新型外泌体释放相关靶点及其在监测和抑制肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种新型外泌体释放相关靶点及其在监测和抑制肿瘤中的应用。本发明专利技术揭示了衰老细胞产生的外泌体以及参与调控所述外泌体的一些生物分子，它们与肿瘤化疗治疗后的耐药性以及肿瘤预后密切相关。因此，本发明专利技术提供了新的抑制肿瘤、逆转肿瘤耐药性的靶点，已提新的肿瘤诊断和预后评估的标志物。

【技术实现步骤摘要】
新型外泌体释放相关靶点及其在监测和抑制肿瘤中的应用
本专利技术属于生物医药领域，更具体地，本专利技术涉及新型外泌体释放相关靶点及其在监测和抑制肿瘤中的应用。
技术介绍
衰老相关疾病主要包括恶性肿瘤及多种器官退行性疾病如心力衰竭、骨质疏松、关节炎、阿尔茨海默病、帕金森综合症等，是导致人类死亡的直接因素。其中恶性肿瘤近年来已经超越其它各种疾病，成为危害人类健康的头号杀手。与人类疾病密切关联的细胞衰老，最初由美国科学家Hayflick于19世纪60年代发现并提出，是以正常细胞增殖受阻、细胞周期停滞为主要特征的一个生命现象。之后，大量研究致力于探究细胞衰老的触发因素、信号通路、表型特征及对于多种疾病的影响机制。在多细胞生物中，细胞衰老与机体衰老有着不同的含义，但二者之间密切关联。机体衰老是生物体在退化时期自稳态失衡和修复能力下降的一种综合表现，细胞衰老则是细胞在内外环境多种因素的影响下发生结构损伤和功能紊乱而进入的一种被动状态。同新陈代谢一样，细胞衰老是客观存在的，属于细胞生命活动的基本规律。在正常生理条件下，细胞衰老可以由端粒缩短造成。然而，一系列理化刺激或者生物信号也能引发细胞衰老，例如电离辐射、化学药物、氧化应激和特定癌基因的表达等，但这些因素对细胞的影响普遍涉及DNA损伤等胁迫事件的发生。尤其重要的，慢性衰老细胞的蛋白质合成与代谢也发生了显著变化，即细胞进入一种强烈而持久的分泌状态，学界称之为衰老相关分泌表型(senescence-associatedsecretoryphenotype，SASP)，有别于以往报道过的急性胁迫应激现象(acutestress-associatedphenotype，ASAP)。SASP的发生发展受到DNA损伤分泌程序(DNAdamagesecretoryprogram，DDSP)的驱动，后者在几个方面有着显著性和独特性。尽管SASP分泌型细胞释放的效应因子可以激发体内局部组织的免疫反应，促进衰老细胞的清除，但更能显著改变周边微环境的结构和功能，加速肿瘤等衰老相关疾病的进展。以生命现象为目标、临床样本为核心开展的研究，可以揭示细胞衰老对于组织微环境的病理生理学意义。本专利技术人近年发现，抗癌过程中因药物副作用等理化因素造成病灶中肿瘤相关基质细胞DNA损伤并出现衰老特征的同时，伴随有WNT16B，SFRP2和SPINK1等可溶蛋白的高度合成与大量释放(典型SASP特征)，可以引起病灶内部癌细胞Twist，Snail和Smad等转录因子的表达上调，最终加速癌细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)。越来越多的数据验证了临床条件下肿瘤的这一发展规律，即以DNA为靶向目标的化疗、放疗或干扰DDR相关通路的靶向治疗等当代临床常规手段在治疗过程中所起的脱靶作用可以激活肿瘤微环境、造成基质细胞衰老并形成SASP分泌表型，后者对于癌细胞在各阶段所表现出来的增殖率、迁移率、侵袭性和异质性等恶性特征的发生发展具有不可忽视的病理作用，客观上赋予了癌细胞以获得性耐药和高度转移潜力。研究实践中，细胞衰老以及肿瘤发生发生的机理极为复杂，本领域迫切需要从中找到规律，发现新的调控机制，在此基础上获得有用的临床药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供新型外泌体释放相关靶点及其在监测和抑制肿瘤中的应用。在本专利技术的第一方面，提供SIRT1的应用，用于：作为调控外泌体的合成、释放或活性的靶点；作为筛选调控外泌体的合成、释放或活性的物质的靶点；制备调控外泌体的合成、释放或活性的调节剂；作为肿瘤诊断或预后的标志物(细胞(如基质细胞)、组织中或体液(如血液)中)；或制备肿瘤诊断或预后的诊断试剂；其中，所述外泌体为衰老细胞分泌的外泌体。在一个优选例中，所述衰老细胞为衰老的基质细胞；所述衰老细胞分泌的外泌体携带的小RNA分子组分不同于增殖态细胞；或所述调控外泌体的合成、释放或活性为下调(包括抑制或阻滞)外泌体的合成、释放或活性。在本专利技术的另一方面，提供SIRT1上调剂(包括激动剂)的应用，用于：制备下调外泌体的合成、释放或活性的组合物，所述外泌体为衰老细胞分泌的外泌体；制备降低肿瘤耐药性(对化疗药物的耐药性)的组合物；或制备抑制肿瘤的药物组合物或药盒；较佳地，所述药物组合物或药盒中还包括肿瘤化疗药物。在本专利技术的另一方面，提供一种用于抑制肿瘤的药物组合物或药盒，包括：SIRT1上调剂和肿瘤化疗药物。较佳地，该药物组合物还包括药学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的SIRT1上调剂包括增强SIRT1活性的物质或增强SIRT1的表达、稳定性或延长其有效作用时间的物质；较佳地，所述SIRT1上调剂包括(但不限于)：重组表达SIRT1的构建物，SIRT1的化学激动剂，促进SIRT1基因启动子驱动能力的上调剂、SIRT1基因特异性的过表达多肽、靶向抑制SIRT1基因的microRNA的下调剂；更佳地，所述的化学激动剂包括：SRT2104、SRT1720、SRT2183、SRT3025、CAY10602、Bay11-7082、QNZ(EVP4593)、Curcumin或Diethylmaleate。在另一优选例中，所述的化疗药物为在给药后发生肿瘤耐药的化疗药物；较佳地是基因毒药物；更佳地包括：米托蒽醌，阿霉素，博莱霉素，沙铂，顺铂，卡铂，道诺霉素，诺加霉素，阿柔比星，表柔比星，多柔比星，阿糖胞苷，卡培他滨，吉西他滨或5-氟尿嘧啶，紫杉醇，长春新碱。在另一优选例中，所述的肿瘤包括：前列腺癌，乳腺癌，肺癌，结直肠癌，胃癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌、皮肤癌，肾癌。在另一优选例中，所述SIRT1上调剂和肿瘤化疗药物按照摩尔比(或质量比)为：1:0.0001～1:1；较佳地为1:0.0005～1:0.5；更佳地为1:0.001～1:0.1，如1:0.002(用于给药时)。在另一优选例中，所述的肿瘤化疗药物的终浓度为：0.01～200μM；较佳地0.05～150μM；更佳地0.08～100μM(如0.1、0.2、0.5、1、1.5、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、60、80μM)(体外细胞处理时)。在另一优选例中，所述SIRT1上调剂的终浓度为：0.5～80uM；较佳地1～50uM；更佳地5～20uM。在另一优选例中，所述的肿瘤化疗药物优选的终浓度为(体外细胞处理时)：米托蒽醌1uM,沙铂，顺铂，卡铂100uM,博来霉素50ug/ml，其它药物均为10uM；可上下浮动80％、70％、50％、40％、30％、20％或10％。在另一优选例中，所述SIRT1上调剂的终浓度优选为(体外细胞处理时)：10uM；可上下浮动80％、70％、50％、40％、30％、20％或10％。在本专利技术的另一方面，提供一种筛选下调外泌体的合成、释放或活性或降低肿瘤耐药性的潜在物质的方法，所述方法包括：(1)用候选物质处理一表达体系，该体系表达SIRT1；和(2)检测所述体系中SIRT1的表达或活性；若所述候选物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.SIRT1的应用，用于：/n作为调控外泌体的合成、释放或活性的靶点；/n作为筛选调控外泌体的合成、释放或活性的物质的靶点；/n制备调控外泌体的合成、释放或活性的调节剂；/n作为肿瘤诊断或预后的标志物；或/n制备肿瘤诊断或预后的诊断试剂；/n其中，所述外泌体为衰老细胞分泌的外泌体。/n

【技术特征摘要】
1.SIRT1的应用，用于：
作为调控外泌体的合成、释放或活性的靶点；
作为筛选调控外泌体的合成、释放或活性的物质的靶点；
制备调控外泌体的合成、释放或活性的调节剂；
作为肿瘤诊断或预后的标志物；或
制备肿瘤诊断或预后的诊断试剂；
其中，所述外泌体为衰老细胞分泌的外泌体。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述衰老细胞为衰老的基质细胞；
所述衰老细胞分泌的外泌体携带的小RNA分子组分不同于增殖态细胞；或
所述调控外泌体的合成、释放或活性为下调外泌体的合成、释放或活性。


3.SIRT1上调剂的应用，用于：
制备下调外泌体的合成、释放或活性的组合物，所述外泌体为衰老细胞分泌的外泌体；
制备降低肿瘤耐药性的组合物；或
制备抑制肿瘤的药物组合物或药盒；较佳地，所述药物组合物或药盒中还包括肿瘤化疗药物。


4.一种用于抑制肿瘤的药物组合物或药盒，其特征在于，包括：SIRT1上调剂和肿瘤化疗药物。


5.如权利要求3或4，其特征在于，所述的SIRT1上调剂包括增强SIRT1活性的物质或增强SIRT1的表达、稳定性或延长其有效作用时间的物质；较佳地，所述SIRT1上调剂包括：重组表达SIRT1的构建物，SIRT1的化学激动剂，促进SIRT1基因启动子驱动能力的上调剂、SIRT1基因特异性的过表达多肽、靶向抑制SIRT1基因的microRNA的下调剂；更佳地，所述的化学激动剂包括：SRT2104、SRT1720、SRT2183、SRT3025、CAY10602、Bay11-7082、QNZ、Curcumin或Diethylmaleate；或
所述的化疗药物为在给药后发生肿瘤耐药的化疗药物；较佳地是基因毒药物；更佳地包括：米托蒽醌，阿霉素，博莱霉素，沙铂，顺铂，卡铂，道诺霉素，诺加霉素，阿柔比星，表柔比星，多柔比星，阿糖胞苷，卡培他滨，吉西他滨或5-氟尿嘧啶，紫杉醇，长春新碱；或
所述的肿瘤包括：前列腺癌，乳腺癌，肺癌，结直肠癌，胃癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌、皮肤癌，肾癌。


6.如权利要求3或4，其特征在于，所述SIRT1上调剂和肿瘤化疗药物按照摩尔比为：1:0.0001～1:1；较佳地为1:0.0005～1:0.5；更佳地为1:0.001～1:0.1，如1:0.002；或
所述的肿瘤化疗药物的终浓度为：0.01～200μM；较佳地0.05～150μM；更佳地0.08～100μM；或
所述SIRT1上调剂的终浓度为：0.5～80uM；较佳地1～50uM；更佳地5～20uM。


7.一种筛选下调外泌体的合成、释放或活性或降低肿瘤耐药性的潜在物质的方法，所述方法包括：
(1)用候选物质处理一表达体系，该体系表达SIRT1；和
(2)检测所述体系中SIRT1的表达或活性；若所述候选物质在统计学上提高SIRT1的表达或活性，则表明该候选物质是下调外泌体的合成、释放或活性或降低肿瘤耐药性的潜在物质。


8.一种筛选降低肿瘤耐药性的潜在物质的方法，所述方法包括：
(1’)用候选物质处理一表达体系，该体系存在衰老细胞且分泌外泌体，同时该体系还表达SIRT1；和
(2’)检测所述体系中SIRT1对于外泌体的调控作用；若所述候选物质在统计学上促进SIRT1对于外泌体的合成、释放或活性的下调作用，则该候选物质是降低肿瘤耐药性的潜在物质。


9.特异性识别或扩增SIRT1的试剂的用途，用于制备肿瘤诊断或预后的诊断试剂或试剂盒；较佳地，所述的SIRT1为基质细胞的SIRT1。


10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的诊断试剂包括：特异性结合SIRT蛋白的结合分子；特异性扩增SIRT1基因的引物；特异性识别SIRT1基因的探针；或特异性识别SIRT1基因的芯片。


11.衰老细胞分泌的外泌体的应用，用于：
作为调控肿瘤耐药性的靶点；
作为筛选调控肿瘤耐药性的物质的靶点；
作为肿瘤诊断或预后的标志物；或
制备肿瘤诊断或预后的诊断试剂；
较佳地，所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宇，韩柳，
申请(专利权)人：中国科学院上海营养与健康研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31