用于早期食管癌筛查的血清学检测标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于医药生物技术领域，公开了一组用于早期食管癌筛查的血清学检测标志物，所述标志物为RBM47蛋白或RBM47蛋白与BCAS4蛋白的组合或RBM47蛋白与HNMT蛋白的组合。本发明专利技术还公开了上述标志物的检测试剂在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用，所述产品为试纸条或试剂盒。本发明专利技术首次将RBM47蛋白或RBM47蛋白与BCAS4蛋白的组合或RBM47蛋白与HNMT蛋白的组合作为早期食管癌筛查的标志物，该标志物具有较高的灵敏度和特异度，极大地提高了早期食管癌的检出率，可用于食管癌高发区无症状人群的大规模筛查，有利于无症状食管癌高危人群早期发现，从而大大降低了食管癌患者的死亡率。

【技术实现步骤摘要】
用于早期食管癌筛查的血清学检测标志物及其应用本申请是申请号为CN2020104853723，申请日为2020-06-01，名称为“一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条”的专利技术专利的分案申请。
本专利技术属于医药生物
，具体涉及一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条。
技术介绍
食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一，我国是全球食管癌发病率最高的国家。河南是中国食管癌高发省份，在中国,围绕太行山地区的河南、河北和山西三省交界地区,特别是河南的林州、安阳和辉县等地,是世界上食管癌发病率和死亡率最高的地区，食管癌高发区(发病率＞60/10万)人口超过4371万，占全省人口的41％。目前，临床上90％的食管癌患者就诊时已属中晚期，导致此结局的主要原因是患者早期无特异症状，缺乏无症状高危人群预警筛查的分子靶标。尽管早期食管癌5年生存率可达90％以上，但临床发现率极低(仅占5％左右)。从正常食管上皮经各级癌前病变到早期癌的多阶段演进分子机制尚不清楚，缺乏高危人群预警和早期食管癌筛查的分子分型模型和技术是导致这一现象的主要原因之一。早期发现是降低食管癌发病率和死亡率的关键。目前，色素内镜和黏膜活检是食管癌早期发现的重要筛查方法。但是，内镜筛查效率低(例如，常规高发区内镜筛查高危人群，早期癌的发现率仅2％左右，约90％以上的无症状高危人群均为“陪伴检查”)，这些限制了内镜筛查在无症状人群中的推广应用。肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化后免疫特性可以识别或诊断肿瘤。尽管目前临床常用的一些肿瘤标志物，如CA125(癌抗原125)、CA199(癌抗原199)、CEA(癌胚抗原)和SCCA(鳞状细胞癌抗原)等可用于食管癌的诊断，但其敏感性和特异性均不高，尤其是对早期食管鳞癌患者的诊断价值不够高。本研究团队在前期利用全基因组关联分析、全基因组测序和全基因组外显子测序等技术建立的基因组学数据库的基础上，采用蛋白芯片技术对早期食管癌患者、高发区无症状高危人群以及正常人血清进行检测和分析，筛选出三种在食管癌患者和正常人中差异化表达的肿瘤血清标志物——RBM47蛋白、BCAS4蛋白和HNMT蛋白。RBM47蛋白(RNA结合基序蛋白47)，RNA结合蛋白(RBPs)对基因表达的调控在大多数细胞信号转导途径中的作用越来越明显。RBPs控制RNA生物合成的几个方面，包括剪接、定位、稳定性和翻译效率。其中一个RBPs是RBM47，最近有人认为它可以作为肿瘤抑制因子，因为它可以抑制乳腺癌和结肠癌的进展。RBM47在转录水平上调节p53。通过控制p53基因，RBM47的敲除同时也降低了p21在转录水平的表达，使来自不同实体的放射癌细胞株进入细胞死亡。BCAS4蛋白(乳腺癌扩增序列4)，在乳腺癌中，有几个染色体位点经常被扩增，这意味着基因的位置对肿瘤的发展和进展很重要，BCAS4在大量乳腺癌细胞系中过度表达。有研究表明BCAS4被预测编码211氨基酸23-kD细胞质蛋白(76.7％PSORTII程序的可能性)与任何其他已知基因或蛋白质没有同源性。主要表达于大脑、胸腺、脾脏、肾脏和胎盘。HNMT蛋白(组胺N-甲基转移酶)，组胺是一种具有局部效应的生物活性物质，但参与调节机体的不同过程，包括疾病的发病机制，广泛分布于人类肝、脑、肾、肺、皮肤、胃肠道、气道及红细胞等组织中，是人体内重要的自身活性物质,具有十分广泛而重要的生理作用，参与了多种疾病的病理生理过程；组胺N-甲基转移酶是体内催化组胺生物转化主要代谢酶，与组胺失活密切相关。RBM47蛋白、BCAS4蛋白和HNMT蛋白在正常人血清中低表达，在食管癌患者血清中高表达；而且，进一步采用统计学检验发现，三种蛋白在食管癌人群中的阳性率均显著高于正常人群，有显著差异。由此说明，RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白可以用于食管癌的诊断。针对该发现，本研究团队利用RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白作为检测指标制备用于早期食管癌检测的产品，用于对食管癌高发区无症状人群进行食管癌早期筛查(无创、简便、经济)，以期提高食管癌早期检出率，改善患者生存质量，减轻家庭和社会负担。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题和不足，本专利技术的目的之一旨在提供一种用于早期食管癌筛查的标志物，本专利技术的目的之二旨在提供一种用于早期食管癌筛查的标志物的检测试剂的应用，本专利技术的目的之三旨在提供一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条。为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术首先提供了一种用于早期食管癌筛查的标志物，所述标志物为HNMT蛋白、BCAS4蛋白、RBM47蛋白中的任意一种或多种的组合。本专利技术还提供了一种上述标志物的检测试剂在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用。根据上述的应用，优选地，所述检测试剂为与所述标志物特异性结合的抗体。根据上述的应用，优选地，所述产品通过免疫层析法或酶联免疫法检测样本中的所述标志物。根据上述的应用，优选地，所述样本为血清。根据上述的应用，优选地，所述产品为试纸条或试剂盒。本专利技术还提供了一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，所述试纸条包括结合垫和层析垫，所述结合垫上包被有捕获抗体，HNMT抗体A、BCAS4抗体A、RBM47抗体A的混合物，RBM47抗体A、BCAS4抗体A、HNMT抗体A均带有可检测的标记物；所述层析垫上设有三条检测线和一条质控线，所述检测线上均固定有检测抗体，三条检测线固定的检测抗体分别为HNMT抗体B、BCAS4抗体B、RBM47抗体B，同种抗原的抗体A、抗体B识别抗原的不同表位；所述质控线上固定有羊抗兔IgG。根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，所述标记物为胶体金颗粒，其中，HNMT抗体A、BCAS4抗体A、RBM47抗体A分别用不同粒径的胶体金颗粒标记。根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，HNMT抗体A、BCAS4抗体A、RBM47抗体A分别为HNMT单克隆抗体、BCAS4单克隆抗体、RBM47单克隆抗体，RBM47单克隆抗体用粒径为27.5nm的胶体金颗粒标记，BCAS4单克隆抗体用粒径为52nm的胶体金颗粒标记，HNMT单克隆抗体用粒径为64nm的胶体金颗粒标记，相对应的颜色分别为橙红色、红色和紫红色。根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，HNMT抗体B、BCAS4抗体B、RBM47抗体B分别为HNMT多克隆抗体、BCAS4多克隆抗体、RBM47多克隆抗体。根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，所述试纸条还包括样品垫、吸样垫和底板，所述样品垫、结合垫、层析垫和吸样垫依次固定在底板上；其中，结合垫的一端压在样品垫的下方，结合垫的另一端压在层析垫的上方；层析垫的一端压在结合垫的下方，层析垫的另一端压在吸样垫的下方。根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，所述捕获抗体中HNMT单克隆抗体、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于早期食管癌筛查的标志物，其特征在于，所述标志物为RBM47蛋白或RBM47蛋白与BCAS4蛋白的组合或RBM47蛋白与HNMT蛋白的组合。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于早期食管癌筛查的标志物，其特征在于，所述标志物为RBM47蛋白或RBM47蛋白与BCAS4蛋白的组合或RBM47蛋白与HNMT蛋白的组合。


2.权利要求1所述标志物的检测试剂在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测试剂为与所...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵学科，李留玉，王立东，宋昕，李恩民，李欣然，周福有，高社干，李贝，郭威，秦艳茹，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，汕头大学医学院，安阳市肿瘤医院，河南科技大学第一附属医院，林州市人民医院，
类型：发明
国别省市：河南;41