一种端粒和着丝粒超分辨成像方法及其探针技术

本发明专利技术公开了一种端粒和着丝粒超分辨成像方法及其探针，其中所述端粒DNA探针，其序列中包含3个重复单元，所述重复单元的序列如SEQ ID NO.1所示，所述端粒DNA探针和所述着丝粒DNA探针的5’端具有荧光分子，借助探针DNA序列的可逆结合，通过细胞固定、RNA消化、细胞脱水、杂交、清洗和成像的步骤，利用全内反射照明实现两种探针荧光信号的开和关，实现端粒和着丝粒的超分辨单分子定位成像，具有实验成本低、周期短、特异性好、准确度的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种端粒和着丝粒超分辨成像方法及其探针
本专利技术涉及DNA杂交与光学超分辨成像，主要涉及一种端粒和着丝粒超分辨成像方法及其探针。
技术介绍
端粒是位于真核细胞线性染色体末端的一小段DNA-蛋白质复合体，是短的多重复的非转录序列(TTAGGG)及一些结合蛋白组成特殊结构，起到保护染色体DNA的末端，避免染色体DNA的降解、末端融合以及非正常重组等作用。对于哺乳动物而言，端粒的存在可以维持染色体末端稳定，端粒的长度会随着细胞分裂次数的增加而不断缩短，从而确保细胞内的DNA以及遗传信息能够稳定完整的存在。但是，随着端粒的不断缩短，会致使细胞内的基因组无法维持在稳定状态，最终导致细胞老化、死亡或癌变。因此，测量端粒成像有助于提供与疾病相关的重要信息。目前已有的端粒和着丝粒成像方法主要有：电子显微镜成像、荧光染色配合光学显微镜成像等。电子显微镜的分辨率可以达到0.1nm，能够以极高的分辨率展现样品的细节。但是电子显微镜也存在各种问题，主要在于电镜的样品制备过程极为复杂苛刻，并且电镜只能看到细胞内部的结构，对于结构的判断需要其他技术辅助辨别。过去本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种端粒和着丝粒超分辨成像方法，其特征在于：包括如下步骤，/n(1)向接种有待测细胞的细胞培养板中加入固定剂固定好细胞，进行细胞膜穿透；/n(2)加入RNA抑制剂，进行RNA消化；/n(3)加入胃蛋白酶使蛋白质分解；/n(4)加入乙醇使细胞梯度脱水；/n(5)将端粒DNA探针、着丝粒DNA探针与杂交缓冲液制作成探针溶液，其中所述端粒DNA探针，其序列中包含3个重复单元，所述重复单元的序列如SEQ ID NO.1所示，所述端粒DNA探针和所述着丝粒DNA探针的5’端具有荧光分子；/n(6)将探针溶液加入到八孔板中进行杂交；/n(7)利用全内反射照明模式采集细胞上的端粒和着丝粒荧光信号，进行荧...

【技术特征摘要】
1.一种端粒和着丝粒超分辨成像方法，其特征在于：包括如下步骤，
(1)向接种有待测细胞的细胞培养板中加入固定剂固定好细胞，进行细胞膜穿透；
(2)加入RNA抑制剂，进行RNA消化；
(3)加入胃蛋白酶使蛋白质分解；
(4)加入乙醇使细胞梯度脱水；
(5)将端粒DNA探针、着丝粒DNA探针与杂交缓冲液制作成探针溶液，其中所述端粒DNA探针，其序列中包含3个重复单元，所述重复单元的序列如SEQIDNO.1所示，所述端粒DNA探针和所述着丝粒DNA探针的5’端具有荧光分子；
(6)将探针溶液加入到八孔板中进行杂交；
(7)利用全内反射照明模式采集细胞上的端粒和着丝粒荧光信号，进行荧光图像的采集和超分辨单分子定位成像。


2.如权利要求1所述的端粒和着丝粒超分辨成像方法，其特征在于：所述荧光分子包括Cy3、Cy5中的一种或几种。


3.如权利要求2所述的端粒和着丝粒超分辨成像方法，其特征在于：所述端粒DNA探针的序列如SEQIDNO.2所示，所述着丝粒DNA探针的序列如SEQIDNO.3所示。


4.如权利要求1-3任一项所述的端粒和着丝粒超分辨成像方法，其特征在于：步骤(1)，所述固定剂包括4％多聚甲醛，所述固定的时间大于20min；所述进行细胞膜穿透，其为用0.2％曲拉通(TritonX-100)透膜，时间大于5min；步骤(2)中，所述RNA抑制剂为PBS配置的RNaseA溶液，浓度为100μg/mL，反...

【专利技术属性】
技术研发人员：宗慎飞，叶翔宇，王著元，崔一平，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32