高通量测序用分子标签接头及其合成方法与应用技术

本发明专利技术公开了高通量测序用分子标签接头及其合成方法与应用，序列1、序列2在杂交工作缓冲液中加热合成接头A；序列3、序列4在杂交工作缓冲液中加热合成接头B；混合接头A、接头B得到所述高通量测序用分子标签接头。针对Illumina测序平台现有分子标签存在的合成复杂、检测结果准确性还需改善等问题，本发明专利技术公开了新的高通量测序用分子标签接头及其合成方法与应用，成本较低，退火操作简便，碱基平衡性差好，生产成功率高，实现了在具体固定位具有碱基平衡性的效果，避免一些固定位碱基不平衡，改善测序准确性。

【技术实现步骤摘要】
高通量测序用分子标签接头及其合成方法与应用
本专利技术属于生物技术，具体涉及一种高通量测序用分子标签接头及其合成方法与应用，用于Illumina测序平台。
技术介绍
在肿瘤患者外周血中存在循环肿瘤DNA（ctDNA），是肿瘤细胞在坏死、凋亡后释放的一种游离DNA（cfDNA），在血液中的半衰期短，可以实时反映肿瘤的动态变化。而肿瘤患者体内的肿瘤细胞数量远远低于正常细胞，cfDNA在血浆中的含量很低，而ctDNA仅占cfDNA的0.1%~5%，且不同癌种，不同病程的肿瘤患者ctDNA在血浆中含量差异较大，因此相比于组织检测，ctDNA的检测需要更高的灵敏度和特异性。目前用于ctDNA液体活检的第二代测序技术（NGS）同时检测多个基因的多种不同变异形式，是应用最广泛的的基因检测技术。但由于NGS的实验流程技术较为复杂，在文库构建、目标区域捕获及测序过程中不可避免的会引入一些扩增和测序的错误，叫做背景噪音，而ctDNA检测往往突变频率较低，受到背景噪音干扰较大，来自ctDNA样本中的低频突变往往淹没在背景噪音之中，造成假阴性或假阳性结果，这就本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高通量测序用分子标签接头，由接头A、接头B组成，其特征在于，接头A由序列1、序列2合成；接头B由序列3、序列4合成；序列1为AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNT；序列2为NNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC[i7]ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG；序列3为AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNVT；序列4为BNNNNNA...

【技术特征摘要】
1.一种高通量测序用分子标签接头，由接头A、接头B组成，其特征在于，接头A由序列1、序列2合成；接头B由序列3、序列4合成；序列1为AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNT；序列2为NNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC[i7]ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG；序列3为AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNVT；序列4为BNNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC[i7]ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG。


2.根据权利要求1所述高通量测序用分子标签接头，其特征在于，N选自A、T、C、G中的一种，V选自A、C、G中的一种，B选自T、G、C中的一种。


3.根据权利要求1所述高通量测序用分子标签接头，其特征在于，序列1中，位于3端的第2为核苷酸为锁核酸；序列2中，位于5端的第1为核苷酸为锁核酸；序列3中，位于3端的第2为核苷酸为锁核酸；序列4中，位于5端的第1为核苷酸为锁核酸。


4.权利要求1所述高通量...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙石磊，姬云，
申请(专利权)人：苏州科诺医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32