一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法技术

本发明专利技术涉及一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法，属于中药材分析鉴别技术领域。本发明专利技术提供了一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法，主要将待鉴定的桃儿七根茎配制的供试品溶液与鬼臼毒素配制成对照品溶液进行薄层色谱层析法，采用体积比为3:2～6:5的石油醚和丙酮为展开剂、在波长为254nm的紫外光灯下检视即可得到鉴定结果，具有操作安全、方便快捷的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法
本专利技术属于中药材分析鉴别
，具体涉及一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法。
技术介绍
桃儿七(Sinopodophyllumhexandrum(Royle)Ying)为小檗科桃儿七属(Sinopodophyllum)多年生草本植物，主要分布在我国陕西、西藏、云南、四川、甘肃等地，为Ⅲ级保护物种。2015版《中国药典》收载的小叶莲，为桃儿七的干燥果实，是一种常用藏药。桃儿七根茎在民间有悠久的用药历史，《神农本草经》中以“鬼臼”之名记载，主要用于跌打损伤、风湿筋骨痛、蛇咬伤等。现代药理研究证明，桃儿七中的活性成分主要为木脂素类化合物，具有高效抗肿瘤活性，其中鬼白毒素巳作为合成抗癌药物VP-16,VM-26,GP7,NK611等药物的前体物质，同时还是世界卫生组织推荐的治疗皮肤癌和性病尖锐湿疣的首选药物。桃儿七的地下部分目前仍作为鬼白毒素的提取原料。薄层色谱法具有操作方便、快速、准确的特征，是中药材鉴别的首选方法。2015版《中国药典》收载了小叶莲(桃儿七果实)的薄层色谱鉴别方法(取样品溶液和鬼臼毒素对照品点样于硅胶G板上，将体积比为6.5:2.5:0.8的环己烷、水饱和正丁醇和甲酸组成的上层溶液为展开剂、以1％的香草醛硫酸溶液显色，加热至斑点显色清晰)，陈燕等报道了桃儿七果实中鬼臼毒素的鉴别(取样品溶液和鬼臼毒素对照品溶液于GF254薄层板上，以积比为5:4:0.5的环己烷、乙酸乙酯和甲酸组成的混合溶液为展开剂，在波长为254nm的紫外光灯下检视)。r>然而现有技术中对于桃儿七根茎中鬼臼毒素的薄层色谱鉴别方面的研究较少，仅有张丽等进行了研究报道。现有对桃儿七根茎中鬼臼毒素的薄层色谱研究中，采用了积比为15:1的氯仿和甲醇组成的下层液作为展开剂、以10％的硫酸乙醇溶液为显色剂、在105℃的温度下加热显色。该方法中，使用的展开剂中虽然氯仿、甲醇为无基因毒性，但因为有动物致癌性的第二类溶剂，并且展开剂需静置后待分层取下层液，操作比较麻烦；另外该显色剂中含有的硫酸具有较强的腐蚀性，再加上10％的硫酸乙醇使用时具有较强的刺激性；同时显色后需要将溶液加热至105℃的温度，显色方法也较麻烦，且有安全隐患。因此针对现有的对桃儿七根茎中鬼臼毒素的薄层色谱研究，需要进一步深入研究，以改善现有技术中存在的展开剂、显色剂以及显色操作等方面的问题，寻找满足要求的新鉴定方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：1.一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法，所述方法如下：首先，以桃儿七根茎配制成供试品溶液、鬼臼毒素配制成对照品溶液、体积比为3:2～6:5的石油醚和丙酮为展开剂；其次，将供试品溶液和对照品溶液按照薄层色谱层析法依次进行点样、展开和在波长为254nm的紫外光灯下检视，记录对照品溶液和供试品溶液在薄层板上出现的斑点位置，计算比移值Rf；最后，观察供试品溶液的薄层板是否在所述对照品溶液的比移值Rf处具有特征斑点，如果具有则说明所述桃儿七根茎中含有鬼臼毒素，如果不具有这说明所述桃儿七根茎中不含有鬼臼毒素。优选的，所述供试品溶液按照以下方法配制：取待鉴定的桃儿七根茎，粉碎后过40～100目筛得桃儿七根茎样品，精密称取，加入有机溶剂溶解后进行超声处理，过滤后将滤液蒸干，得到的残渣加有机溶剂充分溶解即可。优选的，所述桃儿七根茎样品与甲醇的质量体积比为0.45～0.55:10，g:ml。优选的，所述超声处理的时间不少于20min。优选的，所述对照品溶液按照以下方法配制：将所述鬼臼毒素与甲醇按照0.45～0.55:1，mg:ml的质量体积比进行混合溶解形成。进一步优选的，所述有机溶剂为甲醇。优选的，在展开之前先将所述展开剂在层析杠中进行15～20min的预饱和。优选的，所述薄层色谱层析法中采用的薄层板在使用前进行活化处理。进一步优选的，所述活化处理具体为在110℃下活化30min。优选的，所述点样过程中，点样的斑点直径不超过4mm、相邻斑点之间的间距不小于8mm。优选的，所述供试品溶液的点样量为1μl，所述对照品溶液的点样量为5μl。优选的，所述展开的具体操作为：将完成点样的薄层板置于层析杠中，浸入展开剂且展开剂不淹没斑点，上行展开，展开剂至薄层板顶端1～2cm时取出晾干即可。进一步优选的，所述展开过程在温度为4～30℃、湿度为32～88％的条件下进行。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法，主要将待鉴定的桃儿七根茎配制的供试品溶液与鬼臼毒素配制成对照品溶液进行薄层色谱层析法对比，采用体积比为3:2～6:5的石油醚和丙酮为展开剂、在波长为254nm的紫外光灯下检视即可得到鉴定结果。相比与现有技术(采用无基因毒性，但有动物致癌性的第二类溶剂氯仿和甲醇作为展开剂；采用10％硫酸乙醇喷雾、105℃加热显色)而言，本专利技术的方法采用的是对人体低毒的第三类溶剂为展开剂、并且配制方法简单，同时直接在波长为254nm的紫外光灯观察即可。因此本专利技术一方面能够改善现有技术中展开剂允许接触量的限制(按每日用药10g计算的每日允许接触量：氯仿为60ppm、甲醇为3000ppm)、简化展开剂的配制流程(体积比为15:1的氯仿和甲醇混合液的下层液，需要配制好溶剂后在分液漏斗中静置分取下层液)；另一方面还可以优化显色条件(现有技术显色中采用的硫酸具有强腐蚀性，且10％的硫酸乙醇使用时具有较强的刺激性，还需再105℃下加热，操作较繁琐)。因此本专利技术采用的鉴定方法具有操作安全、方便快捷的优点。本专利技术的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本专利技术的实践中得到教导。本专利技术的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作优选的详细描述，其中：图1为实施例1中薄层板的检视结果；图2为实施例2中薄层板的检视结果；图3为实施例3中薄层板的检视结果；图4为实施例4中薄层板的检视结果；图5为实施例5中薄层板的检视结果；图6为实施例6中不同薄层板的检视结果，其中a、b分别为青岛、武汉厂家生产的GF254薄层板。具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。需要说明的是,在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。实施例1一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法，其特征在于，所述方法如下：/n首先，以桃儿七根茎配制成供试品溶液、鬼臼毒素配制成对照品溶液、体积比为3:2～6:5的石油醚和丙酮为展开剂；/n其次，将所述供试品溶液和所述对照品溶液按照薄层色谱层析法依次进行点样、展开和在波长为254nm的紫外光灯下检视，记录对照品溶液和供试品溶液在薄层板上出现的斑点位置，计算比移值Rf；/n最后，观察供试品溶液的薄层板是否在所述对照品溶液的比移值Rf处具有特征斑点，如果具有则说明所述桃儿七根茎中含有鬼臼毒素，如果不具有这说明所述桃儿七根茎中不含有鬼臼毒素。/n

【技术特征摘要】
1.一种薄层色谱鉴定桃儿七中鬼臼毒素的方法，其特征在于，所述方法如下：
首先，以桃儿七根茎配制成供试品溶液、鬼臼毒素配制成对照品溶液、体积比为3:2～6:5的石油醚和丙酮为展开剂；
其次，将所述供试品溶液和所述对照品溶液按照薄层色谱层析法依次进行点样、展开和在波长为254nm的紫外光灯下检视，记录对照品溶液和供试品溶液在薄层板上出现的斑点位置，计算比移值Rf；
最后，观察供试品溶液的薄层板是否在所述对照品溶液的比移值Rf处具有特征斑点，如果具有则说明所述桃儿七根茎中含有鬼臼毒素，如果不具有这说明所述桃儿七根茎中不含有鬼臼毒素。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液按照以下方法配制：取待鉴定的桃儿七根茎，粉碎后过40～100目筛得桃儿七根茎样品，精密称取，加入有机溶剂进行溶解后再进行超声处理，过滤后将滤液蒸干，得到的残渣加有机溶剂溶解即可。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述桃儿七根茎样品与有机溶剂的质量体积比为0.45～0.55:10，g:ml。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超声处理的...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹妍琳，黄倩，谭小蓉，谭小燕，朱小龙，
申请(专利权)人：重庆三峡医药高等专科学校，
类型：发明
国别省市：重庆;50