一种巨大芽孢杆菌菌株以及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种巨大芽孢杆菌菌株以及其应用，本发明专利技术的巨大芽孢杆菌菌株是利用现有的生产菌种VC2

【技术实现步骤摘要】
一种巨大芽孢杆菌菌株以及其应用


[0001]本专利技术涉及抗生素发酵
，具体地来说是涉及一种巨大芽孢杆菌菌株以及其应用。

技术介绍

[0002]维生素C（VC）是人体必需的一种维生素，在抗氧化和维持新陈代谢平衡等方面具有广泛的生理作用。在医药工业、食品工业、饲料行业以及化妆品行业上均有重要用途。其应用范围广阔，市场规模也巨大。
[0003]目前，全球90%以上的VC生产，均利用我国专利技术的“二步发酵法”，即第一步是单菌发酵，将D
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山梨醇转化成L
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山梨糖；第二步是混合菌发酵，通过普通产酮古洛糖酸菌（俗称小菌）和巨大芽孢杆菌（俗称大菌）的共同作用将L
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山梨糖转化成2
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酮基
ꢀ‑
L
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古龙酸（2
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KGA）。2
‑
酮基
‑
L
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古龙酸再经过提取和转化生成维生素C。在其混合菌系中：普通产酮古洛糖酸菌（俗称小菌）是产2
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KLG的关键菌株，具有氧化底物L
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山梨糖为2
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KLG的酶系统。但该菌独立生长及产2
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KLG能力非常弱，需要巨大芽孢杆菌（俗称大菌）提供某些效应物促进其生长及产2
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KLG。大菌本身能独立生长，却不能转化L
‑
山梨糖为2
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KLG。在实际生产中，大菌极易被噬菌体污染，导致产2/>‑
KLG水平下降甚至发酵失败，又进一步加大了工艺控制的难度。因此，提供一种防止噬菌体侵染的抗性菌株，对于保障维生素C发酵生产的安全性和稳定性具有非常重要的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的就在于提供一种防止噬菌体侵染，保障维生素C发酵生产的安全性和稳定性的巨大芽孢杆菌菌株。
[0005]本专利技术的另一目的是提供上述巨大芽孢杆菌菌株的应用。
[0006]为实现上述专利技术目的所采取的技术方案为：一种巨大芽孢杆菌菌株，其特征在于：所述菌株为VC2
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145 巨大芽孢杆菌，于2020年8月6日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M2020399。
[0007]如上述所述的巨大芽孢杆菌菌株在维生素C二步发酵法中的应用。
[0008]本专利技术的巨大芽孢杆菌菌株是利用现有的生产菌种VC2
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47经过诱变分离筛选，结合噬菌体抗性选育，最终筛选得到性状稳定的抗性菌株VC2
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145 巨大芽孢杆菌，通过液态发酵生产2
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KLG，产量稳定。
[0009]使用FMIC
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QO01
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001
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2015微生物学检测，细菌多相鉴定检测方法对该菌株进行菌种鉴定。鉴定结果如下：1、生物学特性：使用TSA培养基，在固体培养基上30℃培养24h,菌落形态凸起呈圆形，完整，边缘整齐。菌落表面湿润光滑呈黄色油状，不透明。显微镜观察菌体成对或呈链状短杆排列，可形成短链或丝状体，革兰氏染色为革兰阳性菌。
[0010]2、生理生化特征：通过VITEK BCL鉴定卡对其代谢利用的碳源、氮源的种类的检
测，可确定其有无特殊营养需要，存在的酶的种类等代谢特性。
[0011]符号说明：“+”阳性：
“‑”
阴性。
[0012]使用本专利技术的巨大芽孢杆菌菌株抗性菌株具有抗性，防止专性微生物（噬菌体）的系统污染和爆发，可切断寄主菌大菌的传染途径，解决后期菌体自容，活力降低，产酸量下降的现状，可解决生产发酵后期的异常代谢，有效的保障维生素C生产的安全性和稳定性，完全解决了现有技术中噬菌体侵染VC产生菌的发酵问题。
[0013]本专利技术菌株的保藏信息如下：分类命名：巨大芽孢杆菌VC2
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145(大菌)(Bacillus megaterium VC2
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145(大菌))，保藏编号：CCTCC NO：M2020399，保藏时间：2020年8月6日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏单位地址：中国武汉武汉大学。保藏证明：巨大芽孢杆菌VC2
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145Bacillus megaterium，于2020年8 月6日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M2020399。
具体实施方式
[0014]下面用实例予以说明本专利技术，应该理解的是，实例是用于说明本专利技术而不是对本专利技术的限制。本专利技术的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
[0015]一、本专利技术VC2
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145 巨大芽孢杆菌的筛选方法。
[0016]1分离平板的制备：分离培养基：山梨糖1.0%，酵母膏0.5%，玉米浆0.5%，尿素0.3%，硫酸镁0.03%，磷酸氢二钾0.05%，碳酸钙0.5%，琼脂2.0%，pH7.0。按照以上配比配制培养基，灭菌后冷却制备分离平板备用。
[0017]2大菌种液培养：摇瓶种子培养基：山梨糖2.5%，葡萄糖0.2%，玉米浆0.5%，尿素0.1%，碳酸钙0.2%。
[0018]挑选生产使用的大菌菌株VC2
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47接入20ml上述摇瓶种子培养基内，30℃,200r/n,22hr结束培养,镜检：有大菌的实体及空孢存在，确定为纯大菌种液。
[0019]3诱变分离操作：将制备的新鲜大菌种液，依次稀释至10
‑3，吸取原液0.2ml到￠100mm的空白分离平板上涂布均匀，置操净台上用自然风风干约2分钟，待分离平板内液体干燥后移至离子束生物工程装置（离子束注入设备）操作室处理。时间分别为15s，30s，60s，90s，120s，180s,将处理后的样品加入1.0ml的无菌水，再用无菌的刮棒洗脱，最后将洗脱后的溶液取0.1ml/0.2ml/0.3ml加至分离培养基平板上涂布均匀，即为诱变分离平板。同时分别设立真空对照，设立风干对照及正常对照进行分离培养，同期放置在温度控制在29
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31℃，湿度35
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55%的恒温室内培养。通过对诱变分离平板、对照分离平板的单菌落进行计数，统计不同诱变剂量的死亡率，变异率，突变幅度等参数来评价诱变效果。
[0020]4离子束注入设备的特点：该N离子束注入装置本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种巨大芽孢杆菌菌株，其特征在于：所述菌株为VC2
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145 巨大芽孢杆菌，...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭惠芬，于新燕，马学霞，周玉琼，张志，
申请(专利权)人：宁夏启元药业有限公司，
类型：发明
国别省市：