一种山参不定根快速繁殖的方法技术

本发明专利技术提供了一种山参不定根快速繁殖的方法，属于植物组织培养技术领域，所述方法以野山参根为外植体，外植体通过诱导培养得到愈伤组织，愈伤组织通过生根培养得到不定根，不定根经过特定筛选培养基的筛选，得到高产不定根系，在气升式生物反应器内将高产不定根系于增殖培养基中增殖培养40～50天后，得到可供收获的山参不定根。利用本发明专利技术的方法收获的山参不定根的干物重高达17.31g/L，生物量是接种时的20～30倍。本发明专利技术的方法能够显著提高不定根的数量和生物量，繁殖周期短，得到的山参不定根生长均一、遗传性稳定、无污染、具有栽培参同样营养成分和营养价值。样营养成分和营养价值。

【技术实现步骤摘要】
一种山参不定根快速繁殖的方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，尤其涉及一种山参不定根快速繁殖的方法。

技术介绍

[0002]野山参为野生在山中人参，是一种名贵中药材，价值不菲。人参中，因野山参自然生长年代久远，故认为它品质最好、药效最佳。作为中国传统名贵中药材之一的人参，其应用已经扩展到医药、保健品、美容护肤品等多个领域。野山参由于资源极度稀缺，因此出现其“无价无市”现象。
[0003]而当前占据市场的栽培人参由于参业林地资源匮乏、人参连作障碍、人工栽培又无法达到质量标准不能经济、合理、可持续地解决人参的资源问题。人参组织培养技术已经显示出了巨大的发展潜力，能够有效解决人参的资源问题。目前，通过生物反应器大量培养人参不定根可以得到稳定的人参皂苷来源。而不定根离体培养的工艺流程包括不定根诱导、固体增殖扩繁和悬浮级联放大培养等技术环节，其中高效诱导是实现不定根规模化生产的前提。
[0004]因此，本专利技术利用野山参根为外植体，通过培养基内大量元素、微量元素、有机化合物的优化和气升式生物反应器内培养，显著提高诱导获得的不定根数量和生物量，得到的山参不定根生长均一、遗传性稳定、无污染、具有栽培参同样营养成分和营养价值，同时也为进一步调控次生代谢物和扩大生产提供理论依据。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种山参不定根快速繁殖的方法，该方法不仅繁殖效率高，且利用该方法得到的山参不定根具有与栽培参相同的营养价值。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种山参不定根快速繁殖的方法，包括以下步骤：
[0008]1)以野山参根为外植体，将外植体接入诱导培养基，进行诱导培养，得到愈伤组织；
[0009]2)将所述愈伤组织接入生根培养基，进行6～8周生根培养，得到不定根；
[0010]3)将所述不定根接入筛选培养基，进行继代培养，取不定根诱导数目达到36～46根的不定根作为不定根系；
[0011]4)将所述不定根系接入增殖培养基，进行40～50d增殖培养，得到可供收获的山参不定根；所述增殖培养于气升式生物反应器中进行；
[0012]步骤3)中所述筛选培养基以S1培养基为基础培养基，还包括2～2.5g/L的gelrite；
[0013]所述S1培养基包括以下质量浓度的组分：NH4Cl 401.175mg/L、KNO
3 3791.25mg/L、MgSO4·
7H2O 277.5mg/L、KH2PO
4 127.5mg/L、CaCl2·
2H2O 660mg/L、FeNa
‑
EDTA 37.3mg/L、MnSO4·
4H2O 22.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·
5H2O 0.05mg/L、CoCl2·
6H2O 0.025mg/L、
Na2MoO4·
2H2O 0.25mg/L、ZnSO4·
7H2O 8.6mg/L、H3BO
3 6.2mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.375mg/L、维生素B6 0.375mg/L、维生素B1 0.075mg/L、甘氨酸1.5mg/L、IBA 5mg/L和白糖50000mg/L。
[0014]优选的，步骤1)中所述野山参根经消毒处理；所述消毒采用以下方法进行：将野山参根于乙醇水溶液中浸泡25～35s后，于次氯酸钠水溶液中浸泡35～45min进行表面消毒；
[0015]所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70％～75％；
[0016]所述次氯酸钠水溶液中次氯酸钠的质量浓度为4％。
[0017]优选的，步骤1)中所述诱导培养基以MS培养基为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：白糖28～32g/L、2，4 D 1～2mg/L和gelrite 2～2.5g/L；所述诱导培养基的pH值为5.6～6.0。
[0018]优选的，步骤1)中所述诱导培养的时间为6～8周；所述诱导培养的温度为21～23℃。
[0019]优选的，步骤2)中所述生根培养基以MS培养基为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：白糖28～32g/L、IBA3～4mg/L和gelrite2～2.5g/L；所述生根培养基的pH值为5.6～6.0。
[0020]优选的，步骤4)中所述增殖培养基包括S1培养基。
[0021]优选的，步骤4)中所述不定根系接入的密度为5～7g/L。
[0022]优选的，步骤4)中所述气升式生物反应器中空气注入量为0.05vvm。
[0023]本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种山参不定根快速繁殖的方法，该方法以野山参根为外植体，外植体通过诱导培养得到愈伤组织，愈伤组织通过生根培养得到不定根，不定根经过特定筛选培养基的筛选，得到高产不定根系(不定根数达到36～46根/个外植体，且诱导的不定根均匀对称、乳白色)，在气升式生物反应器内将高产不定根系于增殖培养基中增殖培养40～50天后，得到可供收获的山参不定根。利用本专利技术的方法收获的山参不定根的干物重高达17.31g/L，生物量是接种时的20～30倍。本专利技术的方法能够显著提高诱导获得的不定根数量和生物量，得到的山参不定根生长均一、遗传性稳定、无污染、具有栽培参同样营养成分和营养价值。并且，本专利技术的方法工艺简单、成本低、重复性好、周期短，不受外部环境影响，为进一步调控次生代谢物和扩大生产提供理论依据。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供了一种山参不定根快速繁殖的方法，包括以下步骤：
[0025]1)以野山参根为外植体，将外植体接入诱导培养基，进行诱导培养，得到愈伤组织；
[0026]2)将所述愈伤组织接入生根培养基，进行6～8周生根培养，得到不定根；
[0027]3)将所述不定根接入筛选培养基，进行继代培养，取不定根诱导数目达到36～46根的不定根作为不定根系；
[0028]4)将所述不定根系接入增殖培养基，进行40～50d增殖培养，得到可供收获的山参不定根；所述增殖培养于气升式生物反应器中进行；
[0029]步骤3)中所述筛选培养基以S1培养基为基础培养基，还包括2～2.5g/L的gelrite；
[0030]所述S1培养基包括以下质量浓度的组分：NH4Cl 401.175mg/L、KNO
3 3791.25mg/L、MgSO4·
7H2O 277.5mg/L、KH2PO
4 127.5mg/L、CaCl2·
2H2O 660mg/L、FeNa
‑
EDTA 37.3mg/L、MnSO4·
4H2O 22.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·
5H2O 0.05mg/L、CoCl2·
6H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·
2H2O 0.25mg/L、ZnSO4·
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种山参不定根快速繁殖的方法，包括以下步骤：1)以野山参根为外植体，将外植体接入诱导培养基，进行诱导培养，得到愈伤组织；2)将所述愈伤组织接入生根培养基，进行6～8周生根培养，得到不定根；3)将所述不定根接入筛选培养基，进行继代培养，取不定根诱导数目达到36～46根的不定根作为不定根系；4)将所述不定根系接入增殖培养基，进行40～50d增殖培养，得到可供收获的山参不定根；所述增殖培养于气升式生物反应器中进行；步骤3)中所述筛选培养基以S1培养基为基础培养基，还包括2～2.5g/L的gelrite；所述S1培养基包括以下质量浓度的组分：NH4Cl401.175mg/L、KNO33791.25mg/L、MgSO4·
7H2O 277.5mg/L、KH2PO
4 127.5mg/L、CaCl2·
2H2O 660mg/L、FeNa
‑
EDTA 37.3mg/L、MnSO4·
4H2O 22.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·
5H2O 0.05mg/L、CoCl2·
6H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·
2H2O 0.25mg/L、ZnSO4·
7H2O 8.6mg/L、H3BO
3 6.2mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.375mg/L、维生素B60.375mg/L、维生素B1...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔锡花，宋杭霖，金荣德，闫海洋，张基德，黄初女，王光达，
申请(专利权)人：延边朝鲜族自治州农业科学院延边特产研究所，
类型：发明
国别省市：