替加色罗在制备用于预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了替加色罗在制备用于预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用。所述替加色罗的分子式为C

【技术实现步骤摘要】
替加色罗在制备用于预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用
本专利技术属于药物领域，具体涉及替加色罗在制备用于预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用。
技术介绍
新型冠状病毒肺炎(CoronaVirusDisease2019，COVID-19)，世界卫生组织命名为“2019冠状病毒病”，是由学名为“严重急性呼吸综合征冠状病毒2”(severacuterespiratorysyndrmecoronavirus2，SARS-CoV-2)感染引起的疾病。目前，新冠肺炎的确诊病例已在众多国家出现。COVID-19是通过吸入或与感染的飞沫接触而传播的，潜伏期为2至14天甚至更长，其常见的临床特征包括发热、咳嗽、咽喉痛、头痛、疲劳、肌痛、呼吸困难等。COVID-19在大多数人中是轻度的，但在部分老年人和合并症患者中较为严重，它能迅速发展为肺炎、急性呼吸窘迫综合征或多器官功能障碍等，甚至导致死亡；而还有部分人群属于无任何明显症状的无症状感染者。目前对COVID-19的研究涉及流行性病学调查、临床研究、病毒的检测方法等诸多方面，但有关于SARS-CoV-2病毒入侵、复制、免疫调控机制等研究仍处于探索阶段，且暂时没有疫苗能够为未患病者提供充分的保护，因此针对SARS-CoV-2的抗病毒药物的研究具有非常重要的意义。SARS-CoV-2属于冠状病毒科β冠状病毒属，是一种包膜的非分段正向RNA病毒，其进入宿主细胞是由S蛋白介导的，S蛋白分为受体结合S1区和膜融合S2区。S1通过其受体结合域(RBD)与细胞表面血管紧张素转换酶2(ACE2)受体结合；S2融合宿主细胞和病毒膜，使病毒基因组能够进入宿主细胞进行复制而引发疾病。SARS-CoV-2基因组大小约29.8kb，含有14个ORFs，可编码27个蛋白，其中包括4种较为保守结构蛋白：刺突蛋白S、包膜蛋白E、膜糖蛋白M和核衣壳蛋白N；8种辅助蛋白3a，3b，p6，7a，7b，8b，9b和orf14等。SARS-CoV-2病毒基因组在5’端有2个开放阅读框orf1a和orf1b，可编码2个多聚蛋白pp1a和pp1b；该病毒内还包含两种半胱氨酸蛋白酶-主蛋白酶(Mpro)和木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)，由这两个蛋白酶水解多聚蛋白可得到15种非结构蛋白NSP(NSP1-NSP10和NSP12-NSP16)，进而参与到病毒的转录和复制过程中。PLpro蛋白是半胱氨酸蛋白酶家族中的一类，在宿主细胞内，病毒PLpro识别NSP1/2、NSP2/3及NSP3/4的界限，多聚蛋白肽键的水解裂解发生在P1后的甘氨酸位点，进而导致病毒释放NSP1、NSP2和NSP3来启动病毒介导的RNA复制。另外，PLpro在病毒肽裂解之外还通过去泛素化、去ISG15修饰等参与病毒逃避先天免疫反应等过程。因此，PLpro对于病毒生命周期至关重要，被认为是抗新型冠状病毒感染药物研发的重要靶点，而研究和发现能够有效作用于这些参与冠状病毒生命周期靶点的药物或化合物，对SARS-CoV-2的深入研究、药物研发、预防和治疗均具有非常积极的意义。
技术实现思路
本专利技术提供了替加色罗在制备用于预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用。所述替加色罗具有较强的抑制新型冠状病毒PLpro活性的作用，能够用于预防或者治疗SARS-CoV-2感染，并且对多种细胞无害。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：本专利技术提供了替加色罗在制备用于预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用。进一步的，所述替加色罗的分子式为C16H23N5O，结构式为进一步的，所述冠状病毒包括新型冠状病毒。进一步的，所述替加色罗能够抑制新型冠状病毒PLpro蛋白的活性。进一步的，所述替加色罗在50μmol/L浓度下的抑制率为100％。进一步的，所述新型冠状病毒PLpro蛋白为根据其原始编码序列中G/C含量和大肠杆菌密码子优化后表达的PLpro蛋白。进一步的，所述优化后的PLpro蛋白的编码序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，所述优化后的PLpro蛋白的编码序列翻译后的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。进一步的，所述替加色罗抑制PLpro蛋白的抑制浓度为IC50＜15μmol/L。进一步的，所述替加色罗的抑制浓度的检测方法分别为：在20mmol/L、pH为6.8的磷酸盐缓冲液体系下，加入总浓度为40-200nmol/L的PLpro，在25℃的孵育温度下，再加入不同浓度的替加色罗，室温震荡孵育15min后，迅速加入荧光底物，共测定和记录30min的荧光读数，计算抑制率；然后结合替加色罗浓度的对数值和抑制率，通过四参数法计算所述替加色罗的抑制浓度IC50值。进一步的，荧光底物包括MCA-Dnp-Lys、Cbz-RLRGG-AMC和Ub-AMC。进一步的，所述抑制率的计算公式为IR(inhibitionrate)＝(1-vi/v0)×100％，其中v0为不加抑制剂的酶促反应的初速度，vi为加抑制剂的酶促反应的初速度。进一步的，当荧光底物为MCA-Dnp-Lys，浓度为20μmol/L时，所述替加色罗的抑制浓度IC50为9.26μmol/L。进一步的，当荧光底物为Cbz-RLRGG-AMC，浓度为2.4μmol/L时，所述替加色罗的抑制浓度IC50为1.42μmol/L。进一步的，当荧光底物为Ub-AMC，浓度为2.4μmol/L时，所述替加色罗的抑制浓度IC50为14.01μmol/L。进一步的，所述替加色罗对细胞无毒性作用。进一步的，所述细胞为A549细胞、caco-2细胞、HepG2细胞、HEK293细胞和vero细胞。进一步的，所述替加色罗能够单独使用，或者与其他药物、化合物、载体复配成药物组合物。进一步的，所述药物组合物为口服剂、注射剂、涂剂、洗剂、气雾剂、油制剂或透皮贴剂。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：1、本专利技术通过虚拟筛选得到替加色罗，其具有很好的抑制新型冠状病毒PLpro蛋白活性的作用，在50μmol/L浓度下的抑制率高达100％，并且替加色罗抑制PLpro蛋白的抑制浓度为IC50＜15μmol/L，说明替加色罗可以成为预防或者治疗新型冠状病毒感染的潜在药物。2、替加色罗对多种细胞无毒性作用，其可以单独作为一种原料药，或与其他已知的药物、化合物或载体相配合制成口服剂、注射剂、涂剂、洗剂、气雾剂、油制剂或透皮贴剂等各种形式的药剂或药物组合物而预防或者治疗新型冠状病毒感染，并且使用时安全可靠，不会对细胞和机体产生毒副作用。本专利技术为治疗新型冠状病毒感染提供了新的化合物以及新的思路。附图说明图1为替加色罗的虚拟筛选流程。图2为替加色罗与SARS-CoV-2的PLpro结合模式分析。图3为新型冠状病毒PLpro蛋白的纯化结果图。图4为当荧光底物为MCA-Dnp-Lys时的新型冠状病毒PLpro的米氏常数曲线。图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.替加色罗在制备用于预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.替加色罗在制备用于预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述替加色罗的分子式为C16H23N5O，结构式为





3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述冠状病毒包括新型冠状病毒。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述替加色罗能够抑制新型冠状病毒PLpro蛋白的活性。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述新型冠状病毒PLpro蛋白为根据其原始编码序列中G/C含量和大肠杆菌密码子优化后表达的PLpro蛋白。


6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳晓春，徐锡明，袁文敏，赵广健，王娟，赵晨阳，杨金波，
申请(专利权)人：中国海洋大学，青岛海洋科学与技术国家实验室发展中心，青岛海洋生物医药研究院股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37