一株调节免疫力的双歧杆菌V9及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株调节免疫力的双歧杆菌V9及其应用。本发明专利技术的双歧杆菌V9具有活菌数高，且较低量的菌株即可发挥免疫增强功能。本发明专利技术的双歧杆菌V9较市售益生菌性价比高，更实惠，且提高免疫力效果明显。

【技术实现步骤摘要】
一株调节免疫力的双歧杆菌V9及其应用
本专利技术属于微生物领域，具体涉及一株调节免疫力的双歧杆菌V9及其应用。
技术介绍
益生菌的增强免疫力作用已被广泛认同。在生产生活中，最常见的益生菌是双歧杆菌，它们是人类肠道重要的生理菌，对机体有多种其它正常生理菌无法比拟的生理作用：调节肠道菌群、增强免疫力等等。双歧杆菌通过促进和激活机体感染防护免疫反应而起到增强机体免疫防御系统的作用。双歧杆菌在肠道内定殖，相当于自然免疫，能激活机体巨噬活性，诱发特异性和非特异性免疫反应，提高抗感染的能力；同时双歧杆菌通过自身及其代谢物与其他细菌之间的相互作用，调整菌群之间的关系，维持和保证菌群最佳优势组合及各种组合的稳定，阻止致病菌的定殖和入侵，拮抗致病菌和有害微生物的生长及其毒素的粘附。免疫调节能力作为筛选益生菌的标准和益生菌的重要功能，近些年受到了广泛的关注。由于人体90％的疾病都与自身的免疫力有关，所以免疫力的高低直接决定着一个人健康与否。免疫系统在抵御外来有害物质的入侵方面，发挥着重要的作用，因此寻求更多、更好的提高机体免疫调节能力的物质，无疑对于研发新的保健产品有着承前启后的重要作用。
技术实现思路
本专利技术提供了一株调节免疫力的双歧杆菌V9，能够解决上述现有技术问题中的一种或几种。双歧杆菌表面存着肽聚糖、胞壁磷壁酸、脂磷壁酸、表层蛋白以及其它细胞壁相关多糖。另外，双歧杆菌还可以向细胞外分泌一些具有免疫调节活性的物质，如胞外多糖和其它分泌蛋白。本专利技术的双歧杆菌V9的活菌数不低于5.8*1011个/g，双歧杆菌V9已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号：CGMCCNo.4473，保藏日期：2010年12月14日，保藏地址：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本申请在mRNA水平和蛋白水平对细胞因子、Toll样受体(TLR)、核因子κB(NF-κB)和分泌型免疫球蛋白(sIgA)进行了检测，研究了双歧杆菌的免疫调节能力和作用机制，为开发微生态制剂提供依据。本专利技术还提供了双歧杆菌V9在增强机体免疫力的应用。本申请评估了双歧杆菌V9灌喂给健康小鼠后对其机体免疫功能的影响，通过观察小鼠的体重、迟发性变态反应，淋巴细胞转化实验、自然杀伤细胞(NK细胞)活性以及利用ELISA试剂盒对Toll样受体、NF-κB和sIgA因子表达进行检测。结果显示，本专利技术的双歧杆菌V9可以诱导淋巴细胞增殖，增强迟发型变态反应和小鼠脾淋巴细胞的转化；双歧杆菌V9可提高受试动物NK细胞的活性；双歧杆菌V9可提高白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-α(IFN-α)细胞因子的转录，也可以提高NF-κB的表达，对TLR-2和sIgA也有上调作用，有利于机体抵抗肠道病原微生物的感染。因此，本专利技术的双歧杆菌V9对提高机体免疫力有积极作用。双歧杆菌V9进入肠道后可被派伊尔氏结中的M细胞摄取，呈递给其内部的抗原提呈细胞(APC)。双歧杆菌V9可以诱导淋巴细胞分泌IL-4、IL-5、IL-10、IL-13和转化生长因子-β(TGF-β)等细胞因子，促进辅助型T细胞2(Th2)分化，活化B淋巴细胞产生免疫球蛋白E(IgE)，主要介导体液免疫应答，在机体抗寄生虫感染中发挥重作用。最适剂量双歧杆菌调节作用正好相反，可以抑制Th2分化，转向Th1分化，促使B淋巴细胞产生sIgA，抑制IgE表达。转化后的Th1细胞分泌IL-2、IL-8、IFN-α、IFN-γ、IFN-β、TNF-α、IL-12和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等细胞因子，可以激活细胞毒性T淋巴细胞，增强吞噬细胞活性，主要介导细胞免疫应答，在抑制肿瘤和病毒的过程中发挥重要作用。高剂量双歧杆菌可产生克隆无能，使T淋巴产生不应答现象。本专利技术的双歧杆菌可以通过两个方面提高机体的免疫功能：首先可以提高固有免疫应答，活化巨噬细胞，通过产生活性氧和溶酶体来处理病原菌；双歧杆菌还可以激活获得性免疫系统，活化B细胞，分泌一系列抗体，参与体液免疫反应。在细胞免疫方面，双歧杆菌可以增强巨噬细胞的吞噬功能，也能活化T细胞和NK细胞活性来刺激机体产生免疫应答。在体液免疫方面，双歧杆菌可以增强B淋巴细胞分泌抗体的能力。本专利技术双歧杆菌V9具有活菌数高，有大量实验数据支持和临床试验证明，已做毒理性实验和安全性评价。且较低量的菌株即可发挥免疫增强功能。本专利技术的双歧杆菌V9较市售益生菌性价比高，更实惠，且提高免疫力效果明显。附图说明图1为本专利技术的双歧杆菌V9的制备示意图；图2为本专利技术的双歧杆菌V9对IL-10的影响；图3为本专利技术的双歧杆菌V9对IFN-α的影响；图4为本专利技术的双歧杆菌V9对TLR-2的影响；图5为本专利技术的双歧杆菌V9对NF-κB的影响；图6为本专利技术的双歧杆菌V9对sIgA的影响。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步详细的说明。图1示意性地显示了根据本专利技术的一种实施方式的双歧杆菌V9的制备示意图。如图所示，冻干菌种经活化三代后，以6％(v/v)接种于优化培养基中进行发酵，然后离心收集得到菌泥。配制灭菌的保护剂(脱脂乳粉)，菌泥与保护剂按比例(W/V)混合均匀，得到上机液，经真空冷冻干燥得到冻干的粗粉，粗粉粉碎过筛得到冻干的双歧杆菌V9细粉，双歧杆菌V9细分经检验后，进行包装，入库备用。本专利技术的双歧杆菌V9制备方法中，优化的特定培养基为，按重量计，乳糖14份、牛肉膏7份、酪蛋白胨14、大豆蛋白胨6、酵母粉6、磷酸氢二钠2、磷酸二氢钾2、硫酸镁2、L-半胱氨酸盐酸盐1。实验样品：本专利技术的双歧杆V9，活菌数可达5.8*1011/g。实验动物：选用SPF级昆明种雌性小白鼠48只，6～8周龄(体重18～22g)。剂量与分组：按人体每日推荐量(以儿童体重30kg计，推荐量为0.05g/kg·BW)的5倍(0.25g/kg·BW)、10倍(0.5g/kg·BW)和30倍(1.5g/kg·BW)分成对照组和低、中、高剂量组共四组，每组12只。实施例1灌喂方法：分别称取本专利技术的双歧杆菌V9样品0.50、1.00、3.00g，用纯净水配制成20mL的样液，分别供低、中、高三个剂量组动物灌胃使用。动物在实验室条件下适应三天后，以下每个实验均为随机将48只鼠分为四组，每组12只，每日灌胃给予受试物，给样量根据每周体重增减调整，连续灌胃四周。对照组灌服无菌纯净水。实施例2小鼠迟发型变态反应试验(足跖厚度增加法)实验结束前的第4天免疫动物，用2％(v/v)绵羊红细胞腹腔注射0.2mL致敏动物，5天后测定左后足跖部厚度，接着于该处皮下注射20％(v/v)绵羊红细胞(20μL/每鼠)，注射后24小时测定左后足跖部厚度三次，得平均值。实施例3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)淋巴细胞增殖反应：将淋巴细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔75μLConA液(相当于7本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株调节免疫力的双歧杆菌V9，其特征在于，所述双歧杆菌V9的活菌数不低于5.8*10

【技术特征摘要】
1.一株调节免疫力的双歧杆菌V9，其特征在于，所述双歧杆菌V9的活菌数不低于5.8*1011个/g，所述双歧杆菌V9已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCCNo.4473。


2.一株调节免疫力的双歧杆菌V9制剂，包括权利要求1所述的双歧杆菌V9。


3.根据权利要求1所述的双歧杆菌V9在增加机体对IL-10的表达量的产品中的应用。


4.根据权利要求1所述的双歧杆菌V9在增加机体对IFN-α的表达量的产品中的应用。


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【专利技术属性】
技术研发人员：闫继彪，李翠平，邓翔，
申请(专利权)人：内蒙古普泽生物制品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15