2.一种抗草鱼IgZ多克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：构建IgZ表达载体pET28a(+)-IgZ；将构建的重组质粒pET28a(+)-IgZ转入ArcticExpress菌株，使用IPTG诱导表达草鱼IgZ。


3.权利要求2所述的抗草鱼IgZ多克隆抗体的制备方法，其特征在于：优化表达条件通过变复性的方式重溶目标蛋白，Ni柱亲和纯化获得目的蛋白。


4.权利要求2所述的抗草鱼IgZ多克隆抗体的制备方法，其特征在于：以制备的草鱼IgZ蛋白作为抗原免疫新西兰白兔，经过3-4次免疫之后，经免疫学检测筛选方法，筛选出特异性分泌抗草鱼IgZ多克隆抗体。


5.权利要求2所述的抗草鱼IgZ多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述的构建IgZ表达载体，是设计全长拼接引物获得草鱼IgZ基因，经EcoRV及XhoI双酶切后连接pET28a(+)。


6.权利要求4所述的抗草鱼IgZ多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述的免疫学检测筛选方法是间接酶联免疫法和转印免疫印迹...

【专利技术属性】
技术研发人员：许国晶，张金路，杜兴华，李壮，巩俊霞，王志忠，张明磊，陈秀丽，
申请(专利权)人：山东省淡水渔业研究院山东省淡水渔业监测中心，
类型：发明
国别省市：山东;37