本发明专利技术提供了舒芬太尼个体化用药基因的指导方法及试剂盒，具体的本发明专利技术考虑不同患者用药剂量的差异性，筛选出与舒芬太尼个体化用药相关基因的SNP位点的组合，利用核酸质谱仪对舒芬太尼相关的遗传学标识进行广泛(高通量检测位点、高通量检测样本)筛查和检验。通过本发明专利技术的方法检出成功率高、技术重现性好、性价比高，可实现单个小样本多基因的检测，满足小样本最大化使用；本发明专利技术的方法具有高准确性、高灵敏性的技术优势，检测结果稳定，提高了检测阳性率。测阳性率。
【技术实现步骤摘要】
舒芬太尼个体化用药基因的指导方法及试剂盒
[0001]本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种用于舒芬太尼个体化用药基因的指导方法及试剂盒。
技术介绍
[0002]单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNPs)是一种遗传标记，是指基因组水平上由于单核苷酸的变异，而引起的DNA序列的多态性。在人群中的发生频率大于1％，包括单碱基的转换、颠倒以及单碱基的插入或缺失等形式表现，是一种新的遗传标志，可以为疾病的预测、诊断、治疗以及新型药物的研制提供可靠的有效的科学根据。
[0003]SNP发生在编码区，能够影响蛋白功能，从而影响人体健康或药物代谢，主要表现在疾病易感性方面的个体差异、同一药物治疗剂量的个体差异、同一药物的不良反应的个体差异。药物遗传学或药物基因组学方法对于解决药物剂量的个体差异非常重要，尤其是在精密医学时代。
[0004]舒芬太尼是阿片类镇痛药的一种。阿片类药物有很强的镇痛作用，是构成全麻的催眠、镇痛、肌肉松弛三大要素中，实现镇痛的支柱药物，是麻醉和疼痛治疗中至今无可替代的良药。但是舒芬太尼如果滥用也会让人上瘾，是“实验室毒品”的重要成分。临床发现不同患者对舒芬太尼的敏感性不同，患者的需求量存在差异，因此有必要专利技术一种方法可有效的预测患者舒芬太尼的使用量，争取在达到镇痛、舒缓的目的同时使用最小剂量，减少该药物的不良影响。细胞色素P450 CYP3A41G多态性是研究最多的与舒芬太尼个体化用药量效相关的SNP位点。因此亟需综合现有研究结果，建立一种高灵敏，经济，简单的分子技术筛查方法，一次性评估患者使用舒芬太尼的用药风险及有效性。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一种舒芬太尼个体化用药基因的指导方法及试剂盒。
[0006]本专利技术的第一方面，提供了一种舒芬太尼个体化用药基因的指导试剂盒，所述试剂盒包括PCR扩增引物对组，所述PCR扩增引物对组包括特异性扩增选自下组的SNP位点的引物对：rs696、rs2242480和rs1799971。
[0007]在另一优选例中，所述试剂盒基于多重PCR飞行时间质谱检测舒芬太尼个体化用药基因SNP基因突变位点。
[0008]在另一优选例中，所述试剂盒还包括单碱基延伸引物组。
[0009]在另一优选例中，所述PCR扩增引物对组中，特异性扩增rs696的引物对如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2所示。
[0010]在另一优选例中，所述PCR扩增引物对组中，特异性扩增rs2242480的引物对如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4所示。
[0011]在另一优选例中，所述PCR扩增引物对组中，特异性扩增rs1799971的引物对如SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.6所示。
[0012]在另一优选例中，所述单碱基延伸引物组中，针对rs696的延伸引物如SEQ ID NO.7所示。
[0013]在另一优选例中，所述单碱基延伸引物组中，针对rs2242480的延伸引物如SEQ ID NO.8所示。
[0014]在另一优选例中，所述单碱基延伸引物组中，针对rs1799971的延伸引物如SEQ ID NO.9所示。
[0015]在另一优选例中，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内含有所述PCR扩增引物对组。
[0016]在另一优选例中，所述试剂盒包括第二容器，所述第二容器内含有所述单碱基延伸引物组。
[0017]在另一优选例中，所述试剂盒包括第三容器，所述第三容器内含有PCR预混液，所述PCR预混液主要包括热启动Taq酶、dNTPs、MgCl2、PCR缓冲液。
[0018]在另一优选例中，所述试剂盒包括第四容器，所述第四容器内含有虾碱性磷酸酶(SAP Enzyme)。
[0019]在另一优选例中，所述试剂盒包括第五容器，所述第五容器内含有SAP缓冲液。
[0020]在另一优选例中，所述试剂盒包括第六容器，所述第六容器内含有延伸酶(iPLEX Enzyme)。
[0021]在另一优选例中，所述试剂盒包括第七容器，所述第七容器内含ddNTPs。
[0022]在另一优选例中，所述试剂盒包括第八容器，所述第八容器内含延伸反应缓冲液。
[0023]在另一优选例中，所述试剂盒还包括纯水。
[0024]本专利技术的第二方面，提供了一种基于多重PCR飞行时间质谱检测舒芬太尼个体化用药基因SNP基因突变位点的方法，包括以下步骤：
[0025](1)以待测样品外周血基因组DNA为模板，进行PCR扩增，得扩增产物；
[0026](2)应用虾碱式磷酸酶对步骤(1)的扩增产物进行SAP处理；
[0027](3)使用延伸引物对步骤(2)纯化后的产物进行单碱基延伸反应，得延伸产物；
[0028](4)脱盐树脂纯化延伸产物；
[0029](5)质谱平台检测分析，判断是否存在基因变异。
[0030]在另一优选例中，所述步骤(1)中，PCR扩增过程中，特异性扩增选自下组的SNP位点：rs696、rs2242480、rs1799971。
[0031]在另一优选例中，所述步骤(1)中，PCR扩增过程中，使用所述扩增引物对组进行PCR扩增。
[0032]在另一优选例中，所述步骤(3)中，使用所述单碱基延伸引物组进行单碱基延伸反应。
[0033]本专利技术的第三方面，提供了PCR扩增引物对组的用途，用于制备检测试剂盒，所述检测试剂盒用于检测舒芬太尼个体化用药基因SNP基因突变位点；
[0034]所述引物对组包括序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.6所示的引物。
[0035]本专利技术的第四方面，提供了单碱基延伸引物组的用途，用于制备检测试剂盒，所述检测试剂盒用于检测舒芬太尼个体化用药基因SNP基因突变位点；
[0036]所述单碱基延伸引物组包括序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.9所示的延伸引物。
[0037]应理解，在本专利技术范围内，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
[0038]本专利技术提供了一种舒芬太尼个体化用药基因的指导方法及试剂盒，本专利技术通过对比不同患者用药剂量的差异性，筛选出与舒芬太尼用药剂量及安全性相关基因的3个SNP位点，进而能够利用核酸质谱仪对舒芬太尼相关的遗传学标识进行广泛(高通量检测位点、高通量检测样本)筛查和检验。通过多轮筛选，获得了能够对该3个SNP位点进行高效多重扩增，且适合MassARRAY核酸质谱检测的多重PCR扩增引物对，并筛选获得了适合的延伸引物，因而实现了对该3个SNP位点的高准确性、高灵敏性检测，检测结果稳定，提高了检测阳性率。
[0039]本申请的测定方法基于多重PCR技术和MassARRAY核本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种舒芬太尼个体化用药基因的指导试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR扩增引物对组，所述PCR扩增引物对组包括特异性扩增选自下组的SNP位点的引物对：rs696、rs2242480和rs1799971。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括单碱基延伸引物组。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增引物对组中：特异性扩增rs696的引物对如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2所示；特异性扩增rs2242480的引物对如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4所示；和/或特异性扩增rs1799971的引物对如SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.6所示。4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述单碱基延伸引物组中：针对rs696的延伸引物如SEQ ID NO.7所示；针对rs2242480的延伸引物如SEQ ID NO.8所示；和/或针对rs1799971的延伸引物如SEQ ID NO.9所示。5.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内含有所述PCR扩增引物对组；和/或所述试剂盒包括第二容器，所述第二容器内含有所述单碱基延伸引物组。6.一种基于多重PCR飞行时间质谱检测舒芬太尼个体化用药基因...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈涛，张静，严喜平，林金飞，
申请(专利权)人：广东南芯医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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