一株枯草芽孢杆菌、菌剂、菌液提取物及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZD01，保藏编号为：CGMCC No.19555。本发明专利技术的枯草芽孢杆菌ZD01能有效抑制马铃薯早疫病菌的菌丝生长，并导致菌丝生长畸形，适宜条件下能抑制马铃薯早疫病孢子的萌发以发挥抑菌作用。枯草芽孢杆菌ZD01发酵液对马铃薯黑痣病菌、梨黑斑病菌、小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌、小麦根腐病菌、苹果斑点落叶病菌和马铃薯疮痂病菌也具有良好的抑菌效果；枯草芽孢杆菌ZD01菌液的脂肽粗提物对于小麦赤霉病菌和番茄灰霉病菌的的抑菌效果较好。

【技术实现步骤摘要】
一株枯草芽孢杆菌、菌剂、菌液提取物及制备方法和应用
本专利技术涉及植物病害防治
，尤其涉及一株枯草芽孢杆菌、菌剂、菌液提取物及制备方法和应用。
技术介绍
马铃薯在我国居民膳食结构中占据重要位置，是继玉米、水稻、小麦之后的主要粮食作物。随着马铃薯种植效益的逐步提高、种植面积不断扩大，加之倒茬困难，使得连作障碍等问题日益严重，马铃薯病害也随之加重，其中以被认为是仅次于马铃薯晚疫病第二大真菌病害的马铃薯早疫病问题尤为突出。目前国内外对马铃薯早疫病的防治主要通过化学防治，，但长期或过量使用导致病原菌抗药性增强、农药残留和生态环境污染等问题日益严重，因此亟须寻找环境友好型生物防治的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株枯草芽孢杆菌、菌剂及制备方法和应用，本专利技术的枯草芽孢杆菌能够有效抑制马铃薯早疫病菌。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ZD01，保藏编号为：CGMCCNo.19555。本专利技术提供了一种包括上述方案所述枯草芽孢杆菌的菌剂。优选的，所述菌剂中枯草芽孢杆菌的有效活菌数为1×108～1×1010cfu/mL。本专利技术提供了一种上述方案所述枯草芽孢杆菌的菌液脂肽粗提物。优选的，所述菌液脂肽粗提物包括表面活性素和丰原素。本专利技术提供了上述方案所述菌液脂肽粗提物的制备方法，包括以下步骤:1)对枯草芽孢杆菌ZD01的菌液进行离心，收集上清液，调节所述上清液的pH值至2.0后，4℃静置9～16h，离心，收集沉淀；2)用甲醇溶解所述沉淀，用0.22μm滤膜过滤，收集滤液，得到脂肽粗提物。本专利技术提供了上述方案所述的枯草芽孢杆菌或者所述菌剂或者所述菌液脂肽粗提物在广谱抑制植物致病菌中的应用。优选的，所述植物致病菌包括马铃薯早疫病菌、马铃薯黑痣病菌、梨黑斑病菌、小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌、小麦根腐病菌、苹果斑点落叶病菌和马铃薯疮痂病菌中的一种或几种。优选的，所述枯草芽孢杆菌、菌剂或脂肽粗提物通过抑制植物致病菌菌丝生长和/或抑制植物致病菌孢子的萌发来防治马铃薯早疫病菌。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ZD01，保藏编号为：CGMCCNo.19555。本专利技术的枯草芽孢杆菌ZD01能有效抑制马铃薯早疫病菌的菌丝生长，并导致菌丝生长畸形，适宜条件下能抑制马铃薯早疫病孢子的萌发以发挥抑菌作用。枯草芽孢杆菌ZD01发酵液对马铃薯黑痣病菌、梨黑斑病菌、小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌、小麦根腐病菌、苹果斑点落叶病菌和马铃薯疮痂病菌也具有良好的抑菌效果；枯草芽孢杆菌ZD01菌液的脂肽粗提物对于小麦赤霉病菌和番茄灰霉病菌的的抑菌效果较好。枯草芽孢杆菌ZD01发酵液对小麦赤霉病菌、小麦根腐病菌的抑菌率分别55.32％、59.32％，现有技术的木霉菌T-115D(高丽辉.木霉菌T-115D的发酵液对茄链格孢菌的抑制作用及防病效果研究[D].黑龙江八一农垦大学，2010.)的发酵液对小麦赤霉病菌、小麦赤霉病菌抑菌率仅为51.0％、45.9％，枯草芽孢杆菌ZD01抑菌效果明显优于木霉菌T-115D。生物保藏说明枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ZD01，于2020年04月07日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCCNo.19555。附图说明图1为不同浓度发酵液对早疫病菌拮抗结果图示；图2为不同浓度菌株ZD01脂肽粗提物对早疫病菌拮抗试验结果图示；图3为枯草芽孢杆菌ZD01发酵液对不同植物病原菌的抑菌活性测定结果；图4为枯草芽孢杆菌ZD01的脂肽粗提物对不同植物病原菌抑菌效果图；图5为枯草芽孢杆菌ZD01的发酵液和脂肽粗提物对马铃薯早疫病菌菌丝形态影响的扫描电镜图示；图6为枯草芽孢杆菌ZD01发酵液对马铃薯早疫病菌孢孢子萌发的影响情况；图7为对照组马铃薯早疫病菌孢孢子萌发情况；图8为不同处理叶片中马铃薯早疫病菌的拷贝数；图9为马铃薯叶片接种早疫病菌后与菌株ZD01拮抗的病斑面积；图10为不同处理叶片的实物图；图11为高效液相色谱法对脂肽纯品surfactins的测定结果；图12为高效液相色谱法对脂肽纯品fengycins的测定结果；图13为高效液相色谱法(HPLC)对枯草芽孢杆菌ZD01的脂肽粗提物的纯化鉴定结果；图14为表面活性素及丰原素纯品对马铃薯早疫病菌抑菌活性测定结果。具体实施方式本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ZD01，保藏编号为：CGMCCNo.19555。本专利技术提供了一种包括上述方案所述枯草芽孢杆菌的菌剂；所述菌剂中枯草芽孢杆菌的有效活菌数优选为1×108～1×1010cfu/mL。本专利技术中，所述菌剂优选的采用以下制备方法得到：将枯草芽孢杆菌ZD01单菌落接种于20mLLB培养基进行培养，得到菌剂；所述培养的温度优选为37℃，时间优选为24h；所述培养的方式优选为震荡培养，所述震荡的转速优选为200rmp。本专利技术提供了一种上述方案所述枯草芽孢杆菌的菌液的脂肽粗提物；所述菌液脂肽粗提物优选的包括表面活性素和丰原素。本专利技术提供了上述方案所述菌液脂肽粗提物的制备方法，包括以下步骤:1)对枯草芽孢杆菌ZD01的菌液进行离心，收集上清液，调节所述上清液的pH值至2.0后，4℃静置9～16h，离心，收集沉淀；2)用甲醇溶解所述沉淀，用0.22μm滤膜过滤，收集滤液，得到脂肽粗提物。本专利技术首先对枯草芽孢杆菌ZD01的菌液进行离心，收集上清液，调节所述上清液的pH值至2.0后，4℃静置9～16h，离心，收集沉淀；所述菌液优选的采用以下制备方法得到：将枯草芽孢杆菌ZD01单菌落接种于20mLLB培养基进行培养，得到菌液；所述培养的温度优选为37℃，时间优选为24h；所述培养的方式优选为震荡培养，所述震荡的转速优选为200rmp。本专利技术中，所述离心的温度优选为4℃，转速优选为8000rmp，时间优选为15～25min，更优选为20min；所述静置的时间优选为12h。得到沉淀后，本专利技术用甲醇溶解所述沉淀，用0.22μm滤膜过滤，收集滤液，得到脂肽粗提物。本专利技术提供了上述方案所述的枯草芽孢杆菌或者所述菌剂或者所述菌液脂肽粗提物在广谱抑制植物致病菌中的应用；所述植物致病菌优选的包括马铃薯早疫病菌、马铃薯黑痣病菌、梨黑斑病菌、小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌、小麦根腐病菌、苹果斑点落叶病菌和马铃薯疮痂病菌中的一种或几种；所述枯草芽孢杆菌、菌剂或脂肽粗提物优选的通过抑制植物致病菌菌丝生长和/或抑制植物致病菌孢子的萌发来防治马铃薯早疫病菌。本专利技术中，所述菌剂对马铃薯黑痣病菌、梨黑斑病菌、小麦赤霉病菌、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZD01，保藏编号为：CGMCC No.19555。/n

【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ZD01，保藏编号为：CGMCCNo.19555。


2.一种包括权利要求1所述枯草芽孢杆菌的菌剂。


3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂中枯草芽孢杆菌的有效活菌数为1×108～1×1010cfu/mL。


4.一种权利要求1所述枯草芽孢杆菌的菌液脂肽粗提物。


5.根据权利要求4所述的脂肽粗提物，其特征在于，所述菌液脂肽粗提物包括表面活性素和丰原素。


6.权利要求4或5所述菌液脂肽粗提物的制备方法，包括以下步骤:
1)对枯草芽孢杆菌ZD01的菌液进行离心，收集上清液，调节所述上清液的pH值...

【专利技术属性】
技术研发人员：张岱，杨志辉，潘阳，桂秀梅，王金辉，于水清，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：河北;13