一种骨质疏松诊断标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种骨质疏松诊断标志物及其应用。所述骨质疏松诊断标志物为长链非编码RNA SCARNA10，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述长链非编码RNA SCARNA10在骨质疏松患者骨组织和正常人骨组织中均有表达，但是在骨质疏松患者骨质中的表达水平显著低于正常人，且表达差异具有统计学意义，能够作为骨质疏松诊断标志物。含有扩增长链非编码RNA SCARNA10的引物对的试剂盒，通过检测lncRNA SCARNA10的表达量，能够高灵敏度、高特异性地对患者进行诊断和预后追踪，有利于提高骨质疏松的诊断率和生存率，具有较高的临床应用价值。具有较高的临床应用价值。具有较高的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种骨质疏松诊断标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，尤其涉及一种骨质疏松诊断标志物及其应用。

技术介绍

[0002]骨质疏松症是一种以骨量减少和骨微结构破坏为特征，导致骨脆性增加和易发生骨折的一种复杂的、多因素的全身性慢性骨骼疾病。随着老龄化现象的加剧，骨质疏松症的发病人数逐年增加，这给患者带来了全身骨痛、骨折、身高变矮等痛苦和危害，同时也给社会和家庭带来沉重的经济和生活负担。
[0003]骨质疏松症早期发病隐匿，临床表现不典型，要依赖影像学检查和辅助血清/尿液生物化学指标检查才能发现，并且存在一定局限性，进而导致骨质疏松症初期诊断率并不高。如果不加以重视，反复骨折会导致致残、致死的严重后果。因此，早期发现骨质疏松的高危人群，并进行干预处理、防止骨质疏松症发生，从而预防骨折，是提高老年人群健康水平及生活质量，降低老年人死亡率的重要措施之一。
[0004]人类的基因中仅有2％的基因编码蛋白质，大部分基因转录形成非编码的RNA(ncRNA)。其中，长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸、缺少特异完整开放阅读框、无蛋白质编码功能的RNA。lncRNA参与了基因组印记、转录控制、转录后调控、蛋白功能调节等信号转导过程中的重要环节。
[0005]研究表明，lncRNA与人类疾病的发生发展和防治有密切关联，例如免疫系统疾病、心血管疾病和肿瘤等。lncRNA参与了成骨细胞的分化，在骨质疏松症中扮演着重要角色。然而，目前对骨质疏松症lncRNA的表达谱特征及生物学功能的研究却鲜有报道。
[0006]因此，利用高通量测序技术从lncRNA层面对骨质疏松症进行深入剖析，为临床上骨质疏松的早期诊断提供特异性标志物，将为疾病的分子诊断提供强有力的科研支持。对于本领域而言，寻找高灵敏度和高特异性的骨质疏松诊断分子标记物对提高骨质疏松的诊断率和生存率，有重大的临床意义。

技术实现思路

[0007]鉴于现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种骨质疏松诊断标志物，所述骨质疏松诊断标志物为开发无创预测和诊断方法提供基础科学依据，也为寻找骨质疏松的治疗靶点提供了新的思路。
[0008]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供一种骨质疏松诊断标志物，所述骨质疏松诊断标志物为长链非编码RNA SCARNA10，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]本专利技术中，lncRNA SCARNA10用于作为骨质疏松诊断标志物的用途，其核酸序列(SEQ ID NO.1)为：
[0011]GGACCTTTGGCCTGTTAAAGGTCTGTAATCTTGGTGGGCGATACAGAGTTATGTGTGTTCACTGTAAGGGCAGACCAACAAGAACTTTTTCCTACTTTTGAGCTACCTCTTTTTAATAGGGGTGATTCTTCCAGTTGCTGGAGA
GAAATTGTGGTAACTGGAGTGAGAGAGTAGGAACAGGGCATGTTCAGGGTATCAGGGCCAAGGGTCCTAAAGGACTTAGCTTGTGTTATGGCCACTGAGAGATG。
[0012]在骨质疏松症中，某些特定的lncRNA的表达水平会发生改变，这种表达水平的变化能够作为骨质疏松筛查的标志物，长链非编码RNA调控机制是骨质疏松发病机理研究中的一个新领域。
[0013]本专利技术中，lncRNA SCARNA10可作为一种骨质疏松诊断标志物，其表达量与成骨相关基因的表达量密切相关。因此，将其作为诊断标志物，能够准确的预测或者诊断骨质疏松症。同时，所述lncRNA SCARNA10在人和鼠中具有同源性，对进一步开发研究骨质疏松治疗、诊断和预后等试剂和方法提供了基础。
[0014]本专利技术通过高通量测序，对绝经后骨质疏松症患者中成骨细胞形成和破骨细胞吸收稳态中lncRNA的调控机制进行研究，比较骨质疏松症患者和年龄性别相当的正常人群中差异表达的lncRNA，进一步明确显著差异表达的lncRNA在骨质疏松形成过程中的调控机制，靶向基因，分析lncRNA调控的靶基因的生物学功能及其重要性，深入探索骨质疏松症的致病机制，为开发无创预测、诊断型生物标志物及新的治疗靶点提供基础科学依据。
[0015]第二方面，本专利技术提供一种骨质疏松诊断试剂盒，所述骨质疏松诊断试剂盒中包含扩增长链非编码RNA SCARNA10的引物对。
[0016]作为本专利技术优选的技术方案，所述引物对的上游引物包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
[0017]优选地，所述引物对的下游引物包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。
[0018]其中，SEQ ID NO.2为：GGTCTGTAATCTTGGTGGGCG
[0019]SEQ ID NO.3为：AGGACCCTTGGCCCTGATAC。
[0020]作为本专利技术优选的技术方案，所述骨质疏松诊断试剂盒中还包括荧光探针。
[0021]优选地，所述骨质疏松诊断试剂盒中还包括阳性对照和/或阴性对照。
[0022]第三方面，本专利技术提供一种表达载体，所述表达载体上含有如第一方面所述的骨质疏松诊断标志物。
[0023]第四方面，本专利技术提供一种重组细胞，所述重组细胞中含有至少一个如第三方面所述的表达载体。
[0024]优选地，所述重组细胞包括MC3T3
‑
E1细胞、人源BMSC细胞(人骨髓间充质干细胞)或大鼠BMSC细胞中的任意一种。
[0025]第五方面，本专利技术提供一种成骨相关基因表达促进剂，所述成骨相关基因表达促进剂为长链非编码RNA SCARNA10，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0026]作为本专利技术优选的技术方案，所述成骨相关基因包括Runx2、OCN、OPN、COL
‑
1或ALP中的任意一种或至少两种的组合。
[0027]第六方面，本专利技术提供一种wnt通路调节剂，所述wnt通路调节剂为长链非编码RNA SCARNA10，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0028]通过在h
‑
BMSC和MC3T3
‑
E1两种细胞过表达SCARNA10后的qPCR检测成骨相关基因表达发现，过表达SCARNA10后能促进成骨相关基因表达并且这种促进作用可能是通过调控wnt5a
‑
CK1D进而激活wnt信号通路实现。其具体作用机制需要进行RNA
‑
RIP验证SCARNA具体结合的靶分子。
[0029]综上，可推测出SCARNA10可能通过调控wnt5a进而促进成骨相关基因的表达从而促进成骨。
[0030]第七方面，本专利技术还提供如第一方面所述的骨质疏松诊断标志物在制备诊断骨质疏松的试剂盒或治疗骨质疏松的药物中的应用。
[0031]本专利技术所述的数值范围不仅包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种骨质疏松诊断标志物，其特征在于，所述骨质疏松诊断标志物为长链非编码RNA SCARNA10，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种骨质疏松诊断试剂盒，其特征在于，所述骨质疏松诊断试剂盒中包含扩增长链非编码RNA SCARNA10的引物对。3.根据权利要求2所述的骨质疏松诊断试剂盒，其特征在于，所述引物对的上游引物包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；优选地，所述引物对的下游引物包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。4.根据权利要求2或3所述的骨质疏松诊断试剂盒，其特征在于，所述骨质疏松诊断试剂盒中还包括荧光探针；优选地，所述骨质疏松诊断试剂盒中还包括阳性对照和/或阴性对照。5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体上含有如权利要求1所述的骨质疏松诊断标志物。6.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞中...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭松林，何同忠，谭宝玉，陈高扬，王尚，贺小琴，
申请(专利权)人：深圳市人民医院，
类型：发明
国别省市：